劉維超 ,李兆福，萬春平，狄朋桃 ，吳晶金 ，彭江云，李自安

(1.云南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院,云南 昆明 650021； 2.成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院,云南 昆明650032)

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痛風(fēng)氣霧劑皮膚用藥毒性實驗研究

劉維超1,李兆福1，萬春平1，狄朋桃1，吳晶金1，彭江云1，李自安2*

(1.云南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院,云南 昆明 650021； 2.成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院,云南 昆明650032)

目的：通過對痛風(fēng)氣霧劑的皮膚用藥毒性實驗，探討該藥治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的皮膚用藥安全性，為下一步開展臨床前研究，開發(fā)安全有效、簡便易行的痛風(fēng)外用制劑提供理論依據(jù)。方法：觀察痛風(fēng)氣霧劑皮膚用藥毒性試驗，實驗采用健康日本大耳白家兔各24只進(jìn)行皮膚用藥急性毒性試驗及皮膚刺激性試驗,用30只健康豚鼠進(jìn)行皮膚過敏試驗(致敏接觸、激發(fā)接觸)。結(jié)果：痛風(fēng)氣霧劑高低兩個劑量組用于完整皮膚及破損皮膚家兔觀察7天，全部動物均健康存活，未見毒性反應(yīng)；痛風(fēng)氣霧劑連續(xù)7天給予家兔完整皮膚和破損皮膚區(qū)，皮膚刺激反應(yīng)平均分為0，無刺激性；用于豚鼠皮膚未見過敏反應(yīng)，致敏發(fā)生率為0，全部動物健康存活。結(jié)論：痛風(fēng)氣霧劑無明顯毒副作用，是一種安全有效、方便易行的治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的外用藥物，具有臨床實用價值，值得進(jìn)一步開發(fā)和推廣應(yīng)用。

痛風(fēng)氣霧劑；急性毒性試驗；皮膚刺激性；皮膚過敏性

痛風(fēng)氣霧劑處方源于云南兩代名中醫(yī)吳生元教授、彭江云教授長期治療痛風(fēng)的臨床經(jīng)驗，從痛風(fēng)外用洗劑、外用貼劑到氣霧劑，由云南省藥物研究所生產(chǎn)，主要用于治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎。為考察痛風(fēng)氣霧劑的外用安全性，根據(jù)《中藥新藥研究指南(藥學(xué)藥理學(xué)毒理學(xué))》(中華人民共和國衛(wèi)生部藥政管理局發(fā)布)的要求，進(jìn)行皮膚用藥急性毒性、皮膚刺激性和皮膚過敏試驗，為開發(fā)痛風(fēng)氣霧劑提供理論依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 實驗材料

1.1 實驗藥品

痛風(fēng)氣霧劑，由云南省藥物研究所提供，每毫升含生藥量為10g；賦形劑：65%乙醇；陽性致敏藥物：2，4-二硝基氯代苯，上海試劑一廠生產(chǎn)，批號：2002-03。

1.2 實驗動物

健康日本大耳白家兔48只，體重(2.18±0.17)kg，雌雄各半，購自成都達(dá)碩生物科技有限公司，合格證號：SCXK(川)2008-24；健康豚鼠30只，雌雄各半，體重(265.3±4.6)g，購自成都達(dá)碩生物科技有限公司，合格證號：滇實動證第2003044號。

2 實驗方法

2.1 皮膚用藥急性毒性試驗

將健康日本大耳白家兔24只按雌雄各半隨機(jī)分為六組，每組4只。六組分別為：對照組(完整皮膚)、對照組(破損皮膚)、低劑量組(完整皮膚)、低劑量組(破損皮膚)、高劑量組(完整皮膚)、高劑量組(破損皮膚)。各兔背部用理發(fā)剪去毛約50cm×30cm，破損皮膚用手術(shù)刀在脫毛消毒皮膚區(qū)作“井”字，以滲血為度，備皮后分籠飼養(yǎng)，觀察1天開始用藥。對照組外用蒸餾水，痛風(fēng)氣霧劑低劑量組1噴(即每亳升含生藥量10g)，高劑量組3噴，噴藥后自然吹干， 24h后蒸餾水洗去家兔背部受試藥物，于1、24、48、72h直至第7日，每日觀察各家兔皮膚毛發(fā)，眼和黏膜的變化，呼吸、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動、食量和糞便等情況。

2.2 皮膚刺激性試驗

將健康日本大耳白家兔24只，隨機(jī)分為六組，每組4只，雌雄各半。六組分別為：對照組(完整皮膚)、對照組(破損皮膚)、低劑量組(完整皮膚)、低劑量組(破損皮膚)、高劑量組(完整皮膚)、高劑量組(破損皮膚)。在家兔背部兩側(cè)對稱區(qū)域用理發(fā)剪去毛大小約50cm×30cm。破損皮膚組用手術(shù)刀在脫毛消毒皮膚區(qū)劃兩個等大的“井”字，以滲血為度。分籠飼養(yǎng)，觀察1天后開始用藥。對照組不用藥，其余每只家兔背部左側(cè)皮膚外噴痛風(fēng)氣霧劑(低劑量組為1噴；高劑量組為3噴)，背部右側(cè)區(qū)外搽65%酒精(賦形劑)，自然吹干。依照上述方法每天用藥1次，連續(xù)7天，之后停藥再觀察1周。每日觀察記錄家兔背部用藥部位是否有皮膚紅斑、水腫情況，是否有色素沉著、出血點以及皮膚變粗或變薄等情況。根據(jù)《中藥新藥研究指南(藥學(xué)藥理學(xué)毒理學(xué))》(中華人民共和國衛(wèi)生部藥政管理局)P210～P211 “Score criterion degree of cutancous stimulus response”“Evaluation criterion cutancous stimulus”進(jìn)行評分統(tǒng)計。

表1 皮膚刺激反應(yīng)程度評分標(biāo)準(zhǔn)

表2 皮膚刺激性評價標(biāo)準(zhǔn)

2.3 皮膚過敏試驗

將30只健康豚鼠隨機(jī)分為三組，雌雄各半，三組分別為：痛風(fēng)氣霧劑組、蒸餾水組、陽性對照組。將豚鼠背部左側(cè)區(qū)域去毛，面積約9cm2，分籠飼養(yǎng)，觀察1天后開始用藥。

2.3.1 致敏接觸 氣霧劑組外噴藥物1噴(每毫升含生藥10g)，蒸餾水組外搽蒸餾水0.2mL/只，陽性對照組外搽1% 2，4-二硝基氯代苯0.2mL/只。自然吹干，6h后用溫水洗去背部藥物。用同樣方法在第7天及第14天給藥1次，觀察豚鼠左側(cè)脫毛區(qū)是否有水腫、紅斑情況，并做記錄。

2.3.2 激發(fā)接觸 致敏接觸試驗后第14天，在同一批豚鼠背部右側(cè)進(jìn)行脫毛，面積約9cm2，之后用同樣的方法再給藥1次，6h后用溫水洗去背部藥物。觀察當(dāng)時、24h、48h、72h皮膚是否出現(xiàn)紅斑、水腫，以及有無全身過敏情況。根據(jù)《中藥新藥研究指南(藥學(xué)藥理學(xué)毒理學(xué))》(中華人民共和國衛(wèi)生部藥政管理局)P212表3、表4“皮膚過敏反應(yīng)程度的評分標(biāo)準(zhǔn)”和“皮膚致敏性評價標(biāo)準(zhǔn)”進(jìn)行評價分析。

表3 皮膚過敏反應(yīng)程度評分標(biāo)準(zhǔn)

表4 皮膚致敏性評價標(biāo)準(zhǔn)

3 實驗結(jié)果

3.1 皮膚用藥急性毒性試驗

試驗結(jié)果表明，痛風(fēng)氣霧劑高劑量組(完整皮膚)、高劑量組(破損皮膚)、低劑量組(完整皮膚)、低劑量組(破損皮膚)，用藥后1周，家兔的飲食、行為活動、眼和黏膜、膚色、皮毛、體重、呼吸及精神狀態(tài)、糞便及分泌物均正常，所有家兔健康存活，未發(fā)生任何毒性反應(yīng)。破損皮膚1周均已脫痂痊愈。詳見表5。

3.2 皮膚刺激性試驗

試驗結(jié)果表明，痛風(fēng)氣霧劑低劑量組、高劑量組和對照組的完整皮膚和破損皮膚區(qū)，14天內(nèi)均未出現(xiàn)明顯的紅斑和水腫、色素沉著、出血點或皮膚粗糙、變薄等情況，刺激反應(yīng)平均分值均為零，說明痛風(fēng)氣霧劑對家兔的皮膚無刺激性。詳見表6。

表5 痛風(fēng)氣霧劑對家兔皮膚的急性毒性試驗結(jié)果

表6 痛風(fēng)氣霧劑對家兔皮膚刺激性試驗結(jié)果

3.3 皮膚過敏試驗

試驗結(jié)果表明，痛風(fēng)氣霧劑組及蒸餾水組，外用于豚鼠皮膚，均未見局部和全身過敏反應(yīng)。詳見表7、表8。

4 討論

痛風(fēng)患病率逐漸升高，無論中醫(yī)西醫(yī)都在尋找一種安全、有效、毒副作用小的藥物及治療方法。痛風(fēng)氣霧劑的前身痛風(fēng)清洗劑、痛風(fēng)貼在臨床應(yīng)用多年，療效頗佳，為方便患者攜帶、使用，保證藥物療效，本課題組改劑型為氣霧劑。將藥液以霧狀形式噴射出來，直達(dá)病灶或局部吸收而發(fā)揮療效。其優(yōu)點[1]：①使用方便，起效迅速；②能保持藥物清潔和無菌，并能提高藥物穩(wěn)定性；③可減少局部涂藥的刺激和感染；④給藥劑量小，副作用少。通過查閱文獻(xiàn)資料，臨床上常用的氣霧劑主要是吸入氣霧劑，如治療心絞痛的寬胸氣霧劑，治療慢支炎、哮喘的艾葉油氣霧劑等[2]，但專治痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的氣霧劑尚未見報道，因此該藥的研究將填補(bǔ)痛風(fēng)外治氣霧劑的空缺。

表7 痛風(fēng)氣霧劑對豚鼠皮膚的致敏接觸實驗結(jié)果

表8 痛風(fēng)氣霧劑對豚鼠皮膚的激發(fā)接觸實驗結(jié)果

注：平均分值=(紅斑形成總分+水腫形成總分)/合計動物數(shù)

通過痛風(fēng)氣霧劑對家兔皮膚用藥急性毒性試驗，皮膚刺激性試驗及豚鼠皮膚過敏試驗(致敏接觸及激發(fā)接觸)，結(jié)果顯示，痛風(fēng)氣霧劑用于家兔皮膚無刺激性，未見毒性反應(yīng)；用于豚鼠皮膚未見過敏反應(yīng)，因此痛風(fēng)氣霧劑是一種安全的皮膚外用藥。

[1] 吳震西,吳自強(qiáng).中醫(yī)內(nèi)病外治[M].第1版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2007:30.

[2] 丁立,洪醒華.中藥氣霧劑產(chǎn)品的現(xiàn)狀與前景[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2007,27(10):957-958.

(責(zé)任編輯：宋勇剛)

2014-11-13

云南省衛(wèi)生科技內(nèi)設(shè)研究機(jī)構(gòu)項目(2011WS0026)；云南省中醫(yī)醫(yī)院院級科研項目(2011yj014)

劉維超(1980-)，女，云南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院主治醫(yī)師,研究方向為中西醫(yī)結(jié)合診治風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病。

李自安(1973-)，男， 成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院實驗師，研究方向為動物醫(yī)學(xué)實驗。

R285.5

A

1673-2197(2015)07-0008-03

10.11954/ytctyy.201507004