李彬彬,萬(wàn) 鄭,孔 霞,廖 丹,王籽又,黃國(guó)良△(廣東醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室,廣東省醫(yī)學(xué)分子診斷重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東東莞53808)
表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯通過(guò)調(diào)控P53/miR-34a抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖*
李彬彬1,2,萬(wàn)鄭2,孔霞1,廖丹1,王籽又1,黃國(guó)良2△
(廣東醫(yī)學(xué)院1病理生理學(xué)教研室,2廣東省醫(yī)學(xué)分子診斷重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東東莞523808)
[摘要]目的:觀察表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)對(duì)鼻咽癌細(xì)胞增殖的影響,并以微小RNA-34a (miR-34a)為靶點(diǎn)探討其作用機(jī)制。方法:不同濃度的EGCG處理CNE-2Z細(xì)胞,CCK-8法、EdU染色法和平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力的改變;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期分布的改變; Western blot檢測(cè)P53和Notch1蛋白水平的變化; real-time PCR檢測(cè)miR-34a和Notch1 mRNA的表達(dá)。結(jié)果: EGCG處理后,CNE-2Z細(xì)胞的增殖受到明顯抑制,克隆形成能力降低,細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期,呈劑量依賴關(guān)系;隨著EGCG濃度增高,P53和miR-34a的表達(dá)水平明顯上調(diào),而其下游Notch1 mRNA和蛋白的表達(dá)水平則明顯下降。結(jié)論: EGCG可能通過(guò)調(diào)控P53/miR-34a/Notch1通路誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯,抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖。
[關(guān)鍵詞]表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯;鼻咽癌; P53;微小RNA-34a; Notch1
[修回日期]2015-05-21
△通迅作者Tel: 0769-22896402; E-mail: 44775879@qq.com
鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是高發(fā)于我國(guó)南方地區(qū)和東南亞國(guó)家的惡性腫瘤之一。該腫瘤原發(fā)部位隱蔽,不易早期發(fā)現(xiàn),惡性程度較高,易呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)及早期轉(zhuǎn)移。放射治療是鼻咽癌的主要治療手段,但單一放療手段治療中晚期鼻咽癌病例,5~10年生存率僅有40%左右。因此,尋找有效低毒的天然藥物或綜合治療方案,并探討其作用機(jī)制,對(duì)于提高鼻咽癌的臨床療效及預(yù)后,改善患者生活質(zhì)量有著重要意義。
表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯[(-) -epigallocatechin-3-gallate,EGCG]是綠茶中含量最高和最具有藥用功效的活性成分。近年來(lái),EGCG在腫瘤預(yù)防及抗腫瘤活性上展現(xiàn)了很好的前景。體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)等均發(fā)現(xiàn)EGCG對(duì)肺癌、宮頸癌、胃癌、結(jié)腸癌、肝癌和鼻咽癌等多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有抑制作用。Ruan等[1]對(duì)我國(guó)廣東省兩千多名個(gè)體進(jìn)行病例對(duì)照研究,發(fā)現(xiàn)喝茶與較低的鼻咽癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。近年來(lái)研究顯示,多種微小RNA(microRNA,miRNA)發(fā)揮腫瘤抑制因子或致癌因子的作用,參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、黏附和血管生成等多個(gè)生物學(xué)過(guò)程,有望成為腫瘤治療的新靶點(diǎn)[2]。本研究旨在觀察EGCG對(duì)鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2Z增殖和細(xì)胞周期的影響,并以miRNA-34a為靶點(diǎn),探討其作用機(jī)制。
1主要試劑
EGCG購(gòu)自Sigma,由PBS配成1 g/L,-20℃避光保存; CCK-8試劑盒購(gòu)自Dojindo; EdU試劑盒購(gòu)自廣州銳博生物科技公司; TRIzol試劑購(gòu)自Invitrogen; real-time PCR相關(guān)試劑購(gòu)自Promega; FS Universal SYBR Green Master購(gòu)自Roche;兔抗人P53多抗購(gòu)自Cell Signaling;兔抗人Notch1多抗和鼠抗人β-actin單抗購(gòu)自Santa Cruz;紅外標(biāo)記羊抗兔和羊抗鼠Ⅱ抗購(gòu)自Rockland。
2方法
2.1細(xì)胞培養(yǎng)人低分化鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2Z為本實(shí)驗(yàn)室保存,采用RPMI-1640培養(yǎng)基(含10%胎牛血清,1×105U/L青霉素,100 mg/L鏈霉素)在37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2.2CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活性取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期CNE-2Z細(xì)胞,以3 000 cells/well接種到96孔板,培養(yǎng)24 h后換含不同濃度(10和20 μmol/L) EGCG的RPMI-1640培養(yǎng)基(含2%胎牛血清)處理,每組設(shè)5個(gè)平行孔;分別于24 h、48 h和72 h在每孔加入CCK-8工作液100 μL(含10 μL CCK-8溶液),繼續(xù)培養(yǎng)2 h,在多功能酶標(biāo)儀上測(cè)定450 nm波長(zhǎng)各孔光吸收值(A值),計(jì)算細(xì)胞抑制率。細(xì)胞抑制率(%)=(對(duì)照組A值-實(shí)驗(yàn)組A值)/對(duì)照組A值×100%。
2.3EdU摻入法檢測(cè)細(xì)胞增殖取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期CNE-2Z細(xì)胞,以3 000 cells/well接種到96孔板,培養(yǎng)24 h后換含不同濃度(10和20 μmol/L) EGCG的RPMI-1640培養(yǎng)基(含2%胎牛血清)繼續(xù)培養(yǎng)24 h,每組設(shè)3個(gè)平行孔;加入終質(zhì)量濃度為50 μmol/L的EdU,繼續(xù)培養(yǎng)2 h;加入4%多聚甲醛固定30 min,0.5% Triton X-100室溫孵育20 min;加入1×Apollo反應(yīng)液100 μL避光孵育30 min,再加入5 mg/L Hoechst 33342避光孵育30 min; PBS清洗后,熒光顯微鏡下采集圖像。藍(lán)色為細(xì)胞核,紅色為EdU標(biāo)記處于增殖期的細(xì)胞,細(xì)胞增殖率=增殖細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%。
2.4平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞克隆形成能力取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期CNE-2Z細(xì)胞,以400 cells/well接種到6孔板,培養(yǎng)24 h后給予不同濃度(5和10 μmol/L) EGCG處理,每組設(shè)3個(gè)平行孔,連續(xù)培養(yǎng)約2周;用PBS清洗細(xì)胞2次,甲醇固定15 min后,0.4%結(jié)晶紫染色15 min,流水沖洗;將平皿倒置并疊加一張帶網(wǎng)格的透明膠片,直接計(jì)數(shù)克隆數(shù)。
2.5流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期分布取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期CNE-2Z細(xì)胞接種于6孔板,待細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%滿度后換無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h,使細(xì)胞周期同步化;再給予不同濃度(10和20 μmol/L) EGCG處理24 h,每組設(shè)3個(gè)平行孔;收集細(xì)胞,加入預(yù)冷的70%乙醇固定,4℃過(guò)夜;離心后加入終濃度為100 mg/L RNase和100 mg/L PI染色液400 μL,混勻,室溫避光染色30 min;采用BD FACSCantoⅡ流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)分析。
2.6Western blot檢測(cè)P53和Notch1的蛋白表達(dá)不同濃度的EGCG(10和20 μmol/L)處理CNE-2Z細(xì)胞24 h后,加入細(xì)胞裂解液提取總蛋白;采用BCA法測(cè)定蛋白濃度后加入等量蛋白樣品進(jìn)行10% SDS-PAGE凝膠電泳,將凝膠中的蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF膜上,5%脫脂奶粉封閉2 h;加入I抗[P53抗體和Notch1抗體(1∶500)],4℃孵育過(guò)夜;加入紅外標(biāo)記的II抗(1∶10 000),室溫孵育2 h; Odyssey近紅外雙色激光成像系統(tǒng)掃描成像,Quantity One軟件進(jìn)行條帶灰度分析。以β-actin作為內(nèi)參照。
2.7Real-time PCR檢測(cè)miR-34a和Notch1 mRNA表達(dá)不同濃度的EGCG(10和20 μmol/L)處理CNE-2Z細(xì)胞24 h后,TRIzol提取總RNA。采用帶莖環(huán)結(jié)構(gòu)的miR-34a特異性逆轉(zhuǎn)錄引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成cDNA;以cDNA為模板,采用SYBR GreenⅠ嵌合熒光法在ABI 7500實(shí)時(shí)定量PCR儀進(jìn)行PCR反應(yīng),以U6 RNA作為內(nèi)參照;引物購(gòu)自廣州銳博生物科技有限公司。采用Oligo(dT)引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成cDNA;以cDNA為模板,real-time PCR反應(yīng)檢測(cè)Notch1 mRNA表達(dá)的上游引物為5’-GTCAACGCCGTAGATGACCT-3’,下游引物為5’-TCTCCTCCCTGTTGTTCTGC-3’,以GAPDH作為內(nèi)參照;引物由上海生工生物工程有限公司合成。所有標(biāo)本均重復(fù)3次,計(jì)算出Ct值,采用2-ΔΔCt法進(jìn)行計(jì)算分析。
3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
應(yīng)用SPSS 17.0及GraphPad Prism統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理和分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示,兩組間比較采用t檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
1 CCK-8法檢測(cè)EGCG對(duì)CNE-2Z細(xì)胞活性的影響
在預(yù)實(shí)驗(yàn)中,給予不同濃度的EGCG(5、10、20、40和80μmol/L)作用CNE-2Z細(xì)胞24 h,CCK-8結(jié)果顯示,隨著濃度的增加,EGCG對(duì)CNE-2Z細(xì)胞活性的抑制作用逐漸增強(qiáng),其IC50為33.82 μmol/L。在此基礎(chǔ)上,采用10 μmol/L和20 μmol/L EGCG作用CNE-2Z細(xì)胞不同時(shí)間(24 h、48 h和72 h),結(jié)果如圖1所示,隨藥物濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞活性的抑制率逐漸增加,具有明顯的劑量和時(shí)間效應(yīng)關(guān)系。
Figure 1.The effect of EGCG on the viability in CNE-2Z cells detected by CCK-8 assay.Mean±SD.n=3.圖1 EGCG對(duì)CNE-2Z細(xì)胞活性的影響
2 EdU摻入法檢測(cè)EGCG對(duì)CNE-2Z細(xì)胞增殖的影響
與對(duì)照組相比,EGCG處理24 h組中EdU陽(yáng)性的細(xì)胞明顯減少,且呈劑量依賴關(guān)系,提示EGCG可以減少處于增殖期的細(xì)胞,具有抑制CNE-2Z細(xì)胞增殖的作用,見(jiàn)圖2。
3 EGCG對(duì)CNE-2Z細(xì)胞克隆形成能力的影響
與對(duì)照組相比,5 μmol/L EGCG即可明顯抑制CNE-2Z細(xì)胞的克隆形成能力,其克隆形成數(shù)目和克隆形成大小均減少(P<0.05)。隨著EGCG濃度的增加,其抑制作用更加明顯,見(jiàn)圖3。
4 EGCG對(duì)CNE-2Z細(xì)胞周期的影響
圖4所示,與對(duì)照組相比,EGCG能誘導(dǎo)G0/G1期細(xì)胞的百分率增加,而S期細(xì)胞的百分率減少,呈劑量依賴性,提示EGCG能將CNE-2Z細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期。
5 EGCG對(duì)CNE-2Z細(xì)胞P53表達(dá)的影響
Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,隨著濃度的增加,EGCG能明顯提高P53蛋白的表達(dá)水平,呈劑量依賴關(guān)系,見(jiàn)圖5。
6 EGCG對(duì)CNE-2Z細(xì)胞miR-34a表達(dá)的影響
Real-time PCR結(jié)果顯示,EGCG能明顯上調(diào)miR-34a的表達(dá),并具有濃度依賴性,見(jiàn)圖6。
7 EGCG對(duì)CNE-2Z細(xì)胞Notch1 mRNA和蛋白表達(dá)的影響
Real-time PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,EGCG能明顯抑制Notch1的mRNA和蛋白表達(dá),呈劑量依賴性,見(jiàn)圖7。
Figure 2.The results of EdU assay showed that EGCG inhibited the proliferation of CNE-2Z cells.Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01 vs 0 μmol/L.圖2 EGCG對(duì)CNE-2Z細(xì)胞增殖的抑制作用
Figure 3.EGCG suppressed colony formation of CNE-2Z cells.Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01 vs 0 μmol/L.圖3 EGCG抑制CNE-2Z細(xì)胞的克隆形成能力
綠茶為中華民族的傳統(tǒng)保健飲料,幾乎無(wú)毒副作用,其水溶性提取物含有多種多酚類化合物,其中EGCG的含量最高,也最具有藥用功效。大量研究顯示[3],EGCG可通過(guò)抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、調(diào)節(jié)細(xì)胞代謝中關(guān)鍵酶活性、抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移以及調(diào)節(jié)腫瘤血管形成等多種機(jī)制發(fā)揮抗腫瘤作用。EGCG也發(fā)現(xiàn)能夠提高機(jī)體免疫功能及增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)放療的敏感性[4]。本研究應(yīng)用不同濃度的EGCG處理鼻咽癌細(xì)胞CNE-2Z后,CCK-8法檢測(cè)顯示細(xì)胞生長(zhǎng)受到明顯抑制,呈現(xiàn)劑量和時(shí)間效應(yīng)關(guān)系; EdU摻入法檢測(cè)顯示隨著EGCG濃度的增加,EdU標(biāo)記細(xì)胞的比例逐漸減少,表明EGCG具有抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖的作用。此外,EGCG亦能明顯地降低CNE-2Z細(xì)胞的克隆形成能力。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),EGCG能將CNE-2Z細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期,不能進(jìn)入S期,這可能是EGCG抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖的重要機(jī)制。
Figure 4.The effect of EGCG on the cell cycle distributions in CNE-2Z cells.Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01 vs control group.圖4 EGCG對(duì)CNE-2Z細(xì)胞周期分布的影響
miRNA是真核生物體內(nèi)一類具有調(diào)控功能的非編碼RNA,長(zhǎng)約19~25個(gè)核苷酸,在胞質(zhì)中通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合到下游靶基因mRNA的3’UTR區(qū)域,抑制mRNA的翻譯甚至促使其降解,進(jìn)而調(diào)控靶基因的表達(dá)。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),miRNA表達(dá)或調(diào)控異常與人類多種腫瘤相關(guān)。miRNA參與調(diào)控重要腫瘤相關(guān)基因,發(fā)揮腫瘤抑制基因或者癌基因的功能,在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起重要作用。miR-34a是miR-34家族的成員之一,其基因位于人染色體的1p36.23,這一位點(diǎn)常伴隨多個(gè)基因的缺失或突變,與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。目前多數(shù)研究認(rèn)為miR-34a在多種腫瘤中承擔(dān)抑制因子的作用,外源性表達(dá)miR-34a可通過(guò)調(diào)控細(xì)胞周期阻滯、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和抑制細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移等降低腫瘤細(xì)胞的惡性程度[5-6]。在神經(jīng)母細(xì)胞瘤、前列腺癌、胃癌及非小細(xì)胞肺癌等中均發(fā)現(xiàn)有miR-34a的低表達(dá)或表達(dá)缺失,參與腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展過(guò)程[5,7]。p53作為最重要的抑癌基因,它的突變和缺失在多種腫瘤包括鼻咽癌中是一個(gè)最為常見(jiàn)的生物學(xué)事件。體內(nèi)和體外的實(shí)驗(yàn)均表明,miR-34a是p53直接轉(zhuǎn)錄靶標(biāo),在腫瘤應(yīng)激和DNA損傷的情況下,miR-34a通過(guò)p53依賴的方式誘導(dǎo)表達(dá)[8]。在多種腫瘤如慢性淋巴細(xì)胞白血病、前列腺癌及胃癌等中,均發(fā)現(xiàn)p53的缺失或突變伴隨有miR-34a表達(dá)水平的下調(diào)[9-10]。在前期工作中,我們采用Agilent公司的Human miRNA V16.0芯片,檢測(cè)EGCG對(duì)CNE-2 Z細(xì)胞中miRNA表達(dá)譜的影響,發(fā)現(xiàn)miR-34a表達(dá)是明顯上調(diào)的。采用實(shí)時(shí)定量PCR進(jìn)行驗(yàn)證也顯示,EGCG可上調(diào)CNE-2Z細(xì)胞中miR-34a的表達(dá),呈劑量依賴性。同時(shí),本研究也發(fā)現(xiàn),隨著EGCG濃度增加,P53蛋白的表達(dá)也明顯增高,這可能與EGCG調(diào)控P53蛋白穩(wěn)定性增強(qiáng)進(jìn)而上調(diào)P53表達(dá)有關(guān)[11]。這些結(jié)果提示,EGCG可能通過(guò)促進(jìn)P53/miR-34a表達(dá)調(diào)控鼻咽癌CNE-2Z細(xì)胞G1期阻滯,并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,但其確切的交互關(guān)系尚需進(jìn)一步研究闡明。
Notch1是Notch基因編碼的蛋白家族成員之一,它是一種跨膜受體蛋白,通過(guò)與相應(yīng)的配體結(jié)合在多種細(xì)胞分化發(fā)育中起重要的調(diào)控作用[12]。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),Notch1信號(hào)傳導(dǎo)異常與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。在一些腫瘤中如膠質(zhì)瘤、胰腺癌和結(jié)直腸癌中,Notch1被認(rèn)為作為癌基因起作用,通過(guò)影響細(xì)胞周期相關(guān)蛋白如cyclin D1、cyclin E、CDK2、p27等參與細(xì)胞周期調(diào)控,進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞增殖[13-14]。通過(guò)生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn),miR-34a與Notch1 的3'UTR高度同源配對(duì),螢光素酶實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了miR-34a對(duì)Notch1基因的直接調(diào)控作用[15]。我們應(yīng)用不同濃度的EGCG處理鼻咽癌CNE-2Z細(xì)胞后,發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比,Notch1的mRNA和蛋白表達(dá)水平均是明顯下降的,呈劑量依賴關(guān)系,這就提示EGCG可能通過(guò)降低Notch1表達(dá)抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖,而其作用機(jī)制可能與EGCG上調(diào)P53/miR-34a有關(guān)。但亦有研究顯示Notch1與P53之間存在直接相互關(guān)系,Notch1通過(guò)影響P53蛋白穩(wěn)定性進(jìn)而抑制P53介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡反應(yīng)[16]。
Figure 5.The effect of EGCG on the expression of P53 in the CNE-2Z cells by Western blot.Mean±SD.n=3.*P<0.05 vs 0 μmol/L.圖5 EGCG對(duì)CNE-2Z細(xì)胞P53表達(dá)的影響
Figure 6.The effect of EGCG on the expression of miR-34a in the CNE-2Z cells.Mean±SD.n=3.*P<0.05 vs 0 μmol/L.圖6 EGCG對(duì)CNE-2Z細(xì)胞miR-34a表達(dá)的影響
Figure 7.The effect of EGCG on the expression of Notch1 atmRNA and protein levels in the CNE-2Z cells.Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01 vs 0 μmol/L.圖7 EGCG對(duì)CNE-2Z細(xì)胞Notch1 mRNA和蛋白表達(dá)的影響
綜上所述,EGCG可能通過(guò)調(diào)控P53/miR-34a/Notch1通路誘導(dǎo)鼻咽癌細(xì)胞周期阻滯,抑制細(xì)胞增殖,將為EGCG在鼻咽癌防治中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。
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(責(zé)任編輯:林白霜,羅森)
Inhibitory role of epigallocatechin-3-gallate in proliferation of human nasopharyngeal carcinoma cells by targeting P53/miR-34a
LI Bin-bin1,2,WAN Zheng2,KONG Xia1,LIAO Dan1,WANG Zi-you1,HUANG Guoliang2
(1Department of Pathophysiology,2Key Laboratory for Medical Diagnostics of Guangdong Province,Guangdong Medical College,Dongguan 523808,China.E-mail: 44775879@qq.com)
[ABSTRACT]AIM: To study the effect of epigallocatechin-3-gallate (EGCG) on the proliferation of human nasopharyngeal carcinoma (NPC) cells,and to explore its mechanism by targeting miR-34a.METHODS: Nasopharyngeal carcinoma CNE-2Z cells were treated with various concentrations of EGCG.The ability of cell proliferation was detected by CCK-8 assay,5-ethynyl-2-deoxyuridine (EdU) incorporation assay and colony-forming assay.The cell cycle distributions were analyzed by flow cytometry.The protein levels of P53 and Notch1 were detected by Western blot.The expression of miR-34a and Notch1 mRNA was measured by real-time PCR.RESULTS: EGCG effectively inhibited the proliferation and colony formation of CNE-2Z cells in a dose-dependent manner,which was related to its induction of cell cycle arrest at G0/G1phase.The expression of P53 and miR-34a in CNE-2Z cells was significantly increased after treated with EGCG,while the expression of Notch1 at mRNA and protein levels was markedly suppressed.CONCLUSION: EGCG induces cell cycle arrest and suppresses cell proliferation by regulating the P53/miR-34a/Notch1 pathway in NPC cells.
[KEY WORDS]Epigallocatechin-3-gallate; Nasopharyngeal carcinoma; P53; MicroRNA-34a; Notch1
*[基金項(xiàng)目]廣東省建設(shè)中醫(yī)藥強(qiáng)省科研課題(No.20121111)
[收稿日期]2015-03-17
[文章編號(hào)]1000-4718(2015)09-1557-06
[中圖分類號(hào)]R739.6; R730.23
[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A
doi:10.3969/j.issn.1000-4718.2015.09.004