薛 靜，黃 剛，吳再猛，劉仕靜，蒲 兵，程吉祥

(貴州遠(yuǎn)程制藥有限責(zé)任公司，貴州 貴陽(yáng) 550018)

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雙冬膠囊鑒別方法研究

薛 靜，黃 剛*，吳再猛，劉仕靜，蒲 兵，程吉祥

(貴州遠(yuǎn)程制藥有限責(zé)任公司，貴州 貴陽(yáng) 550018)

目的：建立雙冬膠囊鑒別方法。方法：采用薄層色譜法(TLC)對(duì)雙冬膠囊中梔子、黃芪、麥冬、苦木進(jìn)行定性鑒別。結(jié)果：TLC斑點(diǎn)清晰、分離度好、專屬性強(qiáng)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)論：所建立的方法可用于雙冬膠囊的質(zhì)量控制。

雙冬膠囊；薄層液相色譜法；梔子；黃芪；麥冬；苦木

雙冬膠囊是由貴州遠(yuǎn)程制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)的一種治療下尿路感染的硬膠囊劑。其具有清熱通淋、益氣養(yǎng)陰的功效，用于減輕或緩解急性輕中度單純性下尿路感染下焦?jié)駸峒鏆怅巸商撟C出現(xiàn)的尿頻、尿急、尿道灼熱刺痛、尿黃等癥狀。處方由梔子、黃芪、麥冬、苦木等六味藥材組成。參考相關(guān)文獻(xiàn)[1-5]，通過(guò)試驗(yàn)制定了處方中梔子、黃芪、麥冬、苦木四味藥材的定性檢測(cè)指標(biāo)，以控制本制劑的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

MettLer AE240 天平(梅特勒-托利多上海儀器有限公司)、ZWF三用紫外分析儀(上海興亞儀器有限公司)；超聲波清洗器(北京創(chuàng)新德超聲電子研究所)。

1.2 試藥

梔子苷對(duì)照品、梔子對(duì)照藥材、黃芪甲苷對(duì)照品、黃芪對(duì)照藥材、麥冬對(duì)照藥材、苦木對(duì)照藥材(中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，批號(hào)分別為110749-200714、120986-200806、110781-200613、120974-200609、121183-201003、121017-200403)；硅膠(G、GF254)薄層板(青島海洋化工有限公司)；雙冬膠囊(批號(hào)：20130301、20130302、20130303)由貴州遠(yuǎn)程制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)；本實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 梔子的TLC鑒別

取雙冬膠囊(20130301、20130302、20130303)內(nèi)容物各2g，分別加甲醇(濃度為50%)20mL，超聲40min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使其溶解，作為梔子TLC供試品溶液。另取梔子對(duì)照藥材1g，加甲醇(濃度為50%)10mL，同法制成梔子對(duì)照藥材溶液。再取梔子苷對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含4mg的對(duì)照品溶液。取不含梔子藥材的陰性樣品，同法制成不含梔子陰性對(duì)照溶液。按照TLC法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述六種溶液各2μL，分別點(diǎn)樣于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-乙腈-甲醇-濃氨試液(7∶3∶2∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。結(jié)果顯示，供試品色譜中，在與梔子對(duì)照藥材色譜和梔子苷對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；陰性對(duì)照無(wú)干擾。梔子的TLC見(jiàn)圖1。

1～3.供試品；4.梔子對(duì)照藥材；5.梔子苷對(duì)照品；6.陰性對(duì)照

圖1 梔子的TLC色譜

2.2 黃芪的TLC鑒別

取雙冬膠囊(20130301、20130302、20130303)內(nèi)容物各5g，分別加水30mL，超聲處理15min, 水溶液連同殘?jiān)黄鹨浦梅忠郝┒分?，加水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20mL，分取正丁醇液(水液備用)，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次20mL，分取正丁醇液(水洗液與上次水液合并，留作“2.3”麥冬的TLC鑒別用)，蒸干，殘?jiān)蛹状?5mL使溶解，濾過(guò)，將濾液加入中性氧化鋁柱(100～120目，10g，內(nèi)徑10～15mm)，用甲醇30mL洗脫，收集洗脫液，將收集的洗脫液濾過(guò)，濾液水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為黃芪TLC供試品溶液。另取黃芪對(duì)照藥材3g，加甲醇20mL，加熱回流1h，回流液濾過(guò)，將濾液加入中性氧化鋁柱(100～120目，5g，內(nèi)徑10～15mm)，用40%甲醇100mL洗脫，收集洗脫液，將收集的洗脫液于水浴上蒸干，殘?jiān)铀?0mL使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20mL，將2次提取的正丁醇液合并，再用正丁醇飽和的水洗滌合并正丁醇液2次，每次20mL，棄去水液，水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状?.5mL使溶解，作為黃芪對(duì)照藥材溶液。取缺黃芪藥材的陰性樣品，照上法制成缺黃芪陰性對(duì)照溶液。再取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述六種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，至顯色清晰，置日光下及紫外光燈(365nm)下檢視。結(jié)果顯示，供試品色譜中，在與黃芪對(duì)照藥材色譜和黃芪甲苷對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)；陰性對(duì)照無(wú)干擾。黃芪的TLC日光下檢視見(jiàn)圖2，紫外光燈(365nm)下檢視見(jiàn)圖3。

1～3.供試品；4.黃芪對(duì)照藥材；5.黃芪甲苷對(duì)照品；6.陰性對(duì)照溶液

圖2 黃芪的TLC色譜(日光下檢視)

1～3.供試品；4.黃芪對(duì)照藥材；5.黃芪甲苷對(duì)照品；6.陰性對(duì)照溶液

圖3 黃芪的TLC色譜(紫外光燈(365nm)下檢視)

2.3 麥冬的TLC鑒別

取“2.2”項(xiàng)下下正丁醇提取后的水液，濃縮至約20mL，加鹽酸1mL，加熱回流1h，放冷，用三氯甲烷振搖提取2次，每次20mL，分取三氯甲烷溶液，濃縮至約1mL，作為供試品溶液。另取麥冬對(duì)照藥材1g，加乙醇20mL，加熱回流1h，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL使溶解，移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次提取用水飽和的正丁醇20mL，棄去正丁醇液，水液加鹽酸1mL，照上法制成麥冬對(duì)照藥材溶液。再取缺麥冬藥材的陰性樣品，同法制成缺麥冬陰性對(duì)照溶液。按照TLC法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述五種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-丙酮(4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，至顯色清晰。結(jié)果顯示，供試品色譜中，在與麥冬對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)；陰性對(duì)照無(wú)干擾。麥冬的TLC見(jiàn)圖4。

1～3.供試品；4.麥冬對(duì)照藥材；5.陰性對(duì)照?qǐng)D4 麥冬的TLC色譜

2.4 苦木的TLC鑒別

取雙冬膠囊(20130301、20130302、20130303)內(nèi)容物各5g，研細(xì)，加甲醇30mL，浸漬過(guò)夜，濾過(guò)，濾液濃縮至約1mL，作為供試品溶液。另取苦木對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取缺苦木藥材的陰性樣品，同法制成陰性對(duì)照溶液。按照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述五種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(17∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。結(jié)果顯示：供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的熒光斑點(diǎn)；陰性對(duì)照無(wú)干擾?？嗄镜腡LC見(jiàn)圖5。

1～3.供試品；4.苦木對(duì)照藥材；5.陰性對(duì)照?qǐng)D5 苦木的TLC色譜

3 討論

雙冬膠囊為中藥六類新藥，處方由梔子、黃芪、麥冬、苦木等六味藥材組成。本實(shí)驗(yàn)采用薄層色譜法對(duì)處方中的梔子、黃芪、麥冬、苦木四味藥材分別進(jìn)行定性研究。實(shí)驗(yàn)中采用超聲處理及加熱回流兩種方法提取藥材中的有效成分，反復(fù)比較各種顯色方法，最后篩選出正文的方法。結(jié)果表明，該方法靈敏度高，專屬性強(qiáng)，斑點(diǎn)清晰，適用于雙冬膠囊中梔子、黃芪、麥冬、苦木四味藥材的薄層鑒別。

[1] 劉訓(xùn)紅.中藥材薄層色譜鑒別[M].天津：天津科學(xué)技術(shù)出版社，1990:150.

[2] 吳瑪琍.中藥飲片鑒別[M].天津：天津科學(xué)技術(shù)出版社，1992:136.

[3] 馬廣慈，唐任寰，鄭斯成,等. 藥物分析方法與應(yīng)用[M].北京：科學(xué)出版社，2000：547.

[4] 孫立華，吳愛(ài)英，張春輝.康媛顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2006,7(1)：66.

[5] 陳代賢，郭月秋等.中藥真?zhèn)钨|(zhì)量快速影像檢定(上冊(cè))[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2012：355.

(責(zé)任編輯：魏 曉)

2015-05-20

貴州省中藥現(xiàn)代化科技產(chǎn)業(yè)專項(xiàng)項(xiàng)目(黔科合成字[2013]5010號(hào))

薛靜(1985-)，女，貴州遠(yuǎn)程制藥有限責(zé)任公司工程師，研究方向?yàn)樗幤焚|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

黃剛(1965-)，男，貴州遠(yuǎn)程制藥有限責(zé)任公司總工程師，研究方向?yàn)樗幤飞a(chǎn)和技術(shù)管理。

R284

A

1673-2197(2015)17-0030-02

10.11954/ytctyy.201517015