【摘 要】本文對藥品無菌檢測中培養(yǎng)基滅菌控溫驗證方法進行研究。

【關鍵詞】藥品；無菌；驗證

無菌檢查法系指檢查藥品、敷料、縫合線、無菌器具及適用于藥典要求無菌檢查的其他品種是否無菌的一種方法[1-5]。無菌檢查全過程應嚴格遵守無菌操作，防止微生物污染。培養(yǎng)基（Medium）是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料，一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽（包括微量元素）以及生長素和水等[6-10]。本文對藥品無菌檢測中培養(yǎng)基滅菌控溫驗證方法進行研究。

1.驗證目的

本次驗證主要進行的運行、性能確認，以確認本設備能夠達到工藝技術要求并滿足GMP要求。

2.驗證范圍

適用于化驗室立式壓力蒸汽滅菌柜的驗證。

3.驗證相關文件及資料

（1）相關文件及資料：藥品生產質量管理規(guī)范（2010年修訂）、立式壓力蒸汽滅菌柜使用說明書。

（2）所需儀器、設備：EBRO無線溫度檢測儀。

（3）所需試劑：嗜熱脂肪桿菌指示劑。

4.法規(guī)標準要求

（1）設備的設計與安裝應符合藥品生產及工藝的要求，安全、穩(wěn)定、可靠，易于清洗、消毒或滅菌，便于生產操作和維修保養(yǎng)，并能防止差錯和交叉污染。

（2）用于生產和檢驗的儀器、儀表、量具、衡器等其適用范圍和精密度應符合生產和檢驗要求，有明顯的合格標志，并定期校驗。

（3）壓力容器應具有法律部門認可的各項設計、制造、檢測、使用等許可證和報告。

5.驗證實施

5.1人員培訓

（1）目的：使生產相關人員掌握相關操作規(guī)程及工藝規(guī)程。

（2）程序：對驗證實施有關人員進行滅菌罐驗證方案培訓、滅菌罐操作規(guī)程培訓。

（3）可接受標準：上崗操作人員已經接受了方案及操作規(guī)程培訓，并經考核合格后方可上崗。

5.2運行確認（OQ）

5.2.1滅菌罐蓋運行可控

（1）目的：檢查并確認滅菌罐蓋運行可控。

（2）程序：抬起滅菌罐蓋，關閉滅菌罐蓋，此過程重復三次。

（3）滅菌罐蓋密封圈目測外觀

（4）可接受標準：滅菌罐蓋開合正常。滅菌罐蓋密封圈目測外觀無任何可清潔污漬與油漬，應無密封圈脫出密封槽、老化、破損現象。

5.2.2滅菌柜PLC手動程序測試

（1）目的：確認滅菌罐手動操作程序符合設備要求。

（2）程序：按照滅菌罐標準操作規(guī)程進入手動操作界面，將控制面板上的綠色數顯溫度設定為129℃，時間任意設定（不為零）。

（3）可接受標準：溫度設定為130℃時安全閥跳起，微電腦控制停止。

5.3 性能確認（PQ）

5.3.1儀表性能確認

（1）目的：對儀表性能進行確認，確認其能夠達到使用要求。

（2）程序：確認溫度指示、傳感器、溫度記錄儀的讀數值：空載熱分布測試時同時監(jiān)測設備自身控制系統(tǒng)的溫度顯示示數和驗證儀冷點溫度探頭顯示示數，并記錄3次。確認時間記錄儀：當滅菌罐腔室內達到預置的滅菌溫度時，用標準秒表計時，當滅菌罐的滅菌計時達到時停止標準秒表的計時，記錄滅菌時間設定值和標準秒表計時值，連續(xù)記錄3次。

（3）可接受標準：

溫度探頭符合要求；溫度指示探頭實際顯示數值與設定溫度之間的誤差應≤±0.5℃；時間記錄儀與標準時間指示裝置之間的誤差應≤±1%。

5.3.2熱分布測試

（1）目的：檢查并確認滅菌罐在預定的滅菌條件下，空載運行時滅菌罐內的溫度均勻性，確認滅菌罐控制用傳感器位于滅菌室內的冷點區(qū)；檢查并確認滅菌罐在滿載運行時，滅菌罐的溫度均勻性。

（2）程序：

1）空載熱分布實驗：將12個溫度探頭均勻分布在腔室內的物架上且探頭不與腔室內壁及其他金屬接觸，至少有一支探頭位于設備自身控制系統(tǒng)的溫度傳感器附近。運行自動滅菌程序，確認內室溫度為121℃時開始計時，每10秒鐘采集一次各探頭溫度值，30分鐘后結束，以證明熱分布的均一性，確定最冷點及F0值，以上測試連續(xù)做三次。

2）負載熱分布實驗：將腔室內放入待滅菌的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基放入1L三角燒瓶中，每瓶最多放1000ml培養(yǎng)基。腔室內最多放四瓶，最少放一瓶。其它方法與空載熱分布相同，同樣取得一組數據。實驗4次。分別在放一瓶、兩瓶、三瓶、四瓶情況下做負載熱分布試驗，確認最冷點及達到滅菌條件時間。

3）熱分布探頭分布圖：

將1支探頭與溫度控制和記錄的傳感器（冷點）旁，其余探頭均勻置于腔室各處，各探頭的測溫點不得與金屬及其他表面接觸。

4）分別對照空載熱分布及負載熱分布測定記錄進行滅菌過程溫度均勻性的分析，主要看滅菌腔室達到設定的滅菌溫度并穩(wěn)定后（一般3分鐘后）至滅菌計時結束期間滅菌室的溫度分布情況，在“高低差”欄中找出最大的5個數值并將最高、最低與平均值相比較，找出最大誤差。

（3）可接受標準：

確認滅菌溫度≥121℃，滅菌時間：30分鐘，F0>15，各點的溫度在每次滅菌程序運行過程中的差值≤1℃。

5.3.3熱穿透試驗和生物指示劑挑戰(zhàn)性實驗

（1）目的：確定裝載中的“最冷點”，并肯定該點在滅菌過程中獲得充分的無菌保證值。

（2）程序：將探頭放入培養(yǎng)基內，分別按負載熱分布裝載方式進行熱穿透試驗。其他方法與滿載熱分布相同，各得出三組數據；生物指示劑挑戰(zhàn)性實驗隨熱穿透試驗同步進行，將嗜熱脂肪桿菌指示劑1支放到非冷點培養(yǎng)基燒瓶內，另一支放到冷點培養(yǎng)基燒瓶內，一起滅菌。

（3）可接受標準：滿載狀態(tài)下，確認滅菌溫度121℃，滅菌時間：30分鐘，F0≥15將指示劑放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7天，56-60℃，指示劑應呈紫色。另取一支未滅菌的指示劑，一同培養(yǎng)后，應呈黃色。

5.3.4滅菌效果驗證

微生物挑戰(zhàn)性試驗合格后，按照滅菌程序連續(xù)滅三批培養(yǎng)基。其中每批包括營養(yǎng)瓊脂、玫瑰紅鈉瓊脂、改良馬丁瓊脂。滅菌后將上述培養(yǎng)基鋪成菌碟后進行培養(yǎng)?？山邮軜藴剩壕鷳獰o菌生長。 [科]

【參考文獻】

[1]樂正永.無菌檢查方法驗證資料分析[J].中國現代藥物應用，2008（23）.

[2]劉玉軍，徐占鰲，梁毅.藥品無菌過濾驗證的缺陷探析[J].中國藥事，2010（06）.

[3]陳西勇，于淑渤，梁宏.無菌藥品生產發(fā)生微生物污染的因素分析（下）[J].首都醫(yī)藥，2009（08）.

[4]郭紹雄，張祥鳳，謝敬東.實施藥品生產GMP管理的對策分析[J].中國當代醫(yī)藥，2010（02）5（01）.

[5]王新建，王鳳山，王海燕.最終滅菌藥品無菌保證體系和參（下轉第328頁）（上接第300頁）數放行的關鍵因素探討[J].齊魯藥事，2006（03）.

[6]宋勤，袁林娜.中國藥典與歐州藥典無菌檢查培養(yǎng)基靈敏度的比較實驗[J].藥物分析雜志，2005（11）.

[7]許華玉，李智勇，王國榮.2005版《中國藥典》無菌檢查法修訂內容的介紹[J].中國藥品標準，2005（02）.

[8]徐林.GMP的無菌保證[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2000（03）.

[9]趙宏大，謝文，紀紹梅.我國微生物培養(yǎng)基用瓊脂的標準研究[J].中國藥事，2010（06）.

[10]陳西勇，于淑渤，梁宏.無菌藥品生產發(fā)生微生物污染的因素分析（上）[J].首都醫(yī)藥，2009（06）.