[摘要] 目的 探討血清抗角蛋白抗體（AKA）、抗環(huán)瓜氨酸抗體（anti-CCP）、抗RA33抗體及類風(fēng)濕因子（RF）聯(lián)合檢測(cè)對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）的診斷意義。 方法 利用間接免疫熒光法檢測(cè)RA組、非RA自身免疫性疾病組以及正常對(duì)照組患者血清AKA；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)抗CCP抗體和抗RA33抗體；免疫散射比濁法檢測(cè)RF因子。 結(jié)果 RA組中AKA、anti-CCP、抗RA33抗體、RF的陽性率分別為54.45%、81.12%、44.44%、75.56%，顯著高于非RA組（5.61%、3.74%、8.41%、50.47%）及正常對(duì)照組（2.50%、2.50%、2.50%、7.50%，P<0.01）；AKA、anti-CCP、抗RA33抗體和RF聯(lián)合檢測(cè)診斷RA的靈敏度為100.0%，特異性為84.11%，敏感性分別高于AKA的54.45%、anti-CCP的81.12%、抗RA33抗體的44.44%和RF的75.56%。 結(jié)論 AKA、抗CCP抗體、抗RA33抗體、RF四者聯(lián)合檢測(cè)有助于提高臨床對(duì)RA的診斷。

[關(guān)鍵詞] 類風(fēng)濕因子；抗角蛋白抗體；抗環(huán)瓜氨酸肽抗體；抗RA33抗體；類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎

[中圖分類號(hào)] R593.22 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2015）20-0096-03

Diagnostic value of combined detection of AKA antibody， anti CCP antibody，anti RA33 antibody and RF for rheumatoid arthritis

WANG Ting HE Yanxia

Clinical Laboratory， the Second Affiliated Hospital of Zhengzhou University， Zhengzhou 450014， China

[Abstract] Objective To investigate the diagnostic value of combinational test of anti-keratin antibody （AKA）， anti cyclic citrullinated peptide antibodies （anti-CCP）， anti RA33 antibody and rheumatoid factor（RF） in serum for RA （Rheumatoid Arthritis）. Methods Serum AKA was detected by indirect immunofluorescence，anti CCP antibody and anti RA33 antibody by enzyme linked immunosorbent assay （ELISA） and RF factor by immune scattering turbidimetric method for patients of RA case group，non RA group and normal control group. Results The positive rate of AKA， anti-CCP， anti RA33 antibody and RF in RA group were 54.45%， 81.12%， 44.44%， 75.56%， which was significantly higher than that of non RA group of 5.61%， 3.74%， 8.41%， 50.47%， as well as that of control group of 2.50%， 2.50%， 2.50%， 7.50% （P<0.01）. The combined detection of AKA， anti-CCP， anti RA33 and RF was 100.0% of sensitivity and 84.11% of specificity. This sensitivity was higher than that of AKA 54.45%， anti-CCP 81.12%， anti RA33 antibodies 44.44% and 75.56% of RF. Conclusion The combined detection of AKA， anti-CCP， anti RA33 antibody and RF is proposed to be a valuable diagnostic tool for RA.

[Key words] Rheumatoid factor； Antikeratin antibody； Anti cyclic citrullinated peptide antibody； Anti RA33 antibody； Rheumatoid arthritis

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是以對(duì)稱性多關(guān)節(jié)炎為主要臨床表現(xiàn)的異質(zhì)性、系統(tǒng)性、自身免疫性疾病，患病率為0.18%～1.07%，30～50歲左右高發(fā)，一般女性發(fā)病率高于男性[1]。RA確切發(fā)病機(jī)制不明，可能與內(nèi)分泌、代謝、營(yíng)養(yǎng)、職業(yè)、心理和社會(huì)環(huán)境的差異、細(xì)菌和病毒感染及遺傳因素等方面有關(guān)系[2，3]。從病理改變上來說是滑膜炎和由滑膜炎造成的關(guān)節(jié)軟骨及骨質(zhì)進(jìn)行性破壞，導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形，最后發(fā)展為關(guān)節(jié)功能的喪失，如果不經(jīng)過正規(guī)的治療，大約75%的患者會(huì)在3年內(nèi)出現(xiàn)殘疾[4]。RA早期診斷及時(shí)治療可以減少骨關(guān)節(jié)破壞，延緩病情進(jìn)展，提高患者的生存質(zhì)量[5]。本研究選取RA相關(guān)血清學(xué)標(biāo)志物抗角蛋白抗體（anti-keratinantibody，AKA）、抗環(huán)瓜氨酸抗體（anti-cycliccitrulinated peptid，anti-CCP）、抗RA33抗體及類風(fēng)濕因子（rheumatoid factor，RF），并探討四者聯(lián)合檢測(cè)在診斷類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的臨床價(jià)值及應(yīng)用。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選擇2013～2014年鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院就診的RA患者90例，年齡18～69歲，平均（31.0±3.5）歲，男40例，女50例；非RA的自身免疫性疾病患者107例，年齡17～68歲，平均（33.5±5.9）歲，男45例，女62例。同期來院的健康體檢者40例為正常對(duì)照組，年齡23～69歲，平均（33.9±8.7）歲，男21例，女19例。疾病組診斷符合2009年ACR和歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟（EULAR）提出的新的RA分類標(biāo)準(zhǔn)和評(píng)分系統(tǒng)及中華醫(yī)學(xué)會(huì)風(fēng)濕病學(xué)分會(huì)《風(fēng)濕病學(xué)診斷和治療指南》。正常對(duì)照組排除相關(guān)疾病，三組的性別及年齡均具可比性。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 儀器與試劑

7600全自動(dòng)生化分析儀（日本日立公司）；歐蒙熒光顯微鏡（德國(guó)歐盟公司）；酶標(biāo)儀ELX-800（美國(guó)，BIO-TEKINSTRMENT.IN）。AKA試劑為德國(guó)歐蒙公司生產(chǎn)的原裝試劑盒，anti-CCP試劑為德國(guó)歐蒙公司生產(chǎn)的原裝試劑盒，抗RA33抗體試劑購(gòu)于德國(guó)HUMAN公司，RF試劑由德國(guó)西門子醫(yī)學(xué)診斷產(chǎn)品有限公司生產(chǎn)。

1.3 檢測(cè)方法

采集患者外周靜脈血3 mL于無抗凝劑的普通管中，3000 r/min 離心10 min，收集血清，-20℃冰箱凍存，分批檢測(cè)。AKA采用間接免疫熒光法（IIF）測(cè)定；anti-CCP采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定；抗RA33抗體采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定；RF采用免疫散射比濁法測(cè)定。所有試劑均嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行操作，抗AKA抗體1∶10稀釋有熒光即為陽性，抗CCP抗體測(cè)定值>5 RU/mL陽性，抗RA33抗體測(cè)定值> 20 RU/mL為陽性，RF>20 IU/mL為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

卡方檢驗(yàn)或四格表精確檢驗(yàn)用于兩組間率的差異性比較，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，統(tǒng)計(jì)軟件為IBM SPSS Statistics for Mac， 22.0版本（國(guó)際商業(yè)機(jī)器公司，紐約州，美國(guó)）。

2 結(jié)果

2.1 四種抗體AKA、CCP、抗RA33抗體和RF單獨(dú)檢測(cè)的比較

2.1.1 AKA的比較 RA組中AKA的陽性率為54.45%，非RA組為5.61%，與正常對(duì)照組比較差異均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=31.57，P<0.01；χ2=57.93，P<0.01）。見表1。AKA的敏感性為54.45%，特異性為94.39%。

表1 AKA的比較[n（%）]

注：*與RA組陽性率比較，χ2=31.57，P<0.01；**與RA組陽性率比較，χ2=57.93，P<0.01

2.1.2 CCP比較 RA組中anti-CCP的陽性率為81.12%，與正常對(duì)照組比較差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=69.79，P<0.01）；同時(shí)RA組顯著高于非RA組（χ2=122.91，P<0.01）。見表2。AKA的敏感性為81.12%，特異性為96.26%。

表2 anti-CCP的比較[n（%）]

注：*與RA組陽性率比較，χ2=69.79，P<0.01；** 與RA組陽性率比較，χ2=122.91，P<0.01

2.1.3 RA33的比較 RA組中抗RA33的陽性率為44.44%，顯著高于非RA組的8.41%（χ2=33.97，P<0.01），見表3。同時(shí)RA組顯著高于正常對(duì)照組（χ2=22.56，P<0.01）。見表3。AKA的敏感性為44.44%，特異性為91.59%。

表3 抗RA33抗體的比較[n（%）]

注：*與RA組陽性率比較，χ2=22.56，P<0.01；**與RA組陽性率比較，χ2=33.97，P<0.01

2.1.4 RF的比較 RA組中抗RF的陽性率為75.56%，高于正常對(duì)照組（χ2=51.74，P<0.01），非RA組為50.47%，低于RA組（χ2=13.05，P<0.01）。見表4。RF的敏感性為75.56%，特異性為49.53%。

表4 RF的比較[n（%）]

注：*與RA組陽性率比較，χ2=51.74，P<0.01；** 與RA組陽性率比較，χ2=13.05，P<0.01

2.2 四種抗體AKA、CCP、抗RA33抗體和RF的聯(lián)合檢測(cè)

四種抗體聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度為100.0%，特異性為84.11%，敏感性分別高于AKA的54.45%、anti-CCP的81.12%、抗RA33抗體的44.44%和RF的75.56%，經(jīng)過率的標(biāo)準(zhǔn)化后，差異均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=54.86，P<0.01），見表5。

表5 四種抗體聯(lián)合檢測(cè)的比較[n（%）]

注：聯(lián)合檢測(cè)在RA組和非RA組陽性率比較，χ2=54.86，P<0.01；*四種抗體聯(lián)合檢測(cè)陽性為四種抗體檢測(cè)結(jié)果中，至少一種抗體檢測(cè)為陽性；**四種抗體聯(lián)合檢測(cè)陰性為四種抗體檢測(cè)

3 討論

我國(guó)RA的患病率0.32%～0.36%左右，是造成社會(huì)勞動(dòng)力喪失的主要原因之一[6]，因此對(duì)RA 進(jìn)行早期、可靠的診斷，并采取適當(dāng)?shù)闹委熆刂撇∏榈陌l(fā)展、避免不可逆的關(guān)節(jié)損壞是十分重要的。

RF主要存在于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的血清和關(guān)節(jié)液中，是診斷RA的主要血清學(xué)指標(biāo)之一[7]。RA患者RF陽性率為52%～92%，一般RF陽性者療效差，并伴有其他并發(fā)癥，如周圍神經(jīng)炎及動(dòng)脈炎等；RF陰性者病情較輕，并發(fā)癥較少，療效較好[8]。RF陰轉(zhuǎn)或含量降低，可作為評(píng)價(jià)藥物療效及病情緩解的一個(gè)指標(biāo)。但因其在正常人（正常人RF多數(shù)為陰性，陽性率2%～5%，隨年齡增長(zhǎng)可呈增高趨勢(shì)）及非RA的其他自身免疫疾病患者體中也可呈陽性，尤其在非RA的其他自身免疫疾病中，陽性率保持較高水平，所以臨床診斷的價(jià)值有一定局限性[9]。本研究中RF在RA組的敏感性和特異性分別為75.56%和49.53%，因此RF是RA的一個(gè)敏感但不十分特異的指標(biāo)。因此，對(duì)于RF檢測(cè)結(jié)果，應(yīng)結(jié)合臨床病情和其他指標(biāo)綜合分析。隨著以臨床為導(dǎo)向的基礎(chǔ)研究日益深入，越來越多的相關(guān)血清學(xué)標(biāo)記物出現(xiàn)在學(xué)者面前，當(dāng)前AKA、anti-CCP、抗RA33抗體等指標(biāo)的檢測(cè)越來越廣泛地應(yīng)用到臨床當(dāng)中來。

AKA能與鼠食管角質(zhì)層反應(yīng)，稱之為抗角蛋白抗體，是抗絲集蛋白抗體之一，而且是RA的一個(gè)特異的指標(biāo)。多項(xiàng)研究表明在RA早期檢測(cè)到的抗絲集蛋白抗體是臨床癥狀發(fā)展的標(biāo)志。RA患者的晨僵時(shí)間以及關(guān)節(jié)壓痛數(shù)都與AKA有關(guān)，有報(bào)道說AKA的持續(xù)陽性提示RA的預(yù)后不良[10]。本研究RA組患者AKA顯著高于非RA組和對(duì)照組，表明AKA對(duì)于診斷RA具有一定價(jià)值。1998年Scheliehens發(fā)現(xiàn)瓜氨酸是RA病人血清中抗絲集蛋白相關(guān)抗體的共同抗原決定簇，并人工合成環(huán)絲氨酸多肽（CCP），以此為抗原建立了ELISA方法用于檢測(cè)RA患者血清中的CCP抗體[11]。anti-CCP抗體與RF具有相同的靈敏度（anti-CCP抗體：80%，RF：79%），但特異性更高（anti-CCP抗體：96%～100%，RF：63%），而且抗CCP抗體的滴度還與疾病的活動(dòng)度有很高的相關(guān)性，因而具有更為重要的臨床意義[12]。本研究RA組患者anti-CCP顯著高于其它組，而且單項(xiàng)檢測(cè)CCP診斷RA的靈敏度最高，說明CCP可作為診斷依據(jù)之一。RA33是異質(zhì)性核糖核蛋白的核心蛋白A2，與分子量33KD的核酸蛋白發(fā)生反應(yīng)，因而定名為抗RA33抗體，研究發(fā)現(xiàn)該抗體除在RA患者中呈陽性外，在SLE和混合性結(jié)締組織病中也有較低陽性率[13]。本研究RA組患者RA33高于其它兩組，但單項(xiàng)檢測(cè)RA33診斷RA的敏感度最低，表明RA33單項(xiàng)檢測(cè)用于診斷RA會(huì)有較多漏檢，但通過聯(lián)合檢測(cè)AKA、anti-CCP、抗RA33抗體和RF四個(gè)指標(biāo)，能綜合各自的優(yōu)點(diǎn)，提高對(duì)RA的準(zhǔn)確診斷，更大程度地防止漏診和誤診，使患者得到準(zhǔn)確和及時(shí)的治療，減少致殘率。

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（收稿日期：2015-04-20）