朱中飛 馬洪運 歐陽柳 紀偉平 宋彬

Bcl-2、Cyclin D1、Ki-67、Muc-2在胰腺疾病中的表達及其意義

朱中飛 馬洪運 歐陽柳 紀偉平 宋彬

Bcl-2是重要的凋亡抑制基因，表達于正常的外分泌導管上皮、癌前病變和某些上皮來源的腫瘤[1]。Bcl-2高表達與腫瘤分化程度、轉(zhuǎn)移有關(guān)，而與年齡、性別、TNM分期無關(guān)。Cyclin D1和Ki-67均與細胞增殖活性有關(guān)，它們的表達與腫瘤的惡性程度呈正相關(guān)。Muc-2蛋白是一種腸道相關(guān)抗原，表達于結(jié)腸、直腸黏膜上皮，正常胰腺組織不表達，但在胰腺導管內(nèi)乳頭狀黏液性腫瘤(intraductal papillary mucinous neoplasm, IPMN)高表達。本研究檢測Bcl-2、Cyclin D1、Ki-67、Muc-2在IPMN、胰腺導管腺癌(PDAC)和慢性胰腺炎(CP)中的表達，探討它們對上述3類疾病的鑒別診斷及區(qū)分不同病理類型IPMN的價值。

一、材料和方法

1．病例資料：選取2010年1月至2013年12月間上海長海醫(yī)院胰腺外科住院手術(shù)標本的存檔石蠟塊，共63例。其中PDAC 20例，IPMN 30例，CP 13例。30例IPMN中腺瘤(intraductal papillary mucinous adenoma, IPMA)13例，歸為良性組，腺癌(intraductal papillary mucinous cancer,IPMC)和交界性腺瘤(intraductal papillary mucinous borderline,IPMB)17例，歸為惡性組。所有病例的臨床資料完整。

2．方法：運用Envision兩步法對所有組織切片進行免疫組化染色，分別檢測Bcl-2、Cyclin D1、Ki-67、Muc-2蛋白表達。Envision試劑盒購自DaKo公司；鼠抗人Bcl-2、Cyclin D1、Ki-67、Muc-2單克隆抗體均購自上海起亞生物科技有限公司。按照試劑盒說明書操作。用PBS替代一抗作空白對照。每張切片均由兩位病理醫(yī)師盲法讀片，Cyclin D1、Ki-67陽性表達為胞核呈棕黃色或褐色。Muc-2陽性表達為胞質(zhì)呈棕黃色或褐色。參考Hartmann等[2]的標準進行病理評分，即在400倍鏡下任取5個視野計算陽性細胞占總細胞數(shù)的百分率，<5%為-，5%～25%為+，26%～50%為++，>50%為+++。+、++、+++均歸為陽性組。

3．統(tǒng)計學處理：采用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以百分率表示，采用Fisher確切概率法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

二、結(jié)果

1．Bcl-2表達：Bcl-2蛋白表達于胞質(zhì)或核膜(圖1)。PDAC、IPMN、CP組織的陽性表達率分別為55%(11/20)、87%(26/30)、15%(2/13)，兩兩比較的差異均有統(tǒng)計學意義(P值均<0.05)。良性IPMN及惡性IPMN的Bcl-2陽性表達率分別為77%(10/13)、94%(16/17)，良惡性IPMN間的差異無統(tǒng)計學意義(P=0.290)。

2．Cyclin D1表達：Cyclin D1蛋白表達于胞核(圖2)。PDAC、IPMN、CP組織的陽性表達率分別為80%(16/20)、50%(15/30)、8%(1/13)，兩兩比較的差異均有統(tǒng)計學意義(P值均<0.05)。良性IPMN及惡性IPMN的Cyclin D1陽性表達率分別為23%(3/13)、71%(12/17)，惡性IPMN的表達率顯著高于良性IPMN，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.025)。

3．Ki-67表達：Ki-67蛋白表達于胞核(圖3)。PDAC、IPMN、CP組織的陽性表達率分別為85%(17/20)、50%(15/30)、8%(1/13)，兩兩比較的差異均有統(tǒng)計學意義(P值均<0.05)。良性IPMN及惡性IPMN的Ki-67陽性表達率分別為23%(3/13)、71%(12/17)，惡性IPMN的表達率顯著高于良性IPMN，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.025)。

4．Muc-2表達：Muc-2蛋白表達于胞質(zhì)(圖4)。PDAC、IPMN、CP組織的陽性表達率分別為10%(2/20)、87%(26/30)、15%(2/13)，IPMN與PDAC及CP的差異均有統(tǒng)計學意義(P值均<0.01)。良性IPMN及惡性IPMN的Muc-2陽性表達率分別為85%(11/13)、88%(15/17)，良惡性IPMN間的差異無統(tǒng)計學意義(P=1.000)。

討論 雖然人們對IPMN的認識在不斷深入，但由于IPMN的病理改變呈多樣性，可表現(xiàn)為增生、腺瘤、不典型增生、原位癌、浸潤及晚期癌等，因此IPMN的診斷需要依靠綜合分析和判斷，尤其是對少數(shù)病例，僅僅依靠臨床表現(xiàn)、影像學特征和病理還很難以與其他胰腺腫瘤鑒別。

圖1 IPMN(1A)、PDAC(1B)、CP(1C)組織的Bcl-2表達(免疫組化 ×200) 圖2 IPMN(2A)、PDAC(2B)、CP(2C)組織的Cyclin D1表達(免疫組化 ×200)

圖3 IPMN(3A)、PDAC(3B)、CP(3C)組織的Ki-67表達(免疫組化 ×200) 圖4 IPMN(4A)、PDAC(4B)、CP(4C)組織的Muc-2表達(免疫組化 ×200)

本研究結(jié)果表明，Bcl-2、Cyclin D1、Ki-67和Muc-2在IPMN、PDAC和CP間確實存在明顯差異，因此這4項免疫組化指標可能在IPMN診斷和鑒別診斷中有重要價值。

最新研究表明，Bcl-2家族在急性白血病、慢性淋巴細胞性白血病及實性腫瘤中過表達，通過多種通道抑制腫瘤細胞凋亡，促進腫瘤的形成和發(fā)展[3]。Geng等[4]采用siRNA技術(shù)沉默Bcl-2基因表達，從而促進腫瘤細胞死亡并增加細胞對化療的敏感性。但也有研究認為Bcl-2高表達不是某一腫瘤的特征，而是反映腫瘤細胞的一種增生狀態(tài)[5-6]。本研究結(jié)果顯示，Bcl-2在IPMN中陽性表達率最高，其次為PDAC，CP中表達率最低，提示Bcl-2的高表達可能是IPMA惡變的因素。

Guo等[7]檢測92例壺腹部腺癌的Cyclin D1表達，陽性率為71.7%，陽性表達的術(shù)后腫瘤復發(fā)及患者生存時間顯著低于低表達或不表達Cyclin D1的患者(P<0.05)，是判斷壺腹部腺癌預(yù)后的獨立因素。Zhao等[8]檢測2 041例食管鱗癌的Cyclin D1表達，結(jié)果顯示低分化、早期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、AJCC分期較晚的患者中Cyclin D1高表達。

McCall等[9]的研究結(jié)果顯示，作為增殖指數(shù)的Ki-67高表達與惡性腫瘤的分期相關(guān)。Carlinfante等[10]檢測53例胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤Ki-67的表達，顯示其表達水平在神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的分級中有鑒別價值，特別是對G1、G2和低分化神經(jīng)內(nèi)分泌癌的鑒別。本研究結(jié)果顯示，Cyclin D1、Ki-67在CP、IPMN、PDAC組織中的表達陽性率依次升高且惡性IPMN的陽性表達率顯著高于良性IPMN的表達率，這可能是潛在的鑒別IPMN良惡性的指標。

Masuda等[11]研究發(fā)現(xiàn)，混合型IPMN中高級別上皮內(nèi)瘤變和侵襲性癌的Muc-2的陽性表達率顯著高于低級別上皮內(nèi)瘤變，是預(yù)測IPMN惡變的獨立因素。Ideno等[12]報道，PDAC及侵襲性IPMN組織Muc-1高表達，提示Muc-2高表達腫瘤更具侵襲性。Castellano-Megías等[13]認為，腸型IPMN中Muc-2表達陽性，Muc-1表達陰性，傾向于向膠質(zhì)瘤發(fā)展，而胰膽管型IPMN則可能發(fā)展為導管腺癌。本研究結(jié)果顯示，IPMN 的Muc-2陽性表達率顯著高于PDCA及CP，這是因為IPMN與PDCA、CP有不同的臨床病理特征，但良惡性IPMN的陽性表達率無顯著差異，說明Muc-2高表達僅可以作為區(qū)分PDAC和IPMN的重要指標。

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(本文編輯：屠振興)

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2015.04.016

上海市自然科學基金(12ZR1453900)

200433 上海，第二軍醫(yī)大學長海醫(yī)院胰腺外科

宋彬，Email: smmusb@126.com

2015-01-04)