張妍　劉宗歡　楊超等

摘要[目的]研究鐵皮石斛組織培養(yǎng)與快速繁殖方法。[方法]以鐵皮石斛蒴果為材料，分別探究不同培養(yǎng)基及培養(yǎng)基添加物對鐵皮石斛原球莖誘導(dǎo)、增殖及生根的影響。[結(jié)果]最適宜的鐵皮石斛萌發(fā)的培養(yǎng)基為1/2MS，加入0.2mg/LNAA的培養(yǎng)基中原球莖增殖率達(dá)120%，在培養(yǎng)基中加入1.0mg/L6BA和20%香蕉提取液均對其芽的增殖有良好的促進(jìn)作用，添加0.25mg/LNAA、2.0mg/L6BA和20%馬鈴薯提取液的培養(yǎng)基中其再生率可高達(dá)220%，0.2mg/LNAA和20%馬鈴薯提取液均可顯著提高鐵皮石斛苗生根生長。[結(jié)論]該研究為鐵皮石斛快速繁殖技術(shù)的應(yīng)用奠定了理論基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞鐵皮石斛；組織培養(yǎng)；快速繁殖

中圖分類號S503.53文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號0517-6611（2015）28-077-02

ResearchonTissueCultureandRapidPropagationofDendrobiiofficmalisCaulisSeedlings

ZHANGYan，LIUZonghuan，YANGChao，LIUTailin *etal

（TianjinTianshiCollege，Tianjin301700）

Abstract[Objective]TheaimwastoresearchthetissuecultureandrapidpropagationofDendrobiiofficmalisCaulis.[Method]Usingcapsularfruitasexplants，theeffectsoftheculturemediumsandadditivestotheprotocorminducing，proliferationandrootingwerediscussed.[Result]TheoptimummediumforinducingtheprotocormofDendrobiioficmalisCauliswas1/2MS.Thegrowthrateofprotocormwas120%inthemediumcontained0.2mg/LNAA.Themediumincluded1.0mg/L6BAor20%bananaextractingsolutionhadpromotiveeffecttothegerminalproliferation.Theregenerationreachedupto220%inthemediumwhichcontained0.25mg/LNAA，2.0mg/L6BAand20%potatoextractingsolution.Themediumadded0.2mg/LNAAor20%potatoextractingsolutionbothimprovedthepotatorootgrowthapparently.[Conclusion]ThestudylaidatheoreticalfoundationforapplicationofrapidpropagationtechniqueofDendrobiiofficmalisCaulis.

KeywordsDendrobiiofficmalisCaulis；Tissueculture；Rapidpropagation

鐵皮石斛（DendrobiiOfficmalisCaulis），又名黑節(jié)草，為蘭科植物鐵皮石斛的干燥莖 [1-2]。其含有的多糖、石斛堿、多種人體所需的微量元素和氨基酸等有效成分，在抗腫瘤、提高人體免疫力、治療胃腸道疾病、抗衰老、抗氧化、抗血小板聚集、降低血糖和治療白內(nèi)障等方面均有良好療效 [3-4]。由于鐵皮石斛對生長環(huán)境要求苛刻，自然繁殖率極低，生長緩慢，因此國內(nèi)市場供應(yīng)緊缺 [5]。該研究以鐵皮石斛蒴果為材料，研究了多種不同有機(jī)物及其組合對鐵皮石斛試管苗鮮重、苗高、長葉、發(fā)芽、生根及長勢等情況的影響，對其快速繁育和推廣種植具有一定的意義 [6-10]。

1材料與方法

1.1材料及處理

未開裂的鐵皮石斛蒴果購于北京農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，鐵皮石斛組培苗由天津市北辰區(qū)董新房子村趙輔林提供。挑選飽滿、未開裂的蒴果，流水沖洗15min，雙蒸水沖洗3～5次。

1.2外植體滅菌

在超凈工作臺上將洗凈的蒴果用75%乙醇沖洗3次后，用酒精棉球擦拭果實表面，無菌水沖洗2～3次，然后用0.1%升汞浸泡2～5min，用無菌水漂洗5次，于酒精燈上灼燒數(shù)秒后用滅菌解剖刀切開口，接種于培養(yǎng)基上，用遮陽布將培養(yǎng)皿包住，暗處培養(yǎng)3d，再轉(zhuǎn)入光下進(jìn)行培養(yǎng)。

1.3增殖培養(yǎng)

外植體在增殖培養(yǎng)基上生長30d后，選取直徑大小在0.5～1.0cm，顏色淡綠色、沒有玻璃化的團(tuán)狀原球莖，接種到MS培養(yǎng)基上。

1.4培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件

鐵皮石斛采用MS作為增殖的基本培養(yǎng)基。用于外植體預(yù)培養(yǎng)的啟動培養(yǎng)基為1/2MS，pH6.0左右，培養(yǎng)條件為溫度（25±2）℃、光照強(qiáng)度1500～2000lx、濕度60%～75%、光照12h/d。

2結(jié)果與分析

2.1不同啟動培養(yǎng)基對無菌苗體系建立的影響

試驗結(jié)果表明，MS、1/2MS、B5、N6培養(yǎng)基的平均萌芽率分別為80%、90%、84%、70%，可見MS培養(yǎng)基平均萌芽率低于B5培養(yǎng)基而高于N6培養(yǎng)基的平均萌芽率，而1/2MS培養(yǎng)基的平均萌芽率最高。

2.2不同濃度NAA對鐵皮石斛原球莖增殖的影響

由表1可知，當(dāng)培養(yǎng)基中添加等量6BA、不同濃度NAA時，原球莖增殖率有所增加；當(dāng)NAA濃度為0.2mg/L時原球莖增殖率最大，達(dá)120%。

2.3不同濃度6BA的培養(yǎng)基對鐵皮石斛芽增殖的影響

由表2可知，在添加等量NAA的條件下，向培養(yǎng)基中添加一定濃度的6BA，鐵皮石斛的芽增殖率顯著上升，而后隨其濃度的增加而下降。1.0mg/L6BA的添加量表現(xiàn)出最高的繁殖率。

2.4不同濃度的香蕉、馬鈴薯提取液對鐵皮石斛芽增殖的影響

由表3可知，在培養(yǎng)基中添加香蕉提取液對芽增殖效果比添加相同濃度的馬鈴薯提取液好。同時發(fā)現(xiàn)添加20%香蕉提取液時，芽及平均葉片數(shù)的倍增率最高，植株均強(qiáng)，葉片呈深綠色，且生出了根。

2.5不同添加物組合對鐵皮石斛再生率的影響

由表4可知，在添加20%馬鈴薯提取液的培養(yǎng)基中，加入不同濃度的NAA與6BA，當(dāng)NAA濃度在0.25mg/L、6BA濃度在2.0mg/L時，鐵皮石斛不但分化率高且生根率也是較高的，由此可見NAA對鐵皮石斛的生根有很大作用，而6BA對分化有很大作用。

2.6不同濃度NAA對鐵皮石斛苗生根的影響

由表5可知，隨NAA的添加濃度的增加，生根率和平均每株生根數(shù)也隨之增加，但平均根長卻顯著縮短且出現(xiàn)黃葉現(xiàn)象。以此判斷雖然高濃度的NAA對生根有利，但卻會對生長產(chǎn)生不良影響。故在這組處理中0.2mg/L的NAA是最為適宜的濃度。

2.7不同濃度的香蕉和馬鈴薯提取液對鐵皮石斛苗生根生長的影響

由表6可知，添加香蕉提取液對生根生長影響不大，而馬鈴薯提取液對生根生長有顯著的促進(jìn)作用，且當(dāng)提取液添加量為20%時最適宜。

3結(jié)論與討論

植物組織培養(yǎng)的困難之一是建立無菌體系，消毒的一個基本原則是既要?dú)⑺乐参锊牧媳砻娴奈⑸?，同時盡可能降低對植物材料的傷害。亦有報道顯示，適宜濃度的ABA、KT、NAA、6BA對原球莖的增殖起促進(jìn)作用。該試驗結(jié)果表明，最適宜的鐵皮石斛萌發(fā)的培養(yǎng)基為1/2MS，加入0.2mg/LNAA的培養(yǎng)基中原球莖增殖率達(dá)120%，在培養(yǎng)基中加入1.0mg/L6BA和20%香蕉提取液均對其芽的增殖有良好的促進(jìn)作用，添加0.25mg/LNAA、2.0mg/L6BA和20%馬鈴薯提取液的培養(yǎng)基中其再生率可高達(dá)220%，0.2mg/LNAA和20%馬鈴薯提取液均可顯著提高鐵皮石斛苗生根生長。

參考文獻(xiàn)

[1]邵華，張玲琪，李俊梅，等.鐵皮石斛研究進(jìn)展[J].中草藥，2004（1）：109-112.

[2]斯金平，諸燕，朱玉球，等.鐵皮石斛人工栽培技術(shù)研究與應(yīng)用進(jìn)展[J].浙江林業(yè)科技，2009，29（6）：66-70.

[3]郭勇，程曉磊.石斛在惡性腫瘤治療中的作用[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007，17（7）：454-455.

[4]張沂平，馬勝林，朱遠(yuǎn).鐵皮楓斗精對腫瘤患者放化療輔助治療的療效觀察[J].中國中西醫(yī)綜合雜志，2000，120（8）：628.

[5]劉強(qiáng)，殷壽華，黃文，等.流蘇石斛瀕危原因及資源保護(hù)[J].亞熱帶植物科學(xué)，2007，36（4）：45-47.

[6]肖昌泰，毛昆明，楊自瓊，等.不同基質(zhì)對鐵皮石斛組培苗成活和生長的影響[J].現(xiàn)在農(nóng)業(yè)科技，2012（4）：147-149.

[7]何俊平，涂小云.不同培養(yǎng)及配方對鐵皮石斛生根培養(yǎng)的影響[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（2）：57-59.

[8]黃萬琳.不同培養(yǎng)基激素配比及營養(yǎng)因子對云南熱區(qū)鐵皮石斛苗的影響[J].曲靖師范學(xué)院學(xué)報，2013，32（3）：60-63.

[9]張治國，王黎，劉驊，等.鐵皮石斛原球莖分化適宜培養(yǎng)基研究[J].中國中藥雜志，1993，18（1）：16-19.

[10]張銘，朱峰，魏小勇，等.鐵皮石斛種胚萌發(fā)和原球莖質(zhì)量控制[J].浙江大學(xué)學(xué)報（理學(xué)版），2000，27（1）：92-94.