仇 雪

(江蘇省中醫(yī)院， 江蘇 南京 210029)

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陳皮中陳皮素和橙皮苷含量測定

仇 雪

(江蘇省中醫(yī)院， 江蘇 南京 210029)

目的：測定陳皮中陳皮素和橙皮苷的含量，為陳皮的有效利用提供科學(xué)依據(jù)。方法：用70%的乙醇回流提取，采用HPLC法測定陳皮素和橙皮苷的含量。橙皮苷采用甲醇-醋酸-水(35∶5∶60)流動相,檢測波長為284nm，柱溫為30℃，流速為0.8mL/min；陳皮素采用0.05%磷酸-乙腈(45∶55)為流動相，檢測波長為335，柱溫為35℃，流速為0.8mL/min。結(jié)果：橙皮苷線性方程為：Y1=2.95×106X1+3.46×104(r=0.999 9)，線性范圍為0.74～7.4μg/mL；陳皮素線性方程為:Y2=5.68×106X2-1.16×105(r=0.999)，線性范圍為：0.174～1.740μg/mL。測得的陳皮中橙皮苷、陳皮素含量分別為3.619g/100g藥材、0.331g/100g藥材。結(jié)論：此方法簡便、快速、準(zhǔn)確可靠，可作為陳皮藥材的質(zhì)量控制方法。

陳皮；陳皮素；橙皮苷；含量測定

陳皮為蕓香科植物橘CitrireticulataBlanco及其栽培變種的干燥成熟果皮[1]，有陳皮和廣陳皮之分。陳皮性溫，味苦、辛，具有理氣健脾之功效，臨床藥理作用廣泛，可用于治療胸脘脹滿、食少吐瀉、咳嗽痰多等。陳皮中含多種化學(xué)成分，如黃酮類、生物堿類、揮發(fā)油類，陳皮素和橙皮苷屬于黃酮類成分。據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)[2]報(bào)道，黃酮類化合物具有抗氧化、抗自由基、抗腫瘤、抗菌等藥理活性。本文旨在測定陳皮中陳皮素和橙皮苷的含量，為陳皮的有效利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

日本島津高效液相色譜儀：包括LC-20AT高壓輸液泵、SPD-20A紫外檢測器、N2010色譜工作站；CP225D十萬分之一電子天平(德國賽多利斯)；W201B型恒溫水浴鍋(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)；色譜柱為菲羅門(Phenomenex)C18柱(4.6mm×250mm，5μm)。

1.2 試藥

標(biāo)準(zhǔn)品：橙皮苷和陳皮素購自中國食品藥品檢定研究院，純度在98%以上,批號分別為JKB032c1、JKB395a1。乙腈為色譜純，水為重蒸水，其他試劑皆為分析純。陳皮藥材購自亳州藥材市場，經(jīng)專家鑒定為蕓香科植物橘CitrireticulataBlanco及其栽培變種的干燥成熟果皮。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

日本島津HPLC,包括LC-20AT高壓輸液泵、SPD-20A紫外檢測器、N2010色譜工作站，色譜柱為菲羅門(Phenomenex)C18柱(4.6mm×250mm，5μm)。橙皮苷檢測流動相為甲醇-醋酸-水(35∶5∶60),檢測波長為284nm，柱溫為30℃，流速為0.8mL/min；陳皮素檢測流動相為0.05%磷酸-乙腈(45∶55),檢測波長為335nm，柱溫為35℃，流速為0.8mL/min。

2.2 對照品溶液制備

分別精密稱取橙皮苷和陳皮素對照品9.25、2.21mg,置于25mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得370μg/mL、88.4μg/mL的對照品溶液,備用。

2.3 供試品溶液制備

取樣品研磨成粉，過3號篩，精密稱取0.4g陳皮粉于具錐形瓶中，用70%乙醇[3]回流提取，料液比設(shè)置為1∶19，提取溫度設(shè)置為77℃，提取時間為1.5h，冷卻至室溫后再次精密稱重，用70%乙醇補(bǔ)足減少的重量，搖勻，濾過，轉(zhuǎn)移至容量瓶中，在30℃恒溫水浴鍋中揮干乙醇溶劑后用甲醇定容至刻度，0.45μm濾頭過濾至EP管中備用。

2.4 波長確定

分別精密吸取橙皮苷和陳皮素對照品儲備液5μL注入液相儀，在200～800nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，發(fā)現(xiàn)橙皮苷的最大吸收波長為284nm，陳皮素的最大吸收波長為335nm，且與查閱的有關(guān)文獻(xiàn)相一致[4]，因此選擇284nm、335nm分別作為橙皮苷、陳皮素的檢測波長。

2.5 線性關(guān)系考察

用移液槍精密吸取各自儲備液2、5、8、10、15、20μL于1mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度。按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，記錄峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，得到橙皮苷和陳皮素的線性方程。橙皮苷線性方程為：Y1=2.95×106X1+3.46×104(r=0.999 9)，線性范圍為0.74～7.4μg/mL；陳皮素線性方程為:Y2=5.68×106X2-1.16×105(r=0.999)，線性范圍為：0.174～1.740μg/mL。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn)

分別精密量取對照品溶液20μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，在色譜條件下測量峰面積，結(jié)果橙皮苷的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.59%，陳皮素的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為2.10%，符合精密度要求，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

分別取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12h進(jìn)樣20μL，在色譜條件下測量峰面積，經(jīng)計(jì)算橙皮苷的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.73%，陳皮素的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.16%，表明溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

分別取同一批次樣品5份，按照樣品制備方法制備，在色譜條件下各進(jìn)樣20μL，測量峰面積，經(jīng)計(jì)算橙皮苷的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.76%，陳皮素的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.84%，表示該方法重復(fù)性良好。

2.9 回收率實(shí)驗(yàn)

分別取供試液樣品5份每份1mL于3mL容量瓶中，分別加入橙皮苷、陳皮素對照品0.8、1、1.2mL，混合均勻后甲醇定容至刻度，按色譜條件下進(jìn)樣20μL，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果橙皮苷的RSD為2.02%，橙皮素的RSD為2.12%。

3 含量測定

按“2.3”項(xiàng)方法分別制得3批供試樣品，按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣 20μL，計(jì)算含量。結(jié)果見表1。

表1 陳皮中橙皮苷和陳皮素含量測定結(jié)果 (g/100g藥材)

橙皮苷、陳皮素的含量經(jīng)三次測定取平均值分別為3.619g/100g藥材、0.331g/100g藥材。

4 討論

陳皮中所含的有效成分頗多，但橙皮苷為其主要成分，在某種程度上能夠反映陳皮藥材質(zhì)量的好壞[5]。在溶劑提取方面，本實(shí)驗(yàn)組做了預(yù)實(shí)驗(yàn)，采取了甲醇、70%乙醇、水為溶劑進(jìn)行探索，結(jié)果70%乙醇提取方法的提取率較好，故采用70%乙醇作為提取溶劑。本文采用的是單泵，未能進(jìn)行梯度洗脫，若實(shí)驗(yàn)室條件適合，可選用雙泵液相進(jìn)行梯度洗脫，能同時測定橙皮苷和陳皮素兩種成分的含量，做到更簡便、快速、經(jīng)濟(jì)、省時。

[1] 鄧鋒,梁蔚陽.陳皮質(zhì)量研究進(jìn)展[J].今日藥學(xué),2012,22(10):638-640.

[2] 韋正,楊麗,李晏,等.Box-Behnken效應(yīng)面法優(yōu)化陳皮中橙皮苷及川陳皮素提取工藝[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2013,19(10):17-20.

[3] 蔡慶順,鐘小群,余華.陳皮不同提取工藝橙皮苷提取率分析[J].中成藥,2010,32(6)1067-1070.

[4] 羅文華,李文貴,陳樺.HPLC法測定不同產(chǎn)地陳皮中橙皮苷的含量[J].現(xiàn)代測量與實(shí)驗(yàn)室管理，2009,17(5):8-9.

[5] 袁金斌,魏玲,張敏,等.高效液相色譜法測定枳殼中柚皮苷、新橙皮苷、川陳皮素和紅橘素的含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2010,30(6):515-517.

(責(zé)任編輯：魏 曉)

2014-12-04

仇雪(1987-)，女，江蘇省中醫(yī)院中藥師，研究方向?yàn)獒t(yī)院藥學(xué)。

R284.2

A

1673-2197(2015)07-0019-02

10.11954/ytctyy.201507010