賴岳曉，劉佩沂，田素英 ，陳文秀

(1.中山市黃圃人民醫(yī)院，廣東 中山 528429；2.廣東藥學(xué)院，廣東 廣州 510006；3.中山巿寶元制鞋廠職工醫(yī)院，廣東 中山 528463)

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腸腹寧顆粒止瀉作用及其有效成分研究

賴岳曉1，劉佩沂1，田素英2*，陳文秀3

(1.中山市黃圃人民醫(yī)院，廣東 中山 528429；2.廣東藥學(xué)院，廣東 廣州 510006；3.中山巿寶元制鞋廠職工醫(yī)院，廣東 中山 528463)

目的：研究腸腹寧顆粒組成藥物白頭翁、木槿花及其醇、水提取物的止瀉作用，篩選其有效成分。方法：建立小鼠腹瀉模型，通過觀察小鼠小腸的推進(jìn)作用研究腸腹寧顆粒、白頭翁、木槿花及其提取物的止瀉作用，篩選有效成分。結(jié)果：腸腹寧顆粒(中、高劑量)、白頭翁、木槿花及其提取物均可明顯抑制番瀉葉引起的小鼠腹瀉，且高劑量腸腹寧顆粒的止瀉效果優(yōu)于中劑量，醇提取物的止瀉效果優(yōu)于水提取物，腸腹寧顆粒的止瀉效果優(yōu)于白頭翁、木槿花；腸腹寧顆粒、白頭翁、木槿花及其提取物均可明顯降低小腸推進(jìn)率，且醇提取物抑制作用最強(qiáng)，腸腹寧顆粒的腸推進(jìn)抑制作用優(yōu)于白頭翁、木槿花。結(jié)論：腸腹寧顆粒具有較好的止瀉作用，且止瀉效果與劑量呈正相關(guān)，白頭翁與木槿花配伍止瀉效果優(yōu)于單味藥，且醇提取物止瀉效果優(yōu)于水提物。

腸腹寧顆粒；醇提取物；止瀉作用；有效成分

腸腹寧顆粒是由中山市黃圃人民醫(yī)院根據(jù)名老中醫(yī)的經(jīng)驗(yàn)方和臨床醫(yī)療需求自擬的醫(yī)院制劑，主要由白頭翁和木槿花等組成，臨床上用于急慢性腸炎的治療，尤其對慢性結(jié)腸炎有獨(dú)特療效[1]，但其有效成分尚不明確。方中主藥白頭翁可清熱解毒、涼血止痢，木槿花可涼血活血、清熱除煩，用于腸風(fēng)下血、赤白下痢等癥的治療[2]。為此，本研究對腸腹寧顆粒、白頭翁、木槿花及其不同溶劑提取物的止瀉作用進(jìn)行研究，分析其有效成分，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與試劑

1.1 藥品與試劑

白頭翁(玉林市華濟(jì)中藥飲片有限公司，批號：14020118)，木槿花(康圣醫(yī)藥有限公司，批號：20140321)，番瀉葉(廣西玉林市西草堂中藥飲片有限公司，批號：20140201)，以上藥材均經(jīng)田素英副教授鑒定符合《中國藥典2010版(一部)》規(guī)定。腸腹寧顆粒(中山黃圃人民醫(yī)院，批號：20140319)，甲硫酸新斯的明(四川精尖動物藥業(yè)有限公司，批號：20141028)，硫酸阿托品(天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司，批號：1403135)，鹽酸小檗堿(東北制藥集團(tuán)沈陽第一制藥有限公司，批號：140329)，95%乙醇(AR級，天津市富宇精細(xì)化工有限公司，批號：130110)。

醇提物[3-4]：稱取白頭翁-木槿花(1∶1)粉末45g，置于1 000mL錐形瓶眾，加8倍量70%乙醇，在40℃ 40kHz下超聲40min，濾液回收至無醇味，加蒸餾水定容至100mL，搖勻，得生藥濃度為0.45g·mL-1的醇提液。

水提物：稱取白頭翁-木槿花(1∶1)粉末45g，加8倍蒸餾水，浸泡20min，煎煮40min，濾液加熱濃縮至干，加蒸餾水定容至100mL，搖勻，得生藥濃度為0.45g·mL-1的水提液。

白頭翁和木槿花提取液的制備方法同水提物制備方法，生藥濃度均為0.34g·mL-1。

1.2 動物與分組

昆明(KM)種小鼠，SPF級，由廣東藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，許可證號：SCXK(粵) 2008-0002，體重18～22g，飼養(yǎng)環(huán)境溫度為20～25℃，濕度為50%～70%。

將小鼠分為以下幾組，具體用藥方法為：水提物組(水提組，9.00g·kg-1)、醇提物組(醇提組，9.00g·kg-1)、腸腹寧顆粒高劑量組(高劑量，13.50g·kg-1)、腸腹寧顆粒中劑量組(中劑量，6.75g·kg-1)、腸腹寧顆粒低劑量組(低劑量，3.38g·kg-1)、白頭翁組(6.80g·kg-1)、木槿花組(6.80g·kg-1)、鹽酸小檗堿組(陽性組，0.15g·kg-1)、止瀉模型組(番瀉葉，6.00g·kg-1)、硫酸阿托品組(陽性組，0.01g·kg-1)、腸功能模型組(甲硫酸新斯的明，0.15mg·kg-1)，空白組(等體積生理鹽水)。

2 方法

2.1 止瀉實(shí)驗(yàn)

取小鼠100只，體重18～22g，雌雄各半，隨機(jī)分為10組(水提組、醇提組、高劑量、中劑量、低劑量、白頭翁組、木槿花組、陽性組、空白組、模型組)，灌胃給予相應(yīng)藥物，1次/天，連續(xù)給藥7 天，空白組和模型組小鼠予以等量生理鹽水。末次給藥前18h禁食不禁水，末次給藥1h后，除空白組外，其他各組小鼠灌胃番瀉葉水煎液，然后每籠放置1只小鼠，籠下鋪中速濾紙進(jìn)行濕糞計(jì)數(shù)(濕糞：顆粒濕潤完整、成型、水樣)，造模30min后，開始計(jì)時(shí)，每隔1h換1次濾紙，連續(xù)記錄4h[5]。觀察小鼠總便數(shù)、稀便數(shù)和稀便級，計(jì)算腹瀉指數(shù)[6]。稀便級確定方法：糞便污跡直徑<1cm為1；1～1.9cm為2；2～3cm為3；>3cm為4。腹瀉指數(shù)為稀便率(每只動物所排稀便數(shù)/總便數(shù))與稀便級的乘積，即腹瀉指數(shù)=稀便率×平均直徑。

2.2 對小鼠腸功能的影響[7]

2.2.1 對小鼠小腸推進(jìn)作用的影響 取小鼠90只，體重18～22g，雌雄各半，隨機(jī)分為9組(水提組、醇提組、高劑量、中劑量、低劑量、白頭翁組、木槿花組、陽性組、空白組)。灌胃給藥，1次/天，連續(xù)給藥7天，空白組、模型組小鼠予以等量生理鹽水，末次給藥前20h禁食不禁水，末次給藥30min后，灌胃10%炭末懸浮液，0.4mL/只，30min后處死小鼠，打開腹腔，分離腸系膜，剪取自幽門至回盲部的小腸，測量小腸長度、推進(jìn)距離(幽門到炭末推進(jìn)前沿距離)。炭末推進(jìn)率=(炭末推進(jìn)距離∕小腸長度)×100%。

2.2.2 對甲硫酸新斯的明致小鼠小腸功能亢進(jìn)的影響 取小鼠100只，體重18～22g，雌雄各半，隨機(jī)分為10組(水提組、醇提組、高劑量、中劑量、低劑量、白頭翁組、木槿花組、陽性組、空白組、模型組)，灌胃給藥，1次/天，連續(xù)給藥7天?？瞻捉M、模型組小鼠予以等量生理鹽水，末次給藥前20h禁食不禁水，末次給藥30min后，除空白組外，其余各組小鼠皮下注射甲硫酸新斯的明0.15mg·kg-1，20min后，按“2.2.1”項(xiàng)下方法測量計(jì)算炭末推進(jìn)率。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 止瀉實(shí)驗(yàn)

與模型組相比，各給藥組小鼠腹瀉指數(shù)均明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；陽性組、醇提物組小鼠止瀉作用最強(qiáng)，但二者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；水提物組與腸腹寧顆粒中劑量組止瀉作用相當(dāng)，木槿花組第1小時(shí)止瀉作用不明顯;給藥2h后，木槿花、白頭翁組的止瀉作用與腸腹寧顆粒低劑量組相當(dāng)。結(jié)果見表1。

表1 腸腹寧顆粒、不同提取物及方中各藥對小鼠腹瀉的影響 ±s)

注：與模型組比較，*P<0.05，▼P<0.01；與醇提組比較，#P<0.05；與高劑量組比較，★P<0.05；與中劑量組比較，●P<0.05。

3.2 對小鼠小腸功能的作用

3.2.1 對正常小鼠小腸功能的作用 在小腸功能正常的情況下，水提組、醇提組、高劑量、中劑量、白頭翁組、陽性組小鼠的小腸推進(jìn)率與空白組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中醇提組、高劑量組小鼠小腸推進(jìn)率與空白組比較差異極顯著(P<0.01)；木槿花組小鼠腸推進(jìn)率與腸腹寧低劑量組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；醇提組小鼠腸推進(jìn)率與高劑量組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；腸腹寧高劑量組小鼠腸推進(jìn)率與中劑量組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；腸腹寧高劑量、中劑量組小鼠腸推進(jìn)率與白頭翁組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見表2。

表2 腸腹寧顆粒、不同提取物及方中各藥對

注：與模型組比較，*P<0.05，▼P<0.01；與醇提組比較，#P<0.05；與高劑量組比較，★P<0.05；與中劑量組比較，●P<0.05。

3.2.2 對甲硫酸新斯的明致小鼠小腸功能亢進(jìn)的影響 水提組、醇提組、高劑量、中劑量、陽性組藥物對新斯的明導(dǎo)致的小鼠小腸亢進(jìn)均有拮抗作用，但醇提組、腸腹寧高劑量組拮抗作用比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，且二者作用均強(qiáng)于白頭翁組、木槿花組、中劑量組、低劑量組。醇提組小鼠小腸拮抗作用與水提組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但白頭翁組、木槿花組、低劑量組小鼠小腸拮抗作用比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；腸腹寧高劑量組小鼠小腸拮抗作用與中劑量組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見表3。

表3 腸腹寧顆粒、不同提取物及方中各藥對新斯

注：與模型組比較，*P<0.05，▼P<0.01；與醇提組比較，#P<0.05；與高劑量組比較，★P<0.05；與中劑量組比較，●P<0.05。

4 討論

腹瀉是急慢性腸炎、過敏性腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎的主要癥狀，可由多種原因引起。當(dāng)胃腸腔內(nèi)水分、電解質(zhì)與腸上皮接觸時(shí)間縮短時(shí)，可導(dǎo)致水分吸收減少，形成胃腸運(yùn)動功能異常性腹瀉。中醫(yī)認(rèn)為濕盛是導(dǎo)致腹瀉的重要因素之一。我院自創(chuàng)的中成藥腸腹寧顆粒中白頭翁具有清熱解毒、涼血止痢的功效[2]，主治濕熱痢疾等癥；木槿花具有清熱涼血、解毒消腫的功效，主治痢疾、腹瀉等癥[3]，該藥針對腹瀉病機(jī)，療效顯著。

本研究結(jié)果表明，醇提液的止瀉效果優(yōu)于水提液，可能是由于70%乙醇更有利于生物堿和苷類的溶出[9-10]，而水提液中則含有較多的糖類成分。高劑量腸腹寧的止瀉效果弱于醇提液，主要是由于腸腹寧顆粒是由水提物制備而成。

本研究結(jié)果表明，腸腹寧顆粒(中、高劑量)、白頭翁、木槿花及其提取物均可明顯抑制番瀉葉引起的小鼠腹瀉，且高劑量腸腹寧顆粒止瀉效果優(yōu)于中劑量，醇提取物止瀉效果優(yōu)于水提取物，腸腹寧顆粒止瀉效果優(yōu)于白頭翁、木槿花；腸腹寧顆粒、白頭翁、木槿花及其提取物均可明顯降低小腸推進(jìn)率，且醇提取物抑制作用最強(qiáng)，腸腹寧顆粒的腸推進(jìn)抑制作用優(yōu)于白頭翁、木槿花。水提組、醇提組、高劑量、中劑量、陽性組藥物對新斯的明導(dǎo)致的小鼠小腸亢進(jìn)均有拮抗作用。腸腹寧顆粒具有較好的止瀉作用，且止瀉效果與劑量呈正相關(guān)，白頭翁與木槿花配伍止瀉效果優(yōu)于單味藥，且醇提取物止瀉效果優(yōu)于水提物。

綜上所述，腸腹寧顆粒是治療急慢性結(jié)腸炎的有效藥物，其含有的白頭翁和木槿花均具有較好的止瀉作用，但其分子作用機(jī)制仍需進(jìn)一步深入研究。

[1] 劉佩沂,賴岳曉,田素英.腸腹寧顆粒及其主要成分總皂苷體外抗菌實(shí)驗(yàn)研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2011,7(4):13-14.

[2] 賴岳曉,劉佩沂,田素英,等.木槿花研究概況及存在問題[J].海峽藥學(xué),2010,22(1):78-80.

[3] 劉佩沂,賴岳曉,田素英.腸腹寧顆粒中總黃酮的最佳提取工藝[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2011,17(11):39-40.

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[5] 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2000:332.

[6] 曹玲芝,馬利芹,王麗葉,等.建立動物腹瀉模型的研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2008,36(26):11383-11385.

[7] 茹麗,郭起岳,許常輝.保濟(jì)丸粉對小鼠腹瀉及腸運(yùn)動的影響[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2012,18(4):235-237.

[8] 賴岳曉,劉佩沂,王嵩,等.腸腹寧顆粒及其主要成分總皂苷鎮(zhèn)痛與止瀉作用研究[J].中國中醫(yī)藥咨訊,2011(10):52-53.

[9] 丁秀娟.中藥白頭翁化學(xué)成分研究[D].蘇州:蘇州大學(xué),2010.

[10] 莫少紅.白頭翁的化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].中藥材,2001,24(5):385-387.

(責(zé)任編輯：尹晨茹)

Study on the Anti-Diarrhea of Changfuning Granules and Effective Part

Lai Yuexiao1,Liu Peiyi1,Tian Suying2*,Chen Wenxiu3

(1.Guangdong Zhongshan Huangpu People’s Hospital，Zhongshan，Guangdong 528429,China;2.Dept. of Pharmacy,Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou，Guangdong 510006,China;3.Workers' Hospital of Baoyuan Shoe Factory of Zhongshan,Zhongshan 528463,China)

Objective:Objective:Study the Anti-Diarrhea effects of Changfuning Granules(CFNG),and it,s Radix Pulsatillae(RP),Flos Hibiscus(FH),the different extracts(water,alcohol),Screening effective parts.Methods:Diarrhea in mice model was established，observed the small intestine propulsion,so study the Anti-Diarrhea effects about CFNG,RP,FH and the extracts.Results:CFNG(middle and high doses),RP,FH and the extracts inhibited significantly the mice diarrhea caused by senna leaf，the high dose is better than the mi-ddle dose，the alcohol extract is better than the water extract，CFNG is better than RP and FH.CFNG,RP,FH and the extracts lo-wer significantly rate of small intestine propulsion，the alcohol extract is best,CFNG is better than RP and FH.Conclusion:CFNG has good anti-diarrhea effect，the effect is proportional to the dosage，the effect of the compatibility is better than that of sing-le medicine，the alcohol extract is best.

Changfuning Granules;Extract;Anti-diarrhea;Effective Component

2015-02-02

廣東省中山市科技局科研項(xiàng)目( 20122A162)

賴岳曉(1976-)，男，廣東省中山市黃圃人民醫(yī)院副主任中藥師，研究方向?yàn)獒t(yī)院藥劑學(xué)。

田素英(1968-)，女，廣東藥學(xué)院副教授，研究方向?yàn)橹兴庨_發(fā)應(yīng)用。E-mail:zsxqtsy@126.com

R285

A

1673-2197(2015)06-0009-03

10.11954/ytctyy.201506004