摘要：研究了0.2%Tu-2制劑對肉兔腸道消化酶活性及生長性能的影響，進(jìn)一步探討酶對肉兔的作用機(jī)理，為該制劑的生產(chǎn)和應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。選用體格健壯、體重基本相同的35日齡肉兔120只，隨機(jī)平均分成對照組和試驗(yàn)組兩組。對照組自始至終飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組35～59日齡在基礎(chǔ)日糧中添加0.2% Tu-2制劑，然后停止添加Tu-2制劑。觀察并記錄肉兔糞便中4種消化酶活性變化規(guī)律和生長情況。結(jié)果表明，添加0.2%Tu-2制劑后，肉兔糞便中纖維素酶、蛋白酶、α-淀粉酶和脂肪酶的平均酶活力比對照組提高幅度分別為36.65%、31.81%、20.99%、23.08%。平均增重提高16.40%，料重比降低14.15%。但當(dāng)停飼Tu-2制劑后，試驗(yàn)組中肉兔各項(xiàng)指標(biāo)又逐漸接近對照組。由此可以說明，Tu-2制劑可以改善肉兔腸道內(nèi)生態(tài)環(huán)境，提高肉兔腸道多種消化酶活性，增加飼料轉(zhuǎn)化率，改善肉兔的生長性能。

關(guān)鍵詞：肉兔；0.2%Tu-2制劑；消化酶；生長性能

中圖分類號：S816.7 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2015）07-1641-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.07.028

兔肉具有高蛋白質(zhì)、高賴氨酸（占蛋白質(zhì)的9.6%左右）、高消化率、高煙酸；低脂肪（4.9%）、低膽固醇、低熱量等特點(diǎn)。近10多年來，兔肉已成為發(fā)達(dá)國家人們的時(shí)興肉食品。隨著國內(nèi)人們生活水平的不斷提高，國外的大量需求，肉兔養(yǎng)殖將在中國蓬勃發(fā)展。如何提高兔肉的質(zhì)量和數(shù)量是當(dāng)前面臨的難題之一。

肉仔兔消化系統(tǒng)尚未完全發(fā)育，消化酶分泌不足，導(dǎo)致飼料利用率低，在其飼料中添加外源性的益生素，可促進(jìn)兔腸道中消化酶的分泌。

益生素（Probiotics）又稱微生態(tài)制劑，可促進(jìn)動物的消化吸收，是提高飼料轉(zhuǎn)化率的一種有效途徑[1-4]。酶是生物催化劑，不僅可提高飼料利用率而且對畜禽產(chǎn)品無毒副作用，在許多方面益生素克服了抗生素作為飼料添加劑所帶來的不良影響[5-9]，沒有污染更有利于環(huán)鏡保護(hù)。Tu-2制劑就是這樣的微生態(tài)制劑，在肉兔腸道中可提高部分消化酶活性、增加有益菌數(shù)量及對兔有良好的促生長性能，這些都將日益受到眾多用戶的關(guān)注。

國內(nèi)也有關(guān)于用益生素提高肉兔生長性能等方面的相關(guān)報(bào)道，例如石傳林等[10]用益生素飼喂90 d后，可使肉兔的體重提高15.2%，差異顯著。此外益生素對雞、豬、牛的作用也有很多類似報(bào)道[11-16]，但對其機(jī)理都未進(jìn)行全面而更加深入的分析研究。

Tu-2制劑主要是從健康肉兔腸道中分離篩選得到的以枯草芽孢桿菌為主的益生菌株，當(dāng)加入到肉兔腸道中后，在一定時(shí)間內(nèi)可提高消化酶活性。

本試驗(yàn)通過測定比較供試肉兔的生長增重情況及糞便中消化酶活力，進(jìn)一步研究Tu-2制劑對肉兔腸道消化酶的作用及變化規(guī)律。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

Tu-2制劑：是從肉兔腸道中分離、篩選枯草芽孢桿菌Tu-1基礎(chǔ)上進(jìn)一步分離篩選、發(fā)酵制備而成，簡稱Tu-2制劑或Tu-2菌株。

試驗(yàn)動物：購自北京新西蘭肉兔養(yǎng)殖場，從大莊兔養(yǎng)殖基地購買。

飼料：大莊兔養(yǎng)殖基地提供，基礎(chǔ)日糧組成與營養(yǎng)水平見表1所示。

1.2 肉兔飼喂管理及取樣方法

選取35日齡肉兔120只，隨機(jī)平均分成對照組和試驗(yàn)組。試驗(yàn)組1～25 d（肉兔35～59日齡））在基礎(chǔ)日糧中添加0.2%Tu-2制劑，對照組則自始至終不加Tu-2制劑。單籠飼養(yǎng)，內(nèi)外環(huán)境一致，每天定時(shí)添料，記錄各組的采食量和兔重量，飼養(yǎng)75 d出欄。分別在試驗(yàn)第1、25、40天時(shí)準(zhǔn)確稱重并精確計(jì)算肉兔耗料重量、增重量和料重比。采集對照組和試驗(yàn)組新鮮糞便樣品于滅菌牛皮紙袋中，肉兔在前1～10 d（35～44日齡）每天取樣1次， 11～25 d時(shí)每3 d取樣1次，之后每5 d取樣一次。測定糞便中的4種消化酶活力的變化情況。

1.3 待測酶液的制備及測定

準(zhǔn)確稱取2.5 g肉兔糞便（對照組和添加組）分別放于小燒杯中，加入1%氯化鈉和不同酶最適pH的磷酸鹽緩沖溶液共計(jì)10 mL，浸泡40～50 min（期間不斷攪拌），然后10 000 r/min冷凍離心10 min，吸取上清液各1 mL，即為待測酶液。分別測定纖維素酶、蛋白酶、α-淀粉酶和脂肪酶的活力（在測定酶過程中光密度吸收值高低可通過稀釋、濃縮或增減待測酶液量，使光密度吸收值處于儀器所在最適測定范圍內(nèi)），測定方法參照文獻(xiàn)[17-21]。

2 結(jié)果與分析

2.1 0.2%Tu-2制劑對肉兔糞便中消化酶活力的影響

由圖1可知，肉兔飼料中添加0.2%Tu-2制劑后，與對照組比較，試驗(yàn)組糞便中的纖維素酶、蛋白酶、α-淀粉酶和脂肪酶活力均逐日提高，第7天兩組的差異達(dá)到最大值，且在第8～25天這些差異保持基本穩(wěn)定。25 d后（即停飼Tu-2制劑后）試驗(yàn)組酶活力又逐漸降低（兩組的酶活力逐漸接近）。以第8～25天的平均酶活計(jì)算，試驗(yàn)組肉兔糞便中的纖維素酶、蛋白酶、α-淀粉酶和脂肪酶的平均酶活力比對照組分別提高了36.65%、31.81%、20.99%、23.08%。

2.2 0.2%Tu-2制劑對肉兔生長的影響

從表2可知，在試驗(yàn)組肉兔中添加飼喂0.2%Tu-2制劑階段（即1～25 d），試驗(yàn)組比對照組平均增重提高16.40%，料重比降低14.15%。當(dāng)停飼Tu-2制劑后（即試驗(yàn)第26～40天），試驗(yàn)組比對照組平均增重僅提高6.81%，料重比降低6.30%。

3 小結(jié)與討論

0.2%Tu-2制劑作為外源性消化酶具有提高肉兔腸道纖維素酶、蛋白酶、α-淀粉酶和脂肪酶等消化酶活力的特性，因而Tu-2制劑的芽孢在肉兔腸道內(nèi)萌發(fā)增殖后可提高一些消化酶活力。試驗(yàn)結(jié)果表明，添加0.2%Tu-2制劑后，肉兔糞便中纖維素酶、蛋白酶、α-淀粉酶和脂肪酶的平均酶活力比對照組有所提高。肉兔平均日增重顯著增加，說明飼料轉(zhuǎn)化率提高。試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)0.2%Tu-2制劑對肉兔糞便各種酶活力的影響具有一定規(guī)律：試驗(yàn)前期，隨著天數(shù)的增加試驗(yàn)組糞便的各種酶活力逐漸增加，第7天達(dá)到較高水平，第8～21天酶活力的變化比較平穩(wěn)。有報(bào)道稱微生態(tài)制劑在動物體內(nèi)的定植需要6～7 d[12]，Tu-2芽孢桿菌制劑在肉兔腸道內(nèi)的作用規(guī)律與之相符，故從試驗(yàn)第8天開始計(jì)算試驗(yàn)組和對照組平均酶活力并進(jìn)行比較，這些變化均與腸道中一些消化酶活力的提高息息相關(guān)。

停止飼喂0.2%Tu-2制劑后，試驗(yàn)組糞便中消化酶活力又逐漸接近于對照組，應(yīng)長期不間斷添加。這與Lee等[22]的研究報(bào)道相類似，即用芽孢桿菌飼喂肉兔可以促進(jìn)腸上皮細(xì)胞的生長，提高小腸絨毛長度，改善腸道黏膜形態(tài)，提高對養(yǎng)分的吸收能力。本研究指出Tu-2制劑在肉兔消化道中定植不穩(wěn)定，不能成為肉兔腸道的常駐菌群，若單獨(dú)使用這種基礎(chǔ)飼料，很難滿足肉兔的用量。該結(jié)果表明0.2%Tu-2制劑在應(yīng)用時(shí)應(yīng)長期不間斷地添加。

參考文獻(xiàn)：

[1] 李春鳳，王 靜，林顯華，等.枯草芽孢桿菌B7對肉兔生長性能和蛋白消化率的影響[J].畜牧與飼料科學(xué)，2012，33（5-6）：1-2.

[2] 呂道俊，何明清.飼用芽孢桿菌研究進(jìn)展[J].四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 1994，（12）：635-638.

[3] 王士長，徐菊芬，何若剛，等.益生素的研究及應(yīng)用[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志，1999，1（3）：184-187.

[4] 郝小燕，趙 衛(wèi)，曹 虹，等.益生菌對腸道致病菌腸粘附抑制作用[J].中國公共衛(wèi)生，2010，12（26）：1516-1518.

[5] 李德發(fā)，楊全明.飼用酶制劑的研究與應(yīng)用[J].飼料博覽，1998，10（1）：3-6.

[6] 李衛(wèi)芬，李雅麗，秦 燕，等.枯草芽孢桿菌對肉兔腸道消化酶活性、黏膜結(jié)構(gòu)及腸道菌群組成的影響[J].中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2012， 32（5）：666-669.

[7] 高振華，張寶慶，趙貴明，等，日糧中添加纖維素酶對兔生長性能的影響[J].中國飼料，1997，（20）：18-19.

[8] 康 健，吳 娟.復(fù)合酶對斷奶肉兔生長性能的影響[J].安徽技術(shù)師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，17（3）：217-219.

[9] 劉桂芬.青霉778-1菌株纖維素酶喂肉牛和肉兔的試驗(yàn)研究[J].飼料工業(yè)，1991，12（4）：18-20.

[10] 石傳林，羅中愛，王化寶.利用加酶益生素飼喂肉兔的試驗(yàn)效果[J].飼料博覽，1999，11（11）：24-25.

[11] 沈素芳，范 寰，馬彥娜，等.微生態(tài)制劑對肉仔雞生產(chǎn)性能的影響[J].中國畜牧獸醫(yī)，2012（8）：120-123.

[12] 李梓慕，姜軍坡，周曙光，等.Bacillus subtilis Z-27制劑對仔豬腸道酶活及消化性能的影響[J].飼料工業(yè)，2012，33（20）：41-45.

[13] 張秀文，齊遵利，劉艷琴.芽孢桿菌的作用機(jī)理及其在斷奶仔豬日糧中的應(yīng)用研究[J].飼料工業(yè)，2007，28（20）：47-49.

[14] 王振華.高產(chǎn)酶活枯草芽孢桿菌制劑在奶牛生產(chǎn)上的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36（27）：11771-11773.

[15] 沈素芳，范 寰，馬彥娜，等.微生態(tài)制劑對肉仔兔生產(chǎn)性能的影響[J].中國畜牧獸醫(yī)，2012（8）：120-123.

[16] 荊忠良，張海峰，王振平，等.微生態(tài)制劑的研究進(jìn)展及其在畜牧生產(chǎn)中的應(yīng)用[J].山東畜牧獸醫(yī)，2007，30（3）：50-51.

[17] NY/T 915-2004，飼料添加劑纖維素酶活力的測定——分光光度法[S].

[18] GB/T 23535-2009，蛋白酶制劑[S].

[19] GB/T 8275-2009，α-淀粉酶制劑[S].

[20] GB/T 23527-2009，食品添加劑[S].

[21] ANDREA W， BJARNE M H，NIELS B H，et al. Fate and effect of ingested Bacillus cereus spores and vegetative cells in the intestinal tract of human-flora-associated rats[J]. FEMS Immunology and Medical Microbiology，2006， 46（1）： 70-77.

[22] LEE K W，LEE S H， LILLEHOJ H S， et al.Effects of direct-fed microbials on growth performance， gut morphometry， and immune characteristics in broiler chickens[J]. Poultry Science， 2010，89（2）： 203-216.