中藥補(bǔ)骨脂，為豆科植物補(bǔ)骨脂（Psoralea corylifolia L.）干燥成熟果實(shí)。其性溫、味辛，具有補(bǔ)腎助陽，溫中止瀉，納氣平喘之功。其中主要活性成分補(bǔ)骨脂素（psoralen）和異補(bǔ)骨脂素（isopsoralen）等香豆素類成分，具有較強(qiáng)的光敏化作用和鎮(zhèn)靜、解痙、止血等作用[1-2]，是治療白癜風(fēng)、斑禿、牛皮癬以及瘤樣皮膚病的有效藥物。近來研究表明，補(bǔ)骨脂素對(duì)多種動(dòng)物及人的腫瘤生長有明顯抑制作用[3-4]。

1實(shí)驗(yàn)方法

1.1色譜條件 色譜柱：Purospher○RSTAR LP RP-18 endcapped（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈-水，梯度洗脫程序；流速1.0 mL/min；檢測波長250 nm；進(jìn)樣量10 μL；柱溫30℃。

1.2對(duì)照品溶液的制備 分別精密稱取補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂二氫黃酮、新補(bǔ)骨脂異黃酮、補(bǔ)骨脂二氫黃酮、補(bǔ)骨脂寧、Broussochalcone B、補(bǔ)骨脂定、補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚、異補(bǔ)骨脂查爾酮和Corylifol A適量，置同一棕色10 mL容量瓶中，加甲醇溶解至刻度，搖勻，制成濃度分別為0.3000 mg/mL、0.3500 mg/mL、0.3000 mg/mL、0.2700 mg/mL、0.3000 mg/mL、0.1200 mg/mL、0.2000 mg/mL、0.2500 mg/mL、0.4500 mg/mL、0.3600 mg/mL和0.2000 mg/mL的混合對(duì)照品溶液。于4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3供試品溶液的制備 取補(bǔ)骨脂生品粗粉（過60目篩）各約0.1 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加甲醇50 mL，加熱回流2 h，放冷，濾過，濾液置100 mL蒸發(fā)皿中，在水浴鍋上蒸至有少量濾液殘留即可，用甲醇將蒸發(fā)皿中殘留的濾液和殘?jiān)耆D(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，搖勻，過0.45 μm微孔濾膜作為供試品溶液。于4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2方法學(xué)考察

2.1線性關(guān)系考察 取2.2項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液，精確稀釋2倍、4倍、8倍、16倍和32倍。精密吸取以上6份混合對(duì)照品溶液各10 μL注入高效液相色譜儀，測定。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，結(jié)果R>0.999，線性良好。

2.2精密度試驗(yàn) 精密吸取2.2項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液5 μL連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄補(bǔ)骨脂各主要成分的峰面積積分值，計(jì)算RSD，結(jié)果精密度各成分峰面積的RSD≤2.92%，表明儀器精密度良好。

2.3穩(wěn)定性及重復(fù)性試驗(yàn) 取生品供試品溶液分別在0，2，4，6，8，10，12 h進(jìn)樣，測定補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、新補(bǔ)骨脂異黃酮、補(bǔ)骨脂二氫黃酮、補(bǔ)骨脂寧、Broussochalcone B、補(bǔ)骨脂定、補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚、異補(bǔ)骨脂查爾酮、Corylifol A、補(bǔ)骨脂查爾酮和補(bǔ)骨脂酚的峰面積。RSD≤3.43%，表明樣品在12 h內(nèi)較為穩(wěn)定。測得的平均峰面積的RSD≤2.93%，表明該方法的重現(xiàn)性較好。

2.4回收率試驗(yàn) 取已測含量的生品粗粉約0.1 g，6份，精密稱定補(bǔ)骨脂各對(duì)照品，加入，按\"2.3\"項(xiàng)制得供試品溶液，按\"2.1\"項(xiàng)中色譜條件考察結(jié)果測定補(bǔ)骨脂中各化學(xué)成分的含量，計(jì)算加樣回收率?；厥章?5.52%～104.85%，RSD≤2.61%。

3含量測定結(jié)果

補(bǔ)骨脂生品和鹽炙品，按2.3項(xiàng)下制備，2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂二氫黃酮、新補(bǔ)骨脂異黃酮、補(bǔ)骨脂二氫黃酮、補(bǔ)骨脂寧、Broussochalone B、補(bǔ)骨脂定、補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚、異補(bǔ)骨脂查爾酮、Corylifol A的含量。

4一測多評(píng)法

校正因子的計(jì)算，見表1。

5討論

采用一測多評(píng)法測定補(bǔ)骨脂中2種常見香豆素成分補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素，補(bǔ)骨脂中8中黃酮成分，新補(bǔ)骨脂異黃酮、補(bǔ)骨脂二氫黃酮、補(bǔ)骨脂寧、Broussoclalone B、異補(bǔ)骨脂查爾酮、補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚以及Coryifol A，一測多評(píng)法可在缺少對(duì)照品的情況下，依然能夠?qū)ζ渌煞诌M(jìn)行定量。本文采用一測多評(píng)法所得補(bǔ)骨脂藥材中8種黃酮類成分含量與常規(guī)的外標(biāo)法所測得的含量間沒有顯著差異，說明在對(duì)照品缺乏的情況下，通過一測多評(píng)法實(shí)現(xiàn)補(bǔ)骨脂藥材同類成分的含量測定是準(zhǔn)確的、可行的。

參考文獻(xiàn)：

[1]朱兆榮，李玉強(qiáng)，劉娟，等.補(bǔ)骨脂總黃酮抗氧化作用研究[J].中國獸藥雜志，2005，39（2）：18-20.

[2]Herrmann G，Brenneisen P，Wlaschek M，et a1.Psoralen photoactivation promotes morphological and functional changes in fibroblasts in vitro reminiscent of cellular senescence[J].Journal of Cell Science，1998，111（6）：759-767.

[3]李冬云，陳信義，劉瑞娟.單味中藥成分逆轉(zhuǎn)白血病多藥耐藥基礎(chǔ)研究評(píng)述[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2004，11（11）：951-954.

[4]趙丕文，牛建昭，王繼峰，等.異補(bǔ)骨脂素和蛻皮甾酮對(duì)人乳腺癌T47D細(xì)胞增殖及ER亞型表達(dá)的影響[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，30（4）：242-245.

編輯/肖慧