安 柳，吳 賽，陳海洋，呂銀娟，柳 琳，張智華△

(1.湖北中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院2013級(jí)本科生，湖北 武漢 430065；2.湖北中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院方劑學(xué)教研室，湖北 武漢 430065)

·實(shí)驗(yàn)研究·

石菖蒲-遠(yuǎn)志藥對(duì)不同配伍比例對(duì)小鼠胃腸形態(tài)的影響*

安 柳1，吳 賽1，陳海洋1，呂銀娟2，柳 琳2，張智華2△

(1.湖北中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院2013級(jí)本科生，湖北 武漢 430065；2.湖北中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院方劑學(xué)教研室，湖北 武漢 430065)

目的 探討石菖蒲-遠(yuǎn)志藥對(duì)不同配伍比例和給藥時(shí)間對(duì)小鼠胃腸形態(tài)的影響。方法 昆明小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、石菖蒲組、遠(yuǎn)志組、石菖蒲遠(yuǎn)志1：1組、石菖蒲遠(yuǎn)志1：2組和石菖蒲遠(yuǎn)志2：1組，每組10只。以0.2 mL/10 g給藥量連續(xù)灌胃28 d，在7、14、28 d分別頸椎脫臼法處死3只小鼠，觀察小鼠的消化管，并取胃竇及十二指腸做HE染色。結(jié)果 經(jīng)大體觀察，與生理鹽水組相比，石菖蒲組、石菖蒲遠(yuǎn)志2：1和1：1配伍組各消化管形態(tài)和結(jié)構(gòu)基本正常，未見(jiàn)肉眼可見(jiàn)的異常增生、糜爛和潰瘍，黏膜色澤、紋理和結(jié)構(gòu)正常。但遠(yuǎn)志組胃腸脹氣明顯，腸壁菲薄。HE染色顯示，石菖蒲組各消化管顯示基本正常組織學(xué)結(jié)構(gòu)，遠(yuǎn)志組黏膜缺損，走向欠規(guī)則，而石菖蒲遠(yuǎn)志2：1和1：1組接近正常組織。結(jié)論 石菖蒲未對(duì)小鼠的消化管造成明顯的毒副作用，遠(yuǎn)志對(duì)消化管有副作用，但與石菖蒲配伍后能緩解這一不良作用。

石菖蒲；遠(yuǎn)志；藥對(duì)；配伍；小鼠；胃腸形態(tài)

前期研究發(fā)現(xiàn)，“石菖蒲-遠(yuǎn)志”是中醫(yī)治療老年性癡呆方劑中出現(xiàn)頻次最高的藥對(duì)[1]。但石菖蒲-遠(yuǎn)志用于防治老年性癡呆往往需要長(zhǎng)期用藥。藥理學(xué)研究已證實(shí)遠(yuǎn)志有明顯的胃腸副作用[2-3]，兩藥配伍使用是否對(duì)胃腸存在不良作用還有待進(jìn)一步驗(yàn)證，為此筆者用正常小鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，探討石菖蒲-遠(yuǎn)志藥對(duì)不同配伍比例、不同給藥時(shí)間對(duì)胃腸形態(tài)的影響，現(xiàn)匯報(bào)如下：

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性昆明種小鼠，體重(20±2)g，由武漢大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。受試動(dòng)物喂全價(jià)顆粒飼料，自由飲水，室溫(20±2)℃，濕度45-65%；受試動(dòng)物購(gòu)進(jìn)后適應(yīng)性喂養(yǎng)一周再進(jìn)行正式試驗(yàn)。

1.1.2 藥物和試劑 經(jīng)鑒定為正品的石菖蒲、遠(yuǎn)志，均購(gòu)于湖北順天醫(yī)藥有限公司(貨號(hào)140401、140301)；蘇木素(Sigma，貨號(hào)H9627)；伊紅Y(水溶性，貨號(hào)71014544)、無(wú)水乙醇、二甲苯、包埋石蠟等。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)器材 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(RE-52AA，上海亞榮生化儀器廠)，SHZ-D(III)型循環(huán)水真空泵(天津華鑫儀器廠)、病理切片機(jī)(德國(guó)Leica RM 2016輪轉(zhuǎn)式切片機(jī))、切片刀(日本羽毛R35一次性刀片)、組織攤烤片機(jī)(武漢俊杰JK-6生物組織攤烤片機(jī))、載玻片及蓋玻片(江蘇世泰實(shí)驗(yàn)器材有限公司)、顯微鏡(尼康E100型)、數(shù)碼單反相機(jī)(佳能550D)。

1.2 方法

1.2.1 藥物制備 分別取石菖蒲與遠(yuǎn)志藥材共180 g依次以1：1、1：2、2：1比例加水8倍煎煮，大火煎開(kāi)，小火煎40 min，第2次加4倍量水，同法操作，合并2次的藥液。將藥液轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，于75℃減壓回收水，濃縮至1 g/mL生藥量的藥液，保存在-20℃冰箱中，臨用時(shí)取出。

1.2.2 動(dòng)物分組及給藥 將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為正常對(duì)照組、石菖蒲組、遠(yuǎn)志組、石菖蒲遠(yuǎn)志1：1組、石菖蒲遠(yuǎn)志1：2組和石菖蒲遠(yuǎn)志2：1組，每組10只。各組分別灌胃相應(yīng)藥物，給藥量為0.2 mL/10 g，對(duì)照組灌胃等容積生理鹽水，給藥4周。

1.2.3 胃腸取材及HE染色 分別在7、14 d和28 d末次灌胃后3 h，各組動(dòng)物隨機(jī)取3只小鼠頸椎脫臼法處死，迅速打開(kāi)腹腔取胃、腸組織。取材后仔細(xì)觀察各實(shí)驗(yàn)鼠的胃腸，先從外面觀察胃壁和腸壁是否光整、是否有結(jié)節(jié)或腫塊形成。然后切開(kāi)胃壁和腸壁，觀察胃、腸黏膜是否完整，有無(wú)潰瘍、糜爛或腫瘤形成。肉眼觀察后分別取胃竇部和十二指腸部，并于10%福爾馬林液中固定。常規(guī)石蠟包埋，5 μm連續(xù)切片，HE常規(guī)染色，光鏡下觀察胃腸病理學(xué)改變并拍照。

2 結(jié)果

2.1 一般情況及大體觀察 給藥組在灌胃后約3 d開(kāi)始，部分小鼠出現(xiàn)進(jìn)食減少，體質(zhì)量下降，活動(dòng)減少等，尤以遠(yuǎn)志組明顯。而空白組小鼠均未出現(xiàn)上述情況。遠(yuǎn)志組和石菖蒲遠(yuǎn)志1：2組各有1只小鼠死亡，石菖蒲組因灌胃誤操作死亡1只。

小鼠取材后，立即解剖胃、腸。解剖胃時(shí)，先沿胃大彎處剪開(kāi)；解剖腸時(shí)沿腸系膜緣的對(duì)側(cè)剪開(kāi)。用生理鹽水將內(nèi)容物沖洗干凈，然后將之展開(kāi)、平攤，用肉眼及解剖顯微鏡觀察胃、腸黏膜，發(fā)現(xiàn)對(duì)照組、石菖蒲和2：1、1：1配伍組小鼠的胃、腸黏膜均呈現(xiàn)基本正常的黏膜形態(tài)，未見(jiàn)出血、糜爛、潰瘍和腫瘤形成等，但遠(yuǎn)志組胃腸脹氣明顯，腸壁菲薄，未見(jiàn)明顯出血、糜爛和潰瘍，1：2配伍組也表現(xiàn)出一定程度的胃腸脹氣，腸壁薄，無(wú)出血、糜爛等。

2.2 各組小鼠胃壁HE染色觀察 對(duì)照組小鼠胃竇組織經(jīng)HE染色顯示：黏膜呈粉紅色，被覆黏液，黏膜皺襞表面光滑，走向規(guī)則；胃底腺之間可見(jiàn)少量的結(jié)締組織；固有層下可見(jiàn)平滑肌層。與對(duì)照組相比，石菖蒲組、2：1配伍組和1：1配伍組灌胃小鼠均未發(fā)現(xiàn)其胃壁黏膜出現(xiàn)損傷；高倍鏡下可見(jiàn)主細(xì)胞和壁細(xì)胞符合正常的形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)，未出現(xiàn)病變特征；也未發(fā)現(xiàn)有明顯的毛細(xì)血管擴(kuò)張等現(xiàn)象。但遠(yuǎn)志組胃黏膜組織不同程度充血水腫，固有層和黏膜下層可見(jiàn)大量中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞堆積，有少量潰瘍點(diǎn)，并隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)，黏膜損傷程度逐漸加重(見(jiàn)圖1)。

圖1 給藥14 d、28 d，各組胃竇HE染色：A-F分別為對(duì)照組、石菖蒲組、遠(yuǎn)志組、1：1組、1：2組、2：1組

2.3 各組小鼠腸HE染色觀察 對(duì)照組小鼠腸組織經(jīng)HE染色顯示正常的腸黏膜結(jié)構(gòu)，黏膜和黏膜下層向腸腔突起，形成皺襞，可見(jiàn)許多的葉狀、指狀絨毛突向腸腔，柱狀細(xì)胞、杯狀細(xì)胞等排列正常；黏膜下層有許多黏液性的腸腺，在大腸的黏膜下層內(nèi)有大量的脂肪細(xì)胞；平滑肌排列規(guī)則，邊界清晰。與對(duì)照組相比，石菖蒲組及2：1、1：1配伍組小鼠灌胃后未發(fā)現(xiàn)其黏膜和黏膜下層結(jié)構(gòu)出現(xiàn)明顯變化，未發(fā)現(xiàn)腸腔有明顯的毛細(xì)血管擴(kuò)張等現(xiàn)象。但遠(yuǎn)志組和1：2配伍組腸黏膜絨毛完整性被破壞，黏膜組織充血水腫，上皮脫落、壞死，大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，且隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)，病變加劇(見(jiàn)圖2)。

圖2 給藥7d、28d，各組腸HE染色：A-F分別為對(duì)照組、石菖蒲組、遠(yuǎn)志組、1：1組、1：2組、2：1組

3 討論

石菖蒲為天南星科多年生草本植物石菖蒲的根莖，有開(kāi)竅醒神，化濕和胃，寧神益智之功。有研究發(fā)現(xiàn)石菖蒲通過(guò)抑制胃腸(主要是胃)收縮活動(dòng)而對(duì)胃脘脹痛具有治療作用。石菖蒲對(duì)胃頭區(qū)無(wú)明顯作用，但對(duì)胃尾區(qū)的平滑肌具有興奮作用[4]，并有促進(jìn)消化液的分泌及制止胃腸異常發(fā)酵、延緩平滑肌痙攣的作用[5]。至于其副作用，有人認(rèn)為石菖蒲長(zhǎng)期給藥可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胃腸道腫瘤[6-7]，存在潛在的致畸、致癌作用，但也有文獻(xiàn)報(bào)道否認(rèn)了這一點(diǎn)[8]，認(rèn)為其對(duì)胃腸形態(tài)無(wú)影響。

遠(yuǎn)志為遠(yuǎn)志科多年生草本植物遠(yuǎn)志或卵葉遠(yuǎn)志的根，具有安心寧神，祛痰開(kāi)竅，消散癰腫等功效?，F(xiàn)代研究證實(shí)遠(yuǎn)志在常規(guī)用量時(shí)即可引起輕度惡心、腹脹，能使胃黏膜損傷，胃壁變薄，胃腸道脹氣，抑制胃排空及小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)，嚴(yán)重影響胃腸道消化功能，若大劑量服用可引起惡心、嘔吐、腹瀉、溶血等不良反應(yīng)，并可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胃黏膜出血、脫落，呈現(xiàn)出明顯的胃腸靶器官副作用。研究還發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)志較強(qiáng)的祛痰作用是其所含皂苷對(duì)胃黏膜的刺激作用，反射性地促進(jìn)支氣管分泌液增加所致[9]。生遠(yuǎn)志提取液能夠降低胃部興奮性神經(jīng)遞質(zhì)P物質(zhì)含量，減弱Ca2+-ATP酶活性，增加NO含量，從而干預(yù)胃腸肌電慢波，并且還可以通過(guò)減少胃腸道cajal間質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量抑制胃腸運(yùn)動(dòng)[10-11]。鑒于生遠(yuǎn)志明顯的毒副作用，傳統(tǒng)多通過(guò)炮制來(lái)降低毒性。研究發(fā)現(xiàn)生遠(yuǎn)志與姜遠(yuǎn)志能顯著抑制胃腸運(yùn)動(dòng)及消化功能，其蜜炙品、甘草炮制品的抑制作用相對(duì)弱[2-3]，配伍厚樸可在一定程度上緩解遠(yuǎn)志胃腸動(dòng)力抑制的作用[12-13]。也有研究發(fā)現(xiàn)打破遠(yuǎn)志糖基可降低其胃腸毒性[14]。

到目前為止，石菖蒲遠(yuǎn)志配伍后對(duì)胃腸作用方面的研究報(bào)道較少。如前所述，遠(yuǎn)志大量或長(zhǎng)期使用對(duì)胃腸有毒副作用，然而研究發(fā)現(xiàn)石菖蒲遠(yuǎn)志散(由石菖蒲、遠(yuǎn)志、豬牙皂角組成)屬于毒性較小的藥物，且急性毒副作用較少[15]。已證實(shí)石菖蒲可能通過(guò)抑制遠(yuǎn)志皂苷溶出而對(duì)遠(yuǎn)志有減毒作用[16]。當(dāng)兩種單味藥配伍合煎時(shí)，藥對(duì)化合物群的組成發(fā)生了明顯變化，有大量微量組分被檢出，也有部分來(lái)自遠(yuǎn)志或石菖蒲的成分消失或含量發(fā)生了明顯變化[17]。因此石菖蒲能否降低遠(yuǎn)志的胃腸毒副作用值得我們思考，通過(guò)以上分析我們可以設(shè)想兩藥配伍后有可能達(dá)到“糾偏減毒”的效果。

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)石菖蒲組及2：1配伍組對(duì)胃腸影響較小，其次為1：1配伍組，而遠(yuǎn)志組和1：2配伍組有一定的胃腸毒性，證實(shí)遠(yuǎn)志確有胃腸毒性，而石菖蒲對(duì)其毒性有一定的拮抗作用。

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，若要減低遠(yuǎn)志的胃腸毒性，石菖蒲遠(yuǎn)志以2：1配伍為最佳。為了進(jìn)一步探討兩藥配伍后對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胃腸消化功能的影響，我們又選用了大鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，給藥28 d后，分別在7、28 d行HE染色觀察其胃及空腸的形態(tài)學(xué)變化，檢測(cè)其胃酸、胃蛋白酶、胃泌素及生長(zhǎng)抑素的水平，初步探討了其作用機(jī)制，限于篇幅，另文報(bào)道。

總之，石菖蒲-遠(yuǎn)志是古今抗癡呆方劑中出現(xiàn)頻次最高的藥對(duì)之一，此藥對(duì)在益智抗衰方面應(yīng)用前景廣闊，若能深入、系統(tǒng)研究，為這一藥對(duì)的臨床安全及合理使用提供科學(xué)依據(jù)，具有重要的學(xué)術(shù)價(jià)值和科學(xué)意義。

[1]閆敬來(lái)，陳燕清.歷代文獻(xiàn)中醫(yī)藥治療老年癡呆常用藥對(duì)研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2008，26(7)：1495-1496.

[2]王建，郭娟，武云.遠(yuǎn)志不同炮制品對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)及消化功能的影響[J].中藥藥理與臨床，2006，22(3、4)：120-122.

[3]吳暉暉，王建，劉賢武，等.遠(yuǎn)志及其不同蜜炙品的急性毒性及其對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)的影響[J].四川中醫(yī)，2006，24(11)：16-18.

[4]李偉，鄭天珍，張英福，等.水菖蒲和石菖蒲對(duì)大鼠離體胃平滑肌條作用的比較[J].甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2000，17(4)：7-9.

[5]杜毅，陳瑞軍，趙麗蓉，等.石菖蒲的化學(xué)與藥理研究新進(jìn)展[J].山西中醫(yī)，2000，16(1)：53-54.

[6]杜毅，周超凡.石菖蒲的效用與現(xiàn)代研究的關(guān)系[J].中國(guó)中藥雜志，1993，18(4)：24-27.

[7]陳俐，廖衛(wèi)平.石菖蒲藥理作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].廣州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，30(4)：1-5.

[8]田素民，馬宇昕，孫靈芝，等.石菖蒲不同藥效部位灌胃對(duì)小鼠消化管的形態(tài)學(xué)影響[J].解剖學(xué)研究，2012，34(5)：335-338.

[9]單建學(xué).遠(yuǎn)志的炮制及臨床應(yīng)用[J].湖南中醫(yī)學(xué)導(dǎo)報(bào)，2001，7(2)：89.

[10]楊偉峰，王建，劉麗娜，等.生遠(yuǎn)志及其總皂苷與蜜遠(yuǎn)志對(duì)大鼠胃腸肌電慢波的影響[J].中藥藥理與臨床，2010，26(3)：28-31.

[11]楊偉峰，王建，劉麗娜，等.生遠(yuǎn)志及其總皂苷與蜜遠(yuǎn)志對(duì)胃腸cajal間質(zhì)細(xì)胞的影響[J].中藥材，2011，31(1)：33-36.

[12]馬曉燕，王建，肖武，等.遠(yuǎn)志、厚樸及其不同配比對(duì)家兔離體腸平滑肌的影響[J].中藥藥理與臨床，2011，27(3)：90-92.

[13]田競(jìng)，王建，班炳坤，等.厚樸與遠(yuǎn)志配伍對(duì)大鼠胃腸道消化功能的影響[J].中藥藥理與臨床，2011，27(11)：66-68.

[14]Wen，L.，Xia，N.，Tang，P.，et al.2015.The gastrointestinal irritation of polygala saponins and its potential mechanism in vitro and in vivo.BioMed Research International，918048，1-8.

[15]趙冰.石菖蒲遠(yuǎn)志散急性毒性實(shí)驗(yàn)研究[D].延邊大學(xué)，2011.

[16]張文娟，鄭曉暉，房敏峰，等.經(jīng)典藥對(duì)遠(yuǎn)志-石菖蒲配伍前后指標(biāo)成分的變化分析[J].中國(guó)藥業(yè)，2009，18(15)：7.

[17]房敏峰，張文娟，李云峰，等.GC-MS分析藥對(duì)遠(yuǎn)志-石菖蒲中的脂溶性成分[J].中國(guó)藥業(yè)，2009，18(23)：3-4.

Effect of Acorus Tatarinowii and Polygala Tenuifolia on Mice Gastrointestinal Form with Different Compatibility Proportions

AN Liu1, HUA Du-ping1, WU Sai1, YE Wen-jing1, CHEN Hai-yang1, ZENG Zi-xuan1,LV Yin-juan2, LIU Lin2, ZHANG Zhi-hua2

(1.SchoolofBasicMedicine,HubeiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Wuhan430065,Hubei; 2.PrescriptionsTeachingSection,DepartmentofBasicMedicine,HubeiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Wuhan430065,Hubei)

Objective: To study the effect of Acorus Tatarinowii and Polygala Tenuifolia on mice gastrointestinal form with different compatibility proportions. Methods: Kunming mice were randomly divided into a normal control group, an Acorus Tatarinowii (AT) group, a Polygala Tenuifolia (PT) group, a 1:1 AT group, a 1:2 AT group and a 2:1 AT-PT group, 10 mice per group. Each group was intragastrically administrated with 0.2 mL/10g dose of these drugs for successive 28 days, and three mice were respectively killed by cervical dislocation at the 7th, 14th and 28th day, to observe their digestive tract and take their gastric antrum and duodenum to do HE staining. Results: When compared with the saline group, the digestive tract morphology and structure of AT group, 2:1 AT-PT group and 1:1 AT group were normal, no visible dysplasia, erosions and ulcers and their mucous membrane color, texture and structure were normal, but in PT group, the flatulence of the mice was obvious and their intestinal were meager. HE staining showed that AT group showed normal histology of the digestive tract while PT group showed mucosal defect, towards irregular, but 2:1 AT-PT group and 1:1 AT group were close to normal tissue. Conclusion: Acorus Tatarinowii do not cause significant side effect on the digestive tract of the mice and Polygala Tenuifolia do cause side effect on the digestive tract of the mice, but the compatibility of Acorus Tatarinowii and Polygala Tenuifolia can alleviate the adverse effect.

Acorus Tatarinowii, Polygala Tenuifolia, medicine pair, compatibility, mice, gastrointestinal form

國(guó)家自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目(NO：81202734)；湖北中醫(yī)藥大學(xué)2014“挑戰(zhàn)杯”大學(xué)生課外學(xué)術(shù)科技作品項(xiàng)目。

安柳(1991-)，女，湖北，湖北中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院2013級(jí)中醫(yī)學(xué)七年制學(xué)生。

△通信作者：張智華，E-mail：zzhor@163.com。

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1007-2349(2015)08-0063-04

2015-05-21)