【摘 要】本文對無菌工藝模擬試驗進行綜述。

【關(guān)鍵詞】無菌；工藝；模擬

無菌產(chǎn)品主要分為兩大類，一類是最終滅菌產(chǎn)品，另一類是用無菌工藝過程生產(chǎn)的非最終滅菌產(chǎn)品[1-3]。我國新版GMP規(guī)定無菌生產(chǎn)工藝驗證必須實施培養(yǎng)基模擬灌裝試驗[4]。本文對無菌工藝模擬試驗進行綜述。

1.無菌工藝模擬試驗的概念

無菌工藝模擬試驗是采用微生物培養(yǎng)基替代產(chǎn)品對無菌工藝進行評估的驗證技術(shù)，也稱為培養(yǎng)基灌裝試驗[5-9]。無菌工藝模擬試驗的目的是證明在無菌制劑在生產(chǎn)過程中所采用的各種方法和各種規(guī)程以防止微生物污染的水平達到可接受的合格標準的能力，或提供保證所生產(chǎn)產(chǎn)品的無菌性的可信限度達到可接受的合格標準的證據(jù)[10-13]。在培養(yǎng)基模擬試驗中，首先將適當(dāng)體積的無菌液體培養(yǎng)基分裝到無菌西林瓶中，或分裝無菌粉末，然后用注射器將培養(yǎng)基注入瓶中；或者采用粉末分裝過程將一種培養(yǎng)基干粉分裝到西林瓶中，然后再用注射器將其他液體，最后進行微生物培養(yǎng)。

2.無菌工藝模擬試驗的問題分析及應(yīng)對策略

培養(yǎng)基灌裝試驗需要考慮很多關(guān)鍵點促生長試驗、廠房、設(shè)備、工藝、人員、干擾設(shè)計、環(huán)境等。

2.1最差條件的設(shè)計

如在最差條件下能獲得好的結(jié)果，說明在比最差情況要好的實際生產(chǎn)中，無菌保證的可靠性更有保證。通常設(shè)計的最差條件有：在生產(chǎn)結(jié)束進行試驗，超出常規(guī)生產(chǎn)時間還包括不清場直接試驗，無菌風(fēng)險大于正常生產(chǎn)；模擬灌裝程序速度低于正常生產(chǎn)速度，增加了藥品在無菌區(qū)暴露的時間，無菌風(fēng)險大于正常生產(chǎn)；容器規(guī)格為最大敞口容器增加了藥品在無菌區(qū)暴露的面積，無菌風(fēng)險大于正常生產(chǎn)；滅菌的膠塞已貯存26h，超出了24h的貯存期限挑戰(zhàn)貯存時限，無菌風(fēng)險大于正常生產(chǎn)；A/B級區(qū)人員生產(chǎn)人員定員為6人，模擬最大生產(chǎn)人員10人，風(fēng)險大于正常生產(chǎn)；生產(chǎn)設(shè)備故障，更換灌裝頭，灌封線堵塞，輸送軌道的調(diào)節(jié)，破損件的更換非正常干預(yù)，無菌風(fēng)險大于正常生產(chǎn)；采用大豆胰蛋白粉末培養(yǎng)基，增加了微生物生產(chǎn)的營養(yǎng)環(huán)境，無菌風(fēng)險大于正常生產(chǎn)。

2.2培養(yǎng)基微生物性能和無菌性試驗

2.2.1培養(yǎng)基微生物性能實驗

取35瓶裝有5ml培養(yǎng)基的已滅菌的西林瓶，其中5支不接種作為空白對照、5支接種金黃色葡萄球菌（<100cfu）、5支接種枯草芽孢桿菌（<100cfu）、5支接種銅綠假單胞菌（<100cfu）、5支接種生孢梭菌（<100cfu）、5支接種白色念珠菌（<100cfu），5支接種曲霉菌，前四種菌在30～35℃培養(yǎng) 72 h，后兩種在23～28℃培養(yǎng) 7 天，空白試驗分別在30～35℃72h和23～28℃培養(yǎng)7天，培養(yǎng)時間內(nèi)觀察并記錄。培養(yǎng)基微生物性能試驗可接受標準：陰性實驗中應(yīng)無菌生長，接種的陽性對照實驗應(yīng)有菌生產(chǎn)。

2.2.2培養(yǎng)基無菌性試驗

取培養(yǎng)基5ml裝于已滅菌密封的西林瓶中，按照此方法取10個樣依次做好標記，其中9支為陰性實驗，1支接種金黃色葡萄球菌（<100cfu）做陽性對照，所有樣品于23～28℃培養(yǎng)7天，再于30～35℃培養(yǎng)7天，每天觀察，并做記錄。培養(yǎng)基無菌性試驗可接受標準：陰性實驗應(yīng)無菌生長，陽性對照實驗應(yīng)有菌生長。

2.3培養(yǎng)基灌裝過程的記錄

完整的試驗記錄可用于試驗結(jié)果調(diào)查、偏差分析、定期回顧和追溯。試驗過程的記錄主要包括：試驗批記錄、懸浮粒子記錄、培養(yǎng)基微生物性能記錄、培養(yǎng)基無菌性試驗、沉降菌記錄、浮游菌記錄、表面微生物記錄、人員衛(wèi)生監(jiān)測記錄、培訓(xùn)記錄、全程觀察記錄等。

2.4環(huán)境監(jiān)測

2.4.1目的

檢測模擬分裝過程涉及到的A、B、C、D級潔凈區(qū)的塵埃粒子、沉降菌、浮游菌、溫度、濕度、壓差，保證潔凈區(qū)的環(huán)境不會對模擬分裝過程帶來污染。

2.4.2程序

靜態(tài)塵埃粒子測試：潔凈區(qū)內(nèi)只有記錄人1人，對潔凈室內(nèi)的塵埃粒子進行靜態(tài)檢測。動態(tài)塵埃粒子測試：潔凈室內(nèi)應(yīng)進入該區(qū)域模擬實驗的最大人員進出數(shù)。沉降菌動態(tài)測試：A級：每天生產(chǎn)中連續(xù)監(jiān)測，每個菌碟按沉降菌布點圖進行鋪設(shè)，采樣時間不得超過四小時。B級：每天一次，每次生產(chǎn)開始采樣30分鐘。浮游菌的檢測生產(chǎn)開始后動態(tài)監(jiān)測一次，每次采樣量1m3。

表1 塵埃粒子可接受標準

表2 可存活微生物的限度

2.5人員培訓(xùn)

人員培訓(xùn)的目的為使驗證相關(guān)人員掌握相關(guān)方案、操作規(guī)程及工藝規(guī)程。對驗證實施有關(guān)人員進行相關(guān)標準操作規(guī)程以及無菌工藝模擬試驗方案培訓(xùn)，并將培訓(xùn)結(jié)果加入到無菌工藝模擬試驗報告。人員培訓(xùn)可接受標準：上崗操作人員已經(jīng)接受了方案及操作規(guī)程培訓(xùn)，并經(jīng)考核合格后方可上崗。

3.試驗結(jié)果評價

如果試驗結(jié)果證明其污染水平超過規(guī)定的合格限度，則應(yīng)立即停止生產(chǎn)，調(diào)查并記錄污染產(chǎn)生的原因。在調(diào)查結(jié)束并采用相應(yīng)的措施后應(yīng)重復(fù)進行無菌模擬分裝試驗。原因調(diào)查至少應(yīng)包括：HEPA 過濾器的完整性檢測、粒子、風(fēng)速等；生產(chǎn)環(huán)境中微生物監(jiān)測數(shù)據(jù)；操作人員的操作方法、培訓(xùn)情況；無菌室的清潔、清潔規(guī)程的培訓(xùn)及執(zhí)行情況；無菌室生產(chǎn)工具及其他用品的儲存狀況；生產(chǎn)環(huán)境中懸浮粒子監(jiān)測數(shù)據(jù)；操作間的空氣流向、壓差；人員污染的監(jiān)測數(shù)據(jù)等。 [科]

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