張秀忠，丁偉超，張蓬波，張 沖，任澤強(qiáng)

0 引 言

近年來(lái)，我國(guó)的胰腺癌發(fā)病率已呈逐漸上升趨勢(shì)［1］。迄今為止，胰腺癌仍是最難診斷和治療的惡性腫瘤之一［2－3］。因其具有臨床癥狀的不典型和發(fā)病較隱匿等特點(diǎn)，加之老年人對(duì)腹部疼痛不適等癥狀不敏感，對(duì)早期發(fā)現(xiàn)疾病造成很大困難。因此，分析研究老年患者胰腺癌的發(fā)病機(jī)制、探索有效的早期診斷指標(biāo)及預(yù)后評(píng)價(jià)指標(biāo)有重要的臨床意義。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)法(streptavidin-perosidase，SP)對(duì)老年患者胰腺癌組織進(jìn)行泛素特異性蛋白酶9X(ubiquitin-specific protease 9X，USP9X)檢測(cè)，旨在探討USP9X 的表達(dá)與老年患者胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院2006－2010 年行根治性手術(shù)切除的老年患者(年齡≥60 歲)胰腺導(dǎo)管腺癌標(biāo)本30 例。其中，男18 例，女12 例，年齡60 ～85歲，平均年齡(68.93±6.78)歲。高分化+中分化腺癌和低分化腺癌分別為22 例和8 例;TNM 分期Ⅰ期和Ⅱ～Ⅳ期分別為15 例和15 例。選取距離腫瘤邊緣2 cm 以上的組織作為癌旁非腫瘤標(biāo)本。所有患者均獲隨訪，隨訪日期截止至2013 年12 月，隨訪方式為電話(huà)、書(shū)信隨訪或/和門(mén)診復(fù)查。納入標(biāo)準(zhǔn):①經(jīng)病理診斷為原發(fā)性胰腺導(dǎo)管腺癌;②術(shù)前均未行放療、化療及免疫治療。排除標(biāo)準(zhǔn):①其他病理類(lèi)型的胰腺癌;②術(shù)前行其他特殊治療者。

1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑和儀器 兔抗人USP9X 單克隆抗體、鏈霉素抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶(SP)試劑盒、濃縮型3，3-二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色劑均購(gòu)于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司;所使用免疫組織化學(xué)專(zhuān)用濕盒購(gòu)于海門(mén)志達(dá)實(shí)驗(yàn)器材公司，抗原修復(fù)盒購(gòu)于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，光學(xué)顯微鏡購(gòu)于日本Olympus 公司，正置熒光顯微鏡購(gòu)于尼康(中國(guó))公司。

1.3 免疫組織化學(xué)檢測(cè) 采用SP 法，具體步驟按照SP 試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。USP9X 抗體工作濃度為1∶100，4 ℃過(guò)夜。細(xì)胞質(zhì)和/或細(xì)胞膜染成棕黃色為陽(yáng)性。每張切片任選5 個(gè)400 倍光鏡視野觀察。免疫組織化學(xué)結(jié)果評(píng)分［4］如下:不著色計(jì)0 分，淺黃色計(jì)1 分，棕黃色計(jì)2 分，棕褐色計(jì)3 分;著色細(xì)胞占計(jì)數(shù)細(xì)胞的百分率為0 計(jì)0 分，≤10%計(jì)1 分，10%～50%計(jì)2 分，51%～80%計(jì)3 分，≥80%計(jì)4 分;每張切片平均染色程度得分與平均染色細(xì)胞百分率得分各自相乘為最后得分;≤4 分為陰性，＞4 分為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS16.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，定性資料采用χ2檢驗(yàn)或Fisher 確切概率法。單因素與多因素生存分析采用Cox 比例風(fēng)險(xiǎn)模型(單因素分析中P ＜0.05 的變量納入多因素分析)。以P≤0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 USP9X 的表達(dá)及其與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系

30 例胰腺癌組織中17 例USP9X 表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性率56.7%，癌旁非腫瘤組織中均未見(jiàn)USP9X 表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)。見(jiàn)圖1。

USP9X 的表達(dá)與患者的性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小及腫瘤分化程度無(wú)關(guān)(P ＞0.05)，而與有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM 分期顯著相關(guān)(P ＜0.05)。見(jiàn)表1。

圖1 USP9X 在胰腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)(SP ×400)Figure 1 USP9X positive expression in pancreatic carcinoma tissue(SP ×400)

表1 USP9X 的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系(n)Table 1 The relationship between expression of USP9X and clinicopathological parameters(n)

2.2 老年胰腺癌患者預(yù)后的COX 比例風(fēng)險(xiǎn)分析單因素COX 比例風(fēng)險(xiǎn)分析顯示，TNM 分期、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及USP9X 表達(dá)影響胰腺癌患者臨床預(yù)后(P ＜0.05)。見(jiàn)表2。

多因素COX 比例風(fēng)險(xiǎn)分析顯示，TNM 分期、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及USP9X 表達(dá)是影響預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P ＜0.05)。見(jiàn)表3。

表2 老年胰腺癌患者的單因素COX 比例風(fēng)險(xiǎn)分析Table 2 The univariate Cox proportional hazards analysis in pancreatic carcinoma of elderly patients

表3 老年胰腺癌患者的多因素COX 比例風(fēng)險(xiǎn)分析Table 3 The multivariate Cox proportional hazards analysis in pancreatic carcinoma of elderly patients

3 討 論

作為去泛素化酶家族的亞家族泛素特異性蛋白酶的成員之一［5－6］，USP9X 與一些腫瘤的生物學(xué)行為密切相關(guān)［7－8］。Schwickart 等［9］研究表明，USP9X通過(guò)穩(wěn)定抗凋亡蛋白MCL-1，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng);同時(shí)也可通過(guò)穩(wěn)定凋亡信號(hào)調(diào)控激酶，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡［10］。Trivigno 等［11］研究認(rèn)為，USP9X 穩(wěn)定抗凋亡蛋白MCL-1，可能是腫瘤細(xì)胞對(duì)放療產(chǎn)生耐受的機(jī)制之一。而Harris 等［12］研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)降低USP9X 表達(dá)，可以激活結(jié)腸癌細(xì)胞的凋亡信號(hào)通路，并增強(qiáng)5-氟尿嘧啶(5-FU)的化療作用。

眾所周知，胰腺癌是一種發(fā)展十分迅速、惡性程度極高的消化系腫瘤，因其早期診斷困難且預(yù)后差，已成為威脅人類(lèi)健康的重要疾病之一［13－14］。關(guān)于USP9X 與胰腺癌的關(guān)系，既往報(bào)道少見(jiàn)。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP 法對(duì)老年患者胰腺癌組織進(jìn)行USP9X 檢測(cè)。結(jié)果顯示:30 例胰腺癌組織中17 例USP9X 表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性率56.7%，癌旁非腫瘤組織中未見(jiàn)表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05);USP9X 的表達(dá)與患者的性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小及腫瘤分化程度無(wú)關(guān)(P ＞0.05)，而與有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM 分期顯著相關(guān)(P ＜0.05)。USP9X 在胰腺癌組織中表達(dá)陽(yáng)性，在癌旁非腫瘤組織中不表達(dá)，提示USP9X 在老年患者胰腺癌的發(fā)生中發(fā)揮了重要作用;胰腺癌組織中USP9X 表達(dá)與有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期顯著相關(guān)，提示USP9X 在老年患者胰腺癌的發(fā)展過(guò)程中也發(fā)揮重要作用，USP9X 表達(dá)陽(yáng)性的胰腺癌組織可能具有更強(qiáng)的侵襲性。此外，COX 比例風(fēng)險(xiǎn)分析顯示，TNM 分期、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及USP9X 表達(dá)是影響預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P ＜0.05)。

綜上所述，USP9X 在老年患者胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后中發(fā)揮重要作用，有望成為胰腺癌有效的診斷與預(yù)后評(píng)價(jià)指標(biāo)，有助于指導(dǎo)老年胰腺癌患者術(shù)后的綜合治療與隨訪，改善患者的預(yù)后。

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