饒展鵬　黃麗好

[摘要] 目的 探析HOX基因對早期食管癌的診斷及預后的指導意義。 方法 入選該院2008年2月—2009年2月食管癌患者80例為實驗組，同期入選體檢健康者80名為研究對照，比較人食管癌細胞系及正常細胞系CAES及EC109中表達HOX基因情況， 評估食管癌患者的HOX基因表達陽性組及陰性組的術后生存率情況。結果 人食管癌細胞系CAES及EC109中HOX基因表達陽性情況顯著高于正常細胞系，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）； 食管癌患者HOX基因表達陽性組1、3、5年生存率顯著低于食管癌HOX基因表達陰性組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結論 食管癌患者細胞系表達HOX基因陽性率較高，HOX基因表達陽性食管癌患者生存率較低，HOX對評估早期食管癌診斷及預后具有重要臨床價值。

[關鍵詞]臨床意義；細胞系；食管癌；HOX基因

[中圖分類號]R735.1 [文獻標識碼]A [文章編號]1674-0742（2015）03（c）-0095-02

[Abstract] Objective To explore and analyze the diagnostic and prognostic significance of HOX gene for early esophageal cancer. Methods 80 cases of patients with esophageal cancer from February 2008 to February 2009 in our hospital were selected as experiment group， while 80 cases of healthy subjects were selected as control group. HOX gene expression of esophageal cancer cell and normal gene， CAES and EC109 were compared. Postoperative survival rate of positive and negative HOX gene expression of patients with esophageal cancer were evaluated. Results HOX gene expression of esophageal cancer cell line CAES and EC109 was significantly higher than normal cells. The difference was statistically significant （P <0.05）；The 1-year， 3-year， and 5-year survival rate of positive expression of of patients with esophageal cancer were significantly lower than HOX gene expression negative group. The difference was statistically significant （P <0.05）. Conclusion HOX gene expression positive rate of patients with esophageal cancer is high， while survival rate of HOX gene expression positive patients is low. HOX has important clinical value in evaluate early esophageal cancer diagnosis and prognosis.

[Key words]Clinical significance； Cell line； Esophageal cancer； HOX gene

食管癌在我國的發(fā)病率較高，早期無特異性癥狀不易被發(fā)現，而食管癌的臨床治療效果不甚理想，5年生存率仍較低，預后較差[1]。有研究指出，食管癌患者Homeobox（HOX）基因陽性表達率較高，HOX基因可作為早期食管癌的診斷及判斷預后的重要指標[2]。探析HOX基因對早期食管癌的診斷及預后的指導意義十分關鍵，故該院探析2008年2月—2009年2月人食管癌細胞系CAES及EC109表達HOX基因情況，效果滿意，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機抽取該院2008年2月—2009年2月80例食管癌患者，經手術及病理檢查結果證實。其中男43例，女37例，年齡32～50歲，平均年齡（45.3±2.1）歲。病理分期：Ⅰ期52例，Ⅱa期28例；同期入選體檢健康者80名為研究對照，其中男42例，女38例，年齡32～50歲，平均年齡（45.2±1.2）歲，兩組研究對象的性別、平均年齡等基本情況大體一致。北京市腫瘤防治研究所遺傳室保存人食管癌細胞系CAES及EC109，Gibico公司提供DMEM培養(yǎng)基。

1.2方法

細胞培養(yǎng)：將滅活胎牛血清10%加入培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中加入5%CO2、37℃培養(yǎng)箱內予以培養(yǎng)細胞。提取RNA：細胞總RNA進行TRlzol法提取，采集對數生長期細胞，將TRIzol加入貼壁細胞，1 mL/10 cm2，置于室溫下5 min后放置1.5mL離心管內，對入氯仿0.2 mL，震蕩15 s混勻，置入室溫2 min，4℃12000×g，離心15 min，采集上清液，將異丙醇0.5ml加入，混勻，置于室溫10 min，4°C12000×g，離心10 min，除去上清液，對入75%乙醇1 mL洗滌，干燥。應用適宜DEPC水溶解，應用甲醛變性膠電泳鑒定產物2～4 μL。應用RNase-free DNase處理RNA樣品，37 ℃1 h，2 μL（1 μg/μL）總RNA加入1 μL（10 mmol/L）dNTP、1 μL（0.5 μg/μL）Oligo，對入DEPC水到13 μL，65℃下5 min變性，置于冰上≥1 min，加入1 μL SuperscriptⅢ反轉錄酶、2μL DTT（0.1 mol/L）、1 μLRNasin（40 U/μL）、4μl PCR緩沖液。50℃1 h，70℃15 min，即刻置于冰上，加入80 μlDEPC水，稀釋5倍cDNA產物，25 μL體系內加入cDNA1 μL予以PCR，95 ℃熱啟動5 min，94 ℃變性45 s、適宜溫度45 s、72 ℃合成45 s，循環(huán)38次后72 ℃后延伸7 min。endprint

1.3儀器與試劑

Ambion公司生產的DNA-freeTM試劑盒。

1.4 評估標準

將1%甲醛變性膠電泳加入8μL反應產物中，溴化乙腚染色，紫外線下觀察，陽性表達：出現大小相應條帶[3]。

1.5 統(tǒng)計方法

采用SPSS 18.0軟件系統(tǒng)分析所有數據，計數資料以百分比描述，發(fā)生率的比較用c2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 CAES及EC109中表達HOX基因情況

人食管癌細胞系CAES及EC109中HOX基因表達陽性情況顯著高于正常細胞系，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1。

2.2 食管癌患者的HOX基因表達陽性組及陰性組的術后生存率情況

食管癌患者HOX基因表達陽性組1、3、5年生存率顯著低于食管癌HOX基因表達陰性組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表2。

3 討論

食管癌是發(fā)生在食管上皮組織的惡性腫瘤，占所有惡性腫瘤的2%，以進行性吞咽困難為典型癥狀，臨床多見于40歲以上男性[4]。我國是食管癌高發(fā)國家，食管癌早期無顯著癥狀，可有吞咽梗噎感，臨床多進行手術治療。而食管癌的臨床治療效果不甚理想，術后生存率較低。食管癌的早期診療對預后具有重要的臨床意義[5]。目前，對于食管癌HOX基因表達已成為國內外醫(yī)學學者的重要研究課題[6]。

該研究探析HOX基因對早期食管癌的診斷及預后的臨床意義，結果顯示：人食管癌細胞系CAES及EC109中HOX基因表達陽性情況顯著高于正常細胞系，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；食管癌患者HOX基因表達陽性組1年生存率、3年生存率、5年生存率顯著低于食管癌HOX基因表達陰性組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），與韓楊等[7]的研究結果大體一致，多種基因調控的共同完成胚胎發(fā)育過程，胚胎調控失調可產生腫瘤細胞，HOX基因主要有兩類，I類共39個基因，為成簇排列，分為HOXA、HOXB、HOXC、HOXD四簇，II類散在分布。HOXI類基因編碼蛋白為主要轉錄調節(jié)因子，對胚胎的生長分化及發(fā)育產生調節(jié)作用。HOX基因在多種腫瘤中表達水平較高，而在正常細胞中缺失表達或低表達，腫瘤細胞HOX基因陽性表達組的生存率更低，有助于判斷預后[8]。而HOX基因在癌細胞中的具體作用機制尚在研究中。綜上所述，食管癌患者細胞系表達HOX基因陽性率較高，HOX基因表達陽性食管癌患者生存率較低，HOX對評估早期食管癌診斷及預后具有重要臨床價值。

[參考文獻]

[1] 張玉雪，吳海燕，李慧巖.中國食管癌患者p53基因改變與吸煙、飲酒的Meta分析[J].實用腫瘤學雜志，2011，25（4）：50-51.

[2] 劉亮，左連富，郭建文.食管鱗癌中MDR1基因的表達與多藥耐藥的關系[J].中國老年學雜志，2014（16）：702-703.

[3] 李朝陽，徐致祥，譚家駒，等.p16基因甲基化與食管癌相關研究進展[J].醫(yī)學研究雜志，2012，41（1）：157-161.

[4] 常愛敏，劉春霞，陳云昭，等.食管癌比較基因組雜交研究進展[J].臨床與實驗病理學雜志，2011，27（11）：1225-1228.

[5] 王凱，馬偉，程玉峰，等.食管癌放射敏感性與相關基因的表達[J].國際腫瘤學雜志，2011，38（8）：608-611.

[6] 申潞艷，陳克能.同源盒基因在惡性腫瘤研究中的進展[J].中華實驗外科雜志，2013，30（1）：191-192.

[7] 韓楊，周崇治.同源框基因在消化道腫瘤中的異常表達及相關機制研究[J].國際外科學雜志，2012，39（6）：73-74.

[8] 牛苗苗，戰(zhàn)軍，張宏權，等.HOX 基因在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用[J].解剖學報，2014（3）：430-436.

（收稿日期：2014-12-25）endprint