賈燕花，高 磊，王曉青，劉皈陽

0 引言

雙氯芬酸鈉為非甾體抗炎鎮(zhèn)痛藥，其通過抑制環(huán)氧合酶減少前列腺素的合成，以及一定程度上抑制脂氧酶而減少白三烯、緩激肽等產(chǎn)物的生成而發(fā)揮解熱鎮(zhèn)痛及抗炎作用［1-3］。雙氯芬酸鈉凝膠臨床上主要用于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎的癥狀緩解，其主要成分為雙氯芬酸鈉。為了控制雙氯芬酸鈉凝膠的質(zhì)量，保證臨床用藥效果，筆者在原標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上進行優(yōu)化，建立了HPLC外標(biāo)法用于測定雙氯芬酸鈉凝膠中雙氯芬酸鈉的含量。

1 儀器與方法

1.1 實驗儀器 1100高效液相色譜儀(Agilent公司);PHS-3E pH計(雷磁);UNICO-2102C紫外分光光度計(上海UNICO儀器有限公司);BT25S電子天平(賽多利斯)。

1.2 試劑與藥品 HPLC級甲醇(上海星可生化有限公司);AR磷酸(北京化工廠);AR磷酸二氫鉀(北京化工廠);雙氯芬酸鈉對照品(中國藥品生物制品鑒定所，批號:100334-200302);聯(lián)苯雙酯對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:100192-200503);雙氯芬酸鈉凝膠(解放軍總醫(yī)院第304臨床部，批號:130729、130730-1、130730-2)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)試用性試驗 色譜柱:Agilent Eclipse XRD-C18(4.6 mm ×250 mm，5 μm);流動相:甲醇 －0.005 mol/L磷酸二氫鉀溶液(pH=3.8)(70∶30);檢測波長:280 nm。精密量取對照品溶液10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，雙氯芬酸鈉峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)不小于2.0，理論塔板數(shù)按雙氯芬酸鈉計算應(yīng)不低于2 000。見圖1。

2.2 對照品溶液的制備 取雙氯芬酸鈉對照品適量(約20 mg)，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋成40 μg/mL的溶液，制備成對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取本品適量(約相當(dāng)于雙氯芬酸鈉20 mg)，加甲醇適量，攪拌使雙氯芬酸鈉溶解，轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液1 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.4 線性關(guān)系考察 按照“2.1”項下色譜條件，精密量取對照品適量(約相當(dāng)于雙氯芬酸鈉20 mg)，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取10 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為線性儲備液。分別精密量取線性儲備液 2、3、4、5、6、7 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為線性考察的供試液，依次精密量取10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積(Y)對濃度(X)作線性回歸，得回歸方程:Y=23.01 X－27.06(r=0.999 0)。結(jié)果表明，雙氯芬酸鈉在15.90～55.41 μg/mL時，與峰面積的線性關(guān)系良好。

圖1 雙氯芬酸鈉凝膠高效液相色譜圖注:A.輔料，B.溶劑，C.對照品，D.供試品

2.5 精密度試驗 精密吸取10 μL對照品溶液，連續(xù)進樣6次，記錄色譜峰面積，其峰面積的RSD為0.58%。

2.6 重復(fù)性試驗 精密量取供試品適量，依次制備6份供試品溶液，按“2.1”項下方法測定，按外標(biāo)法計算含量(以雙氯芬酸鈉計)，平均含量為99.67%，RSD=0.58%，該方法可靠，重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 精密量取對照品溶液10 μL，分別于 0、4、12、24、72 h 進樣，記錄色譜峰面積。雙氯芬酸鈉峰面積的RSD為0.25%，表明供試品溶液在72 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗 分別精密稱取對照品適量(相當(dāng)于雙氯芬酸鈉16、20、24 mg)，置50 mL量瓶中，按處方比例加入輔料，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取1 mL溶液，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得供試品溶液，每個濃度制備3份，按“2.1”項下方法，測定雙氯芬酸鈉的含量，計算回收率。平均回收率為100.48%，RSD=1.28%。見表1。

表1 回收率試驗結(jié)果

2.9 樣品測定 取雙氯芬酸鈉凝膠，按“2.1”項下色譜條件，分別取10 μL供試品溶液和對照品溶液，分別進樣。以峰面積按外標(biāo)法計算含量，測得3批樣品的含量分別為100.32%、101.66%、99.43%。平均含量為100.47%。

3 討論

筆者根據(jù)雙氯芬酸鈉凝膠劑的特點，通過對比雙氯芬酸鈉片、雙氯芬酸鈉栓劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［4］含量測定項下的色譜條件和雙氯芬酸鈉凝膠質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［5］含量測定色譜條件，依據(jù)《藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗證指導(dǎo)原則》(中國藥典2010版二部附錄XIXA)［6］進行方法學(xué)驗證。本品采用雙氯芬酸鈉片含量測定色譜條件未能將雙氯芬酸鈉洗脫，而采用雙氯芬酸鈉凝膠軍規(guī)，原含量測定色譜條件空白輔料峰與主成分峰完全分離，但內(nèi)標(biāo)物聯(lián)苯雙酯峰未能與輔料完全分離。所以參考雙氯芬酸鈉凝膠含量測定色譜條件，改用外標(biāo)法作為本品的含量測定方法。

本研究同時考察了該方法的耐用性，通過改變流速、波長、流動相比例、流動相pH值及色譜柱，測定供試品中雙氯芬酸鈉的含量，呈現(xiàn)良好的結(jié)果，該方法適用于雙氯芬酸鈉凝膠中雙氯芬酸鈉的含量測定。

［1］ 高曉波，張洪.HPLC法測定雙氯芬酸鈉水凝膠中雙氯芬酸的含量［J］.湖北醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報，2011，30(1):75-77.

［2］ 喬明艷.國內(nèi)雙氯芬酸鈉制劑開發(fā)概況［J］.實用藥物與臨床，2010，13(5):379-380.

［3］ 黃紅深.用高效液相色譜法測定雙氯芬酸鈉的雜質(zhì)［J］.北方藥學(xué)，2011，8(1):3-4.

［4］ 中國藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:73-74.

［5］ 中國人民解放軍總后勤部衛(wèi)生部.中國人民解放軍醫(yī)療機構(gòu)制劑規(guī)范［S］.北京:人民軍醫(yī)出版社，2002:附錄14.

［6］ 中國藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄194.