秦黎明 李啟彬

·實驗研究·

HPLC法同時測定利膽排石片中4種蒽醌類成分的含量探索

秦黎明 李啟彬

目的探討高效液相色譜法(HPLC)同時對利膽排石片中4種蒽醌類成分含量測定情況。方法 指定具有豐富經(jīng)驗及專業(yè)知識的實驗室檢驗人員完成各批次利膽排石片中4種蒽醌類成分含量檢測工作, 將所得數(shù)據(jù)經(jīng)專業(yè)分析后獲得結(jié)論。結(jié)果 各批次利膽排石片中大黃酸、大黃酚、大黃素、大黃素甲醚等4種蒽醌類成分含量經(jīng)HPLC測定后對比, 差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論 利膽排石片經(jīng)HPLC可同時對其4種蒽醌類成分含量進行準(zhǔn)確測定, 有利于提高藥品質(zhì)量控制效果, 保障患者療效及預(yù)后。

利膽排石片；高效液相色譜法；蒽醌類；含量測定

利膽排石片是臨床常用的膽囊炎、膽結(jié)石治療藥物, 屬于純中藥制劑。本文將探討HPLC同時對利膽排石片中4種蒽醌類成分含量測定情況, 為提高利膽排石片質(zhì)量控制效果提供可靠依據(jù), 現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 試劑及儀器 ①試劑：廣州白云山和記黃埔中藥有限公司提供利膽排石片(批號20140521、20140809、20141217)、中國藥品生物制品檢定所提供4種蒽醌類成分對照品(大黃素、大黃酸、大黃素甲醚、大黃酚)、超純水、色譜純(甲醇)；②儀器：美國惠普公司(Hewlett-Packard Development Company, L.P., 簡稱HP)提供1100型高效液相色譜儀、美國沃特世公司(Waters)提供紫外檢測器及Empower色譜工作站、德國賽多利斯集團(sartorius)提供cp 225D 電子天平, 大連依利特分析儀器有限公司提供SinoChron ODS-BP色譜柱(規(guī)格5 μm, 4.6 mm×200 mm)。

1.2 方法［1］指定具有豐富經(jīng)驗及專業(yè)知識的實驗室檢驗人員完成各批次利膽排石片中4種蒽醌類成分含量檢測工作。具體操作為：①制備對照品溶液：取對照品精密稱量后放置于量瓶中(規(guī)格10 ml)并加入1 ml三氯甲烷, 震蕩溶解并稀釋定容后即得對照品儲備液, 取適量稀釋并制成對照品混合溶液, 其中大黃素甲醚、大黃酚、大黃素、大黃酸濃度分別為81.30、112.0、303.0、70.70 μg/ml；②制備供試品溶液：精密稱定0.15 g利膽排石片(粉末)并加入25 ml甲醇定量, 給予1 h加熱回流處理后自然冷卻, 稱重后利用甲醇補足失去重量, 搖晃使之混合均勻后過濾, 精密稱取5 ml濾液并放置于燒瓶中, 將溶劑揮發(fā)后加入8%、10 ml鹽酸溶液(分析純)并給予2 min超聲處理, 之后加入10 ml三氯甲烷并再次給予1 h加熱回流, 待自然冷卻后放置于分液漏斗中, 將容器經(jīng)三氯甲烷洗滌后洗滌液放入同一分液漏斗,將三氯甲烷層分取并對酸液給予3次三氯甲烷提取(10 ml/次), 將提取液混合后減壓回收, 殘渣中加入1 ml三氯甲烷使之溶解并將其置于量瓶中(規(guī)格10 ml), 甲醇定容并搖勻,取濾液即得供試品溶液；③含量檢測：波長調(diào)整為254 nm,色譜柱溫度設(shè)定為試問, 進樣量10 μl, 流動相為甲醇-0.1%磷酸溶液(分析純)(80∶20, 流速1.0 ml/min)回歸方程分別為大黃素甲醚Y=5.774×104X-4.083×103(r=0.9996)、大黃酚Y=8.145×104X-2.212×104(r=0.9997)、大黃素Y=5.698× 104X-8.351×103(r=0.9998)、大黃酸Y=3.515× 104X-3.809×103 (r=0.9999)。記錄各批次利膽排石片中4種蒽醌類成分含量檢測結(jié)果, 將所得數(shù)據(jù)經(jīng)專業(yè)分析后獲得結(jié)論。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示, 采用t檢驗；計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

各批次利膽排石片中大黃酸、大黃酚、大黃素、大黃素甲醚等4種蒽醌類成分含量經(jīng)高效液相色譜法測定后對比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05), 提示各批次利膽排石片質(zhì)量控制效果良好。見表1。

表1 各批次利膽排石片4種蒽醌類成分含量測定情況分析

3 討論

利膽排石片組成成分包括木香、大黃、茵陳、黃芩、金錢草等十味中藥, 諸藥合用可達消積導(dǎo)滯、破氣除脹、清熱利濕、和胃利膽之功效, 臨床主要用于治療因濕熱蘊毒、腑氣不通引起的膽脹、脅痛等證(如膽石癥、膽囊炎等)［2］。有研究顯示, 藥物質(zhì)量將直接影響疾病治療及預(yù)后效果。近年來由于人們自我保護意識逐漸增強, 對藥物質(zhì)量關(guān)注度也不斷提高, 如何有效控制藥物質(zhì)量已成為廣大醫(yī)務(wù)工作者共同關(guān)心的熱點問題。

研究表明, 以往利膽排石片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)主要涉及黃芩含量測定, 不利于全面掌握該藥物有效成分及獲得滿意質(zhì)量控制效果。HPLC操作簡單、方便快捷, 將色譜條件設(shè)置合理后出峰時間快且峰形較好, 是臨床常用的藥品含量檢測方法［3］。本文中利用HPLC對利膽排石片中4種蒽醌類成分含量實施同時測定可知, 其各批次檢測結(jié)果對比并無顯著差異, 提示利膽排石片質(zhì)量控制效果較為理想。

綜上所述, 利膽排石片經(jīng)HPLC可同時對其4種蒽醌類成分含量進行準(zhǔn)確測定, 有利于提高藥品質(zhì)量控制效果, 保障患者療效及預(yù)后, 值得今后推廣。

［1］ 張秋蓉, 王麗芳, 劉文燕.HPLC法同時測定膽寧片中5種蒽醌類衍生物含量.中國藥物警戒, 2012, 9(1):3-6.

［2］ 徐冬艷, 劉斌.HPLC法測定降脂寧調(diào)脂抗氧化有效部位中4種蒽醌類成分的含量.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報, 2010(3):203-206.

［3］ 肖晶, 楊杰, 高尚偉.HPLC法測定保健食品中蒽醌類成分的含量.中國食品衛(wèi)生雜志, 2010, 22(1):27-30.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.31.211

2015-04-02］

463000 河南省駐馬店市食品藥品檢驗所