孔德偉 聶強(qiáng) 朱永

【摘 要】目的：探討食品中色素的測(cè)定方法，對(duì)現(xiàn)行GB/T5009.35-2003，《食品中合成色素測(cè)定》進(jìn)行提出修訂建議。方法：樣品經(jīng)提取后，經(jīng)聚酰胺粉吸附，用氨-乙醇溶液解吸附，中和后水浴濃縮，定容過(guò)濾，以甲醇與乙酸銨溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，紫外254nm檢測(cè)，外標(biāo)定量。

【關(guān)鍵詞】食品 合成色素 檢測(cè) 方法 改進(jìn)

色素作為食品添加劑，可分為食用天然色素和人工合成色素兩大類，前者一般較為安全，人工合成色素是用人工化學(xué)合成方法所得的有機(jī)色素，主要是以煤焦油中分離出來(lái)的苯胺染料為原料制成。本身無(wú)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，但由于成本低廉，色澤鮮艷，著色力強(qiáng)，配色方面，可以增加食品的美觀，在食品生產(chǎn)過(guò)程中被廣泛使用。近幾年，在巨大的經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)使下，導(dǎo)致食品合成色素超標(biāo)，研究資料表明，過(guò)量的攝入人工合成色素，將會(huì)在體內(nèi)蓄積，對(duì)腎臟、肝臟產(chǎn)生一定傷害，因此加強(qiáng)人工合成色素管理，提高人工合成色素快速、準(zhǔn)確檢驗(yàn)十分必要。

1 《食品中合成著色劑的測(cè)定》GB/T5009.35-2003在檢驗(yàn)中遇到的問(wèn)題

《食品中合成著色劑的測(cè)定》GB/T5009.35-2003，第一法為高效液相色譜法，該方法具有檢測(cè)靈敏度高、混合色素分離性能完全等優(yōu)點(diǎn)，且隨著液相色譜儀的普及，該方法已被廣泛的采用，但該方法在分析過(guò)程中存在以下幾個(gè)方面的問(wèn)題：①固體樣品由于本身有很大的粘稠性，在G3垂融漏斗抽濾時(shí)，很難抽濾，有的樣品抽濾8、9個(gè)小時(shí)還不能完全抽濾干凈，嚴(yán)重的造成了檢驗(yàn)效率低、人工合成色素?fù)p失率高等問(wèn)題。②在聚酰胺吸附法中，GB/T5009.35-2003要求試樣溶液加檸檬酸調(diào)PH值到6，這樣會(huì)因PH過(guò)高引起人工合成色素在PH為6的弱酸環(huán)境內(nèi)有一定的溶解度，導(dǎo)致在用甲酸-甲醇洗滌天然色素時(shí)，工合成色素?fù)p失，造成檢驗(yàn)結(jié)果偏低。③流動(dòng)相： GB/T5009.35-2003的 5.3.2中規(guī)定，流動(dòng)相：甲醇：乙酸銨溶液（PH=4.0），這樣會(huì)因流動(dòng)相成酸性，導(dǎo)致人工合成色素在流動(dòng)相內(nèi)的溶解度降低，會(huì)引起結(jié)果不出峰和C18柱子的使用壽命縮短。④梯度洗脫：GB/T5009.35-2003的5.3.3中規(guī)定：甲醇：20%～35%，3%/min；35%～98%，9%/min；98%繼續(xù)6 min，該規(guī)定缺少甲醇：98%～20%以及甲醇：20%的持續(xù)時(shí)間這兩個(gè)梯度洗脫過(guò)程，甲醇：20%的持續(xù)時(shí)間應(yīng)根據(jù)柱壓是否穩(wěn)定來(lái)確定，否則會(huì)引起保留時(shí)間發(fā)生嚴(yán)重漂移，造成無(wú)法對(duì)人工合成色素的峰進(jìn)行定性。⑤由于亮藍(lán)既溶于酸又溶于堿，被吸附的亮藍(lán)極易被甲醇-甲酸溶液洗脫，回收率幾乎為0，造成檢驗(yàn)結(jié)果嚴(yán)重偏低，因此應(yīng)對(duì)亮藍(lán)的檢驗(yàn)進(jìn)行修定。

2 對(duì)《食品中合成著色劑的測(cè)定》GB/T5009.35-2003的幾點(diǎn)建議

針對(duì)上述問(wèn)題，本中心根據(jù)多年的對(duì)食品人工合成色素檢驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，提出以下建議：

①對(duì)于固體樣品在G3垂融漏斗難以抽濾問(wèn)題建議稱取5.00g～10.00g粉碎樣品放入100mL燒杯中，加30mL10%的氨水?dāng)嚢?5min進(jìn)行溶解，然后用快速濾紙進(jìn)行過(guò)濾、洗滌，每次用10%的氨水5mL，洗滌3～5次，收集濾液再用檸檬酸調(diào)PH值到3左右，這樣就可以把固體樣品轉(zhuǎn)化為液體樣品，再用G3垂融漏斗抽濾就比較容易抽濾了，因?yàn)槿斯ず铣缮厥窃趬A性溶液中有較高的溶解度，樣品經(jīng)過(guò)上述方法處理后，絕大部分人工合成色素都轉(zhuǎn)化到濾液中了，這樣就解決了固體樣品在G3垂融漏斗抽濾難的問(wèn)題和人工合成色素?fù)p失率較高的問(wèn)題。②在聚酰胺吸附法中，GB/T5009.35-2003的5.2.1中要求試樣溶液加檸檬酸調(diào)PH值到6，這樣會(huì)因PH過(guò)高引起人工合成色素在PH為6的弱酸環(huán)境內(nèi)有一定的溶解度，導(dǎo)致在用甲酸-甲醇洗滌天然色素時(shí)，工合成色素?fù)p失，造成檢驗(yàn)結(jié)果偏低。建議用檸檬酸試樣的PH值到3，這樣就可以避免人工合成色素在用甲酸-甲醇洗滌天然色素時(shí)，工合成色素?fù)p失的問(wèn)題。③流動(dòng)相： GB/T5009.35-2003的 5.3.2中規(guī)定，流動(dòng)相：甲醇：乙酸銨溶液（PH=4.0），這樣會(huì)因流動(dòng)相成酸性，導(dǎo)致人工合成色素在流動(dòng)相內(nèi)的溶解度降低而析出，會(huì)引起結(jié)果不出峰和C18柱子的使用壽命縮短，建議調(diào)流動(dòng)相乙酸銨溶液的PH值到7左右。④梯度洗脫：GB/T5009.35-2003的5.3.3中規(guī)定：甲醇：20%～35%，3%/min；35%～98%，9%/min；98%繼續(xù)6 min，建議應(yīng)增加甲醇：98%～20%以及甲醇：20%的持續(xù)時(shí)間這兩個(gè)梯度洗脫過(guò)程，確保在進(jìn)行下一樣品時(shí)流動(dòng)相的比例過(guò)度到起始狀態(tài)，甲醇：20%的持續(xù)時(shí)間應(yīng)根據(jù)柱壓是否穩(wěn)定來(lái)確定，否則會(huì)引起保留時(shí)間發(fā)生嚴(yán)重漂移，造成無(wú)法對(duì)人工合成色素的峰進(jìn)行定性。⑤如樣品中含有亮藍(lán)人工合成色素，由于亮藍(lán)既溶于酸又溶于堿，被吸附的亮藍(lán)極易被甲醇-甲酸溶液洗脫，回收率幾乎為0，造成檢驗(yàn)結(jié)果嚴(yán)重偏低，建議取兩份樣品（若是固體樣品用上述方法轉(zhuǎn)化為液體樣品），一份直接進(jìn)行調(diào)PH值、濃縮、定容、過(guò)濾后用于測(cè)定亮藍(lán)，一份按照5.2規(guī)定的處理方法測(cè)定其他色素。

3 試驗(yàn)與結(jié)果

3.1 儀器

Agilent1200高效液相色譜儀（帶自動(dòng)進(jìn)樣器）；真空泵；超聲波清洗器；抽濾器；G3垂融漏斗；0.45 μm過(guò)濾頭。

3.2 試劑

色譜純甲醇；二級(jí)水（電導(dǎo)率<0.10 mS/m，25℃）；色素標(biāo)準(zhǔn)溶液[GBW（E）]；乙酸銨溶液（0.02 mol/L）；甲醇一甲酸混合溶液（6+4）；無(wú)水乙醇一2%氨水一水混合溶液（7+2+1）；聚酰胺粉（過(guò)200目）；乙酸溶液（20%）。

3.3 色素提取

稱取固體樣品綠豆糕7.00g共12份，其中6份用于加標(biāo)回收試驗(yàn)（檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán)均為0.1mg），按上述建議①至⑤制成的樣品溶液調(diào)pH到3，加熱至60℃，將1 g聚酰胺粉加少量水調(diào)成粥狀，倒人樣品溶液中，攪拌片刻，以G3垂融漏斗抽濾，用60℃pH=6的水洗滌3～5次，然后用甲醇一甲酸溶液洗滌3～5次，再用水洗至中性，用乙醇一氨水一水混合液解吸3～5次，每次3 ml，收集解吸液，加乙酸溶液中和，80℃～85℃水浴蒸發(fā)濃縮至20%，加水定容至10 ml，經(jīng)針頭過(guò)濾器（0.45μm）過(guò)濾，待測(cè)。

3.4 色譜條件

色譜柱：SinoChrom ODS—BP柱（250 mm×4.6 mm×5μm），C18預(yù)柱，柱溫為25℃，流動(dòng)相：A為甲醇，B為乙酸銨溶液（0.02 mot/L，PH值為7），梯度洗脫，流速：1.0 mL/min，進(jìn)樣量10μl，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm。

3.5 流動(dòng)相編程（見(jiàn)表1）

4 結(jié)語(yǔ)

實(shí)驗(yàn)表明，在應(yīng)用GB/T5009.35—2003第一法過(guò)程中，按照上述5點(diǎn)建議控制實(shí)驗(yàn)條件：吸附、解吸附、濃縮溫度及體積，梯度洗脫，結(jié)果：樣品抽濾快捷、工合成色素?fù)p失低、各色素保留時(shí)間漂移較小、各色素分離度良好，同時(shí)解決了亮藍(lán)不能檢出的問(wèn)題，各色素回收率滿意。