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        注射用阿奇霉素細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法學(xué)驗(yàn)證

        2015-04-29 00:00:00馬曉艷

        【摘 要】本實(shí)驗(yàn)對(duì)阿奇霉素的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法進(jìn)行研究,建立快速準(zhǔn)確的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法。按《中國(guó)藥典》2010版附錄ⅪE細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法進(jìn)行。利用不同廠末生產(chǎn)的鱟試荊進(jìn)行干擾試驗(yàn),全面考察阿奇霉素對(duì)細(xì)茼內(nèi)毒素控查的干擾作用,以確定最佳試驗(yàn)條件。阿奇霉素可以采用稀釋方法排除干擾。本細(xì)茵內(nèi)毒素檢查結(jié)果安全、可靠。

        【關(guān)鍵詞】阿奇霉素;細(xì)菌內(nèi)毒素;研究

        阿奇霉素為半合成的十五員大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。阿奇霉素在甲醇、丙酮、氯傷、無水乙醇或稀鹽酸中易溶,在水中幾乎不溶[1-6]。阿奇霉素適用于化膿性鏈球菌引起的急性咽炎、急性扁桃體炎;肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌以及肺炎支原體所致的肺炎;敏感細(xì)菌引起的鼻竇炎、中耳炎、急性支氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作;敏感細(xì)菌引起的皮膚軟組織感染;沙眼衣原體及非多種耐藥淋病奈瑟菌所致的尿道炎和宮頸炎[7-12]。本實(shí)驗(yàn)對(duì)阿奇霉素的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法進(jìn)行研究,建立快速準(zhǔn)確的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法。

        1.材料與方法

        1.1材料

        (1)儀器Ms3digital旋渦混合器(北京賽美思儀器設(shè)備有限公司),凈化工作臺(tái)(北京卓川電子科技有限公司),DK一600S電熱恒溫水槽(南京先歐儀器制造有限公司),DMH一1電熱干燥箱(南京易普易達(dá)科技發(fā)展有限公司)。

        (2)試劑鱟試劑(北京百星高科技術(shù)開發(fā)有限公司);鱟試劑2(湛江博康海洋生物有限公司)鱟試劑3(上海坤肯生物化工有限公司);鱟試驗(yàn)用水(上海坤肯生物化工有限公司);細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)藥品生物制品檢定所);pH調(diào)節(jié)劑(上海坤肯生物化工有限公司)。

        1.2方法

        (1)試驗(yàn)準(zhǔn)備所有容器、用具都必須經(jīng)過處理,去除外源性內(nèi)毒素,玻璃用具的滅菌處理為180℃2小時(shí)或250℃30分鐘以上,塑料用具須確證不干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

        (2)鱟試劑靈敏度復(fù)核按《中國(guó)藥典》2010版二部附錄Ⅺ E細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法規(guī)定,進(jìn)行鱟試劑的標(biāo)示靈敏度復(fù)核。上海坤肯生物化工有限公司、湛江博康海洋生物有限公司、北京百星高科技術(shù)開發(fā)有限公司三個(gè)廠家的鱟試劑均符合規(guī)定。1.2.3阿奇霉素細(xì)菌內(nèi)毒素檢查干擾試驗(yàn)

        1.3干擾預(yù)試驗(yàn)

        阿奇霉素細(xì)菌內(nèi)毒素檢查干擾本品,加鱟試驗(yàn)用水進(jìn)行供試品溶液和供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液的配制。供試品溶液配制:取三個(gè)批號(hào)的供試品,分別用用鱟試驗(yàn)用水10mL充分振搖使溶解。制備成0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.42mg/mL、0.83mg/mL、1.67mg/mL、3.33mg/mL六個(gè)濃度,并用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH值至6~8。細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品溶液稀釋方法:用lmL的鱟試驗(yàn)用水溶解1支細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品,用旋渦混合器連續(xù)混合十分鐘,再用鱟試驗(yàn)用水稀釋成4λ、2λ,進(jìn)行下一步稀釋前,至少混和三十秒。供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液的配制:制備成0.1mg/mL+2λ、0.2mg/mL+2λ、0.42mg/mL+2λ、0.83mg/mL+2λ、1.67mg/mL+2λ、3.33mg/mL+2λ六個(gè)濃度。試驗(yàn)過程:取上海坤肯生物化工有限公司、湛江博康海洋生物有限公司、北京百星高科技術(shù)開發(fā)有限公司三個(gè)廠家的鱟試劑,先分別加人0.1mL 鱟試驗(yàn)用水溶解,再分別加入0.1mL供試品和供試品陽(yáng)性各濃度稀釋液,混勻后,于三十七攝氏度保溫六十分鐘,同時(shí)設(shè)陰性和陽(yáng)性對(duì)照,每個(gè)濃度平行做2管。三個(gè)批號(hào)供試品溶液,三個(gè)廠家的鱟試劑結(jié)果均為濃度為3.33mg/mL未凝固;濃度為1.67mg/mL未凝固;濃度為0.83mg/mL未凝固;濃度為0.42mg/mL未凝固;濃度為0.2mg/mL未凝固;濃度為0.1mg/mL未凝固.三個(gè)批號(hào)陽(yáng)性對(duì)照溶液,三個(gè)廠家的鱟試劑結(jié)果為濃度為0.1mg/mL均凝固;濃度為0.2mg/mL凝固;濃度為0.42mg/mL凝固;濃度為0.83mg/mL凝固;濃度為1.67mg/mL凝固;濃度為3.33mg/mL未凝固。。實(shí)驗(yàn)濃度選擇含阿奇霉素為1.67mg/mL的稀釋液。

        1.4供試品的干擾試驗(yàn)

        為進(jìn)一步確證供試品溶液對(duì)0.25EU/mL的鱟試劑是否存在干擾作用,分別用鱟試驗(yàn)用水和供試品1.67mg/mL稀釋液進(jìn)行實(shí)驗(yàn),將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品配制成2λ、λ、0.5λ、0.25λ濃度的系列內(nèi)毒素溶液。供試品2.5mg/mL稀釋液的制備:取上述三個(gè)批號(hào)的供試品,分別用鱟試驗(yàn)用水稀釋成含吉西他濱1.67mg/mL的供試液。用鱟試驗(yàn)用水與1.67mg/mL供試液分別將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成0.5EU/mL、0.25EU/mL、0.125EU/mL、0.0625EU/mL四個(gè)濃度,作為細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶液和細(xì)菌內(nèi)毒素供試品溶液。取上述三個(gè)廠家的鱟試劑,每支分別加0.1毫升鱟試驗(yàn)用水溶解,加入2λ、λ、0.5λ、0.25λ濃度的系列內(nèi)毒素溶液和供試液各1毫升,于三十七攝氏度保溫六十分鐘。供試品批號(hào)為131001,鱟試劑廠家為上海坤肯生物化工有限公司,細(xì)菌內(nèi)毒素濃度0.5EU/mL凝聚,細(xì)菌內(nèi)毒素濃度0.25EU/mL凝聚,細(xì)菌內(nèi)毒素濃度0.125EU/mL一支凝聚其他未凝聚,細(xì)菌內(nèi)毒素濃度0.0625EU/mL未凝聚,E值均為0.2EU/mL,無干擾作用;供試品批號(hào)為131001,鱟試劑廠家為湛江博康海洋生物有限公司和北京百星高科技術(shù)開發(fā)有限公司,細(xì)菌內(nèi)毒素濃度0.5EU/mL均凝聚,細(xì)菌內(nèi)毒素濃度0.25EU/mL均凝聚,細(xì)菌內(nèi)毒素濃度0.125EU/mL均未凝聚,細(xì)菌內(nèi)毒素濃度0.0625EU/mL均未凝聚,E值均為0.2EU/mL,均無干擾作用供試品批號(hào)為131002、131003,三個(gè)鱟試劑廠家,細(xì)菌內(nèi)毒素濃度0.5EU/mL均凝聚,細(xì)菌內(nèi)毒素濃度0.25EU/mL均凝聚,細(xì)菌內(nèi)毒素濃度0.125EU/mL均未凝聚,細(xì)菌內(nèi)毒素濃度0.0625EU/mL均未凝聚,E值均為0.2EU/mL,均無干擾作用。

        2.結(jié)果

        供試品濃度為經(jīng)稀釋至1.67mg/mL濃度使用λ=0.25EU/mL鱟試劑檢驗(yàn)時(shí).證實(shí)可消除其對(duì)檢驗(yàn)的干擾,無干擾作用。本細(xì)茵內(nèi)毒素檢查方法安全、可靠。 [科]

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