邰巴達(dá)拉胡，娜 拉，拉喜那木吉拉，巴根那

(內(nèi)蒙古民族大學(xué)，內(nèi)蒙古 通遼 028000)

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蒙藥花錨總雙苯吡酮提取工藝研究

邰巴達(dá)拉胡，娜 拉，拉喜那木吉拉，巴根那*

(內(nèi)蒙古民族大學(xué)，內(nèi)蒙古 通遼 028000)

目的：確定蒙藥花錨雙苯吡酮提取工藝。方法：首先用單因素試驗(yàn)法考察花錨雙苯吡酮提取的主要影響因素，然后采用正交試驗(yàn)法，以花錨雙苯吡酮的量為指標(biāo)，優(yōu)化蒙藥花錨總雙苯吡酮提取的最佳工藝。結(jié)果：花錨雙苯吡酮提取的最佳工藝為乙醇濃度90%，料液比為1∶40，提取時(shí)間8h，提取量可達(dá)到13.826mg/g。結(jié)論：該實(shí)驗(yàn)確定的最佳工藝簡(jiǎn)便易行，提取率和提取量較高，可為花錨雙苯吡酮工業(yè)化生產(chǎn)提供參考依據(jù)。

花錨；雙苯吡酮；提取工藝

蒙藥花錨(HaleniacorniculataL. Cornaz.)，蒙藥名為希依日-地格達(dá)，是蒙醫(yī)傳統(tǒng)藥材。系龍膽科(Gentianaceae)花錨屬(Halenia)一年生植物的干燥全草[1]，生于山溝、林緣、林下、水池濕草地[2]，主要分布在大興安嶺林區(qū)各地以及蒙古、西伯利亞、遠(yuǎn)東、歐洲等地[3]。該藥味苦，性平，效柔、膩，主要功能為退黃，平息“協(xié)日”，利膽，愈傷。臨床用于肝、膽熱，口苦，目黃，頭痛，高燒，尿黃，“協(xié)日”熱，肺熱，傷熱等疾病[4]。據(jù)文獻(xiàn)[5]報(bào)道，目前已從蒙藥花錨中分離得到了雙苯吡酮及其苷類(lèi)、黃酮及其苷類(lèi)、裂環(huán)烯醚萜類(lèi)、三萜類(lèi)和生物堿等類(lèi)型成分，其中雙苯吡酮(xanthones)類(lèi)化合物是龍膽科植物的主要化學(xué)成分，也是蒙藥花錨的主要成分之一，有苯并色原酮、呫噸酮、氧雜蒽酮等別名。是一種黃色的酚性化合物,植物中多為淡黃或無(wú)色的苷類(lèi)形式存在[6-7]。本文采用正交試驗(yàn)法，以總雙苯吡酮含量為指標(biāo)，研究提取時(shí)間、溶劑量和乙醇濃度對(duì)蒙藥花錨中雙苯吡酮提取的影響，從中優(yōu)化提取的最佳條件，為工業(yè)化生產(chǎn)提供參考依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

UV-2501型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(島津)，Rotavapor R-210旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士)Vacuum Pump V-700 真空泵(瑞士)，ISO9001電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司)。蘆丁20086569(中國(guó)藥品生物制品檢定所)，亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉和乙醇等均為分析純。蒙藥花錨采集于內(nèi)蒙古錫林郭勒盟東烏珠穆沁旗，經(jīng)內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院巴特爾教授鑒定為龍膽科(Gentianaceae)花錨屬(Halenia)一年生植物花錨(HaleniacorniculataL. Cornaz.)的干燥全草。

2 雙苯吡酮測(cè)定方法

2.1 蘆丁對(duì)照液制備

精密稱(chēng)取蘆丁對(duì)照品5.0mg，置于10mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解，并用無(wú)水乙醇至刻度，搖勻，即得。

2.2 總雙苯吡酮溶液制備

稱(chēng)取蒙藥花錨粉末10.0g，精密稱(chēng)定，置于250mL圓底燒瓶中，加95%乙醇200mL，回流提取8h，濾過(guò)，濾液即為樣品液。

2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)掃描

分別取樣品液和對(duì)照液0.6mL，分別置于25.0mL和50.0mL容量瓶中，其余按線性關(guān)系考察操作。在400～800nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果見(jiàn)圖1。

A為樣品液；B為對(duì)照液

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

分別取對(duì)照液0、0.5、1.5、2.0、2.5、3.0mL，于50mL容量瓶中，加5%亞硝酸鈉溶液1.5mL，搖勻，放置6min，加10%硝酸鋁溶液1.5mL，搖勻，放置6min，加 4%氫氧化鈉20mL，加水至刻度，搖勻，放置20min后以第一管為空白對(duì)照參比按分光光度法，在510nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為橫坐標(biāo)，濃度為縱坐標(biāo)，回歸方程為：y=0.083 7x+0.035 1，R2=0.999 3，線性范圍為2.5～60μg/mL。結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.5 精密度試驗(yàn)

取樣品液6份，每份0.6mL，按“2.4”項(xiàng)下測(cè)定其吸光度，測(cè)得吸光值的RSD為1.82%。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取樣品液0.6mL，置于25mL容量瓶中，按“2.4”項(xiàng)下測(cè)定其吸光度，每隔30min測(cè)定1次，連續(xù)3h，測(cè)得吸光值的RSD為1.96%。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

稱(chēng)取蒙藥花錨粉末6份，每份5.0g，精密稱(chēng)定，按“2.2”項(xiàng)下制備供試液。分別取供試液0.6mL，按“2.4”項(xiàng)下測(cè)定其吸光度，測(cè)得吸光值的RSD為1.94%。

2.8 加樣回收試驗(yàn)

精密吸取樣品液6份，每份0.6mL，分別加對(duì)照品溶液0.6mL，其他試劑加入量及時(shí)間同“2.4” 項(xiàng)下操作。測(cè)定其吸光度，計(jì)算平均加樣回收率為99.87%，RSD為1.97%。

3 單因素試驗(yàn)

3.1 測(cè)定方法

分別精密吸取單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)項(xiàng)下溶液0.6mL，置于25.0mL容量瓶中，按“2.4”項(xiàng)下操作，測(cè)定其吸光度并計(jì)算總雙苯吡酮含量。

3.2 乙醇濃度對(duì)花錨總雙苯吡酮的影響

稱(chēng)取花錨粉末5份，每份10.0g，于 500mL圓底燒瓶中，分別加入不同濃度的乙醇溶液(50%、60%、70%、80%、90%)200mL，回流提取8h，濾過(guò)。分別精密吸取濾液0.6mL，其他試劑加入量及時(shí)間同“2.4” 項(xiàng)下操作。測(cè)定其吸光度，計(jì)算其百分含量，結(jié)果見(jiàn)圖3。

圖3 乙醇濃度對(duì)花錨雙苯吡酮的影響

3.3 提取時(shí)間對(duì)花錨總雙苯吡酮提取率的影響

稱(chēng)取花錨粉末5份，每份10.0g，于 500mL 圓底燒瓶中，分別加90%乙醇200mL，于同一溫度下分別回流提取4、6、8、10h，每份提取1次，濾過(guò)。分別精密吸取濾液0.6mL，按“2.4” 項(xiàng)下操作。測(cè)定其吸光度，計(jì)算其百分含量，結(jié)果見(jiàn)圖4。

圖4 提取時(shí)間對(duì)花錨總雙苯吡酮的影響

3.4 料液比對(duì)花錨雙苯吡酮含量的影響

稱(chēng)取花錨粉6份，每份10.0g，于 500mL 圓底燒瓶中，分別加90%乙醇1∶5、1∶10、1∶20、1∶30、1∶40 ，回流提取8h，濾過(guò)。分別精密吸取濾液0.6mL，其他試劑加入量及時(shí)間同“2.4” 項(xiàng)下操作。測(cè)定其吸光度，計(jì)算其百分含量，結(jié)果見(jiàn)圖5。

圖5 溶劑量對(duì)花錨總雙苯吡酮提取率的影響

4 正交實(shí)驗(yàn)

4.1 影響因素及水平

根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，確定乙醇濃度、料液比、提取時(shí)間作為考察因素，以雙苯吡酮含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，用L9(34)正交表安排試驗(yàn)，因素水平見(jiàn)表1。

表1 影響因素和水平

4.2 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

稱(chēng)取藥材，共計(jì)9份，每份10.0g，按正交試驗(yàn)表安排實(shí)驗(yàn)，以雙苯吡酮測(cè)得量為考察指標(biāo)，結(jié)果如表2所示。

表2 提取工藝正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

對(duì)表2進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，由直觀分析可知，以總黃酮含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，主要因素依次為提取時(shí)間、料液比、乙醇濃度，最佳工藝為A3B2C2。花錨總雙苯吡酮提取的最佳工藝為：乙醇溶劑濃度為90%，提取時(shí)間為8h，料液比1∶40，提取量可以達(dá)到13.826mg/g。為確認(rèn)是否為雙苯吡酮，對(duì)提取物進(jìn)行理化鑒別。

5 花錨雙苯吡酮的定性鑒別

按照優(yōu)化提取工藝得到的花錨總雙苯吡酮通過(guò)如下幾種鑒別實(shí)驗(yàn)進(jìn)行定性研究：①濃氨水反應(yīng)：取該樣品溶液點(diǎn)滴在濾紙上，將濾紙?jiān)诎彼戏秸粞?.5min，立即置于紫外光下觀察，呈明顯的黃褐色熒光斑點(diǎn)；②AlCl3反應(yīng)：取樣品溶液點(diǎn)滴在濾紙上，滴加1% AlCl3乙醇溶液，風(fēng)干后在可見(jiàn)光下觀察，呈灰黃色，在紫外光下呈黃色熒光斑點(diǎn)；③乙酸鎂反應(yīng)：取樣品溶液點(diǎn)滴在濾紙上，滴加1%乙酸鎂甲醇溶液，風(fēng)干后在紫外光下觀察，呈黃色斑點(diǎn)；④鹽酸-鎂粉反應(yīng)：取乙醇提取液1mL于試管中加鎂粉，再加入濃鹽酸數(shù)滴(1次性加入)，在泡沫處呈橙黃色。

6 討論

從方法學(xué)考察結(jié)果看，在實(shí)驗(yàn)條件下蘆丁具有良好的線性關(guān)系，精密度、準(zhǔn)確度和穩(wěn)定性均較高，可作為蒙藥花錨總雙苯吡酮含量測(cè)定的依據(jù)?；ㄥ^總雙苯吡酮提取的最佳工藝為：乙醇溶劑濃度為90%，提取時(shí)間為8h，料液比1∶40，提取量可以達(dá)到13.826mg/g。通過(guò)理化鑒別實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證，優(yōu)化工藝條件下得到的花錨提取物主要為雙苯吡酮。

[1] 內(nèi)蒙古衛(wèi)生廳.內(nèi)蒙古蒙藥材標(biāo)準(zhǔn)[S].赤峰:內(nèi)蒙古科學(xué)技術(shù)出版社,1987:418.

[2] 占布拉·道爾吉.蒙醫(yī)正典[M].呼和浩特:內(nèi)蒙古人民出版社,2006:227.

[3] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·蒙藥分冊(cè)[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,1998:45.

[4] 內(nèi)蒙古自治區(qū)革命委員會(huì)衛(wèi)生局.內(nèi)蒙古中草藥[M].呼和浩特:內(nèi)蒙古人民出版社,1972:104.

[5] 中華本草編委會(huì).中華本草·蒙藥卷[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,2004:157.

[6] 譚沛,劉永隆.植物口山酮貳類(lèi)化合物[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā),1995,7(1):45-54.

[7] 馬昌.山酮在植物中的分布及其藥理作用[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(31):15244-15245.

(責(zé)任編輯：余 婷)

Study on the Extraction Technology of Total Xanthones fromHaleniaCorniculata

Taibadalahu, Nala, Laxinamujila, Bagenna

(Inner Mongolia University For The Nationalities, Tongliao 028000,China)

Objective:To optimize the extraction process of total xanthones fromHaleniacorniculata. Methods:The single factor test was used to study the main factors affecting the extraction of total xanthones from Halenia corniculata,then With the amount of total xanthones as index,the optimum extraction process of total flavonoids from Halenia corniculata was optimized by orthogonal test.Results:The optimum process of total xanthones from Halenia corniculata was ethanol concentration 90%,the ratio of solid to liquid was 1∶40,extraction time 8 h.extraction rate can reach 13.826mg/g. Conclusion:The optimum process is simple,the extraction rate and content is higher,it can provide some reference for the industrialproduction of Halenia xanthone.

Haleniacorniculata;Xanthones;Extraction Process

2015-04-23

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81360673)；內(nèi)蒙古民族大學(xué)校級(jí)研究生資助項(xiàng)目(NMDSS1432)

邰巴達(dá)拉胡(1988-)，男，蒙古族，內(nèi)蒙古民族大學(xué)碩士研究生，研究方向?yàn)槊伤幣c方劑學(xué)。

巴根那(1960-)，男，博士，內(nèi)蒙古民族大學(xué)教授、博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)槊伤幣c方劑學(xué)。

R284

A

1673-2197(2015)19-0016-03

10.11954/ytctyy.201519008