周 劍，蘇德春，宋國權(quán)

(牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院 普外二科，黑龍江 牡丹江 157011)

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白術(shù)多糖對H22肝癌小鼠抗腫瘤作用實(shí)驗(yàn)研究

周 劍，蘇德春，宋國權(quán)

(牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院 普外二科，黑龍江 牡丹江 157011)

目的：探討白術(shù)多糖對H22肝癌小鼠相關(guān)因子的影響，分析其抗腫瘤機(jī)制。方法：觀察白術(shù)多糖不同給藥劑量對H22肝癌小鼠模型血清中VEGF、 IL-2含量和瘤組織中p21和Bcl-2表達(dá)變化的影響，并計算抑瘤率。結(jié)果：白術(shù)多糖對H22肝癌小鼠腫瘤抑制效果以中劑量為佳，可減少血清中VEGF含量，增加IL-2含量，同時下調(diào)Bcl-2基因表達(dá)，而上調(diào)p21基因表達(dá)。結(jié)論：白術(shù)多糖對H22肝癌小鼠的腫瘤有較明顯的抑制作用，可能是通過增強(qiáng)機(jī)體免疫功能而實(shí)現(xiàn)。

肝癌；白術(shù)多糖；IL-2；VEGF；Bcl-2；p21

中藥白術(shù)為菊科類植物，藥用部位為干燥根莖，主要產(chǎn)于浙江、湖北、湖南等地。白術(shù)性苦，甘，溫，歸脾，有和中、止汗的功效[1]。白術(shù)的有效化學(xué)成分十分復(fù)雜，包括脂類、糖類等。白術(shù)多糖是從白術(shù)根莖中提取出的多糖類，其主要成分為甘露聚糖、果聚糖及白術(shù)揮發(fā)油等。其中，免疫活性多糖類的藥用報道較為多見，其具有抑制腫瘤生長、激活免疫細(xì)胞、改善機(jī)體免疫功能，并且對免疫器官和固有免疫功能都有積極的促進(jìn)作用[2]。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

昆明小鼠50只,雌雄各半,體重18～22g,由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物飼養(yǎng)中心提供。將其分為5組,每組10只,即空白對照組，白術(shù)多糖高、中、低劑量組，豬苓多糖組。

1.2 試劑

白術(shù)多糖粗制晶體藥品、H22肝癌細(xì)胞株由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)購進(jìn)；IL-2、VEGF、Bcl-2、p21測定試劑盒購自西安瑞安試劑有限公司。

1.3 主要儀器

電子天平、電熱恒溫水浴鍋(成都臺盟儀器廠)；微量移液器(上海優(yōu)博器械廠)；MNT5-WS型臺式低速離心機(jī)、全自動酶標(biāo)儀-ER-7078A酶標(biāo)儀、PCR擴(kuò)增儀(成都儀器廠制造)。

1.4 造模及給藥方法

將H22肝癌細(xì)胞按照一定比例配比,每只小鼠右腋部皮下接種0.25mL。接種24h后,分別腹腔注射給藥白術(shù)多糖高(200mg/kg)、中(100mg/kg)、低(50mg/kg)劑量組,陽性組給藥豬苓多糖100mg/kg,空白對照組給予相同體積的生理鹽水,連續(xù)給藥15天，停藥次日處死。

1.5 指標(biāo)檢測

ELISA法測血清中VEGF、IL-2含量；免疫組化法測瘤組織中Bcl-2基因表達(dá)情況、RT-PCR法測瘤組織中p21基因表達(dá)；并且計算抑瘤率。抑瘤率=(對照組平均瘤重-治療組平均瘤重)/對照組平均瘤重×100%。

1.6 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果

2.1 白術(shù)多糖對小鼠血清中IL-2、VEGF及瘤組織Bcl-2、p21基因表達(dá)的影響

經(jīng)不同劑量給藥后，白術(shù)多糖中劑量小鼠血清中IL-2水平顯著上升，VEGF水平明顯降低；瘤組織Bcl-2基因表達(dá)上調(diào)、p21基因表達(dá)顯著下調(diào)，與豬苓多糖組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

2.2 白術(shù)多糖對H22肝癌小鼠瘤重的影響

檢測H22肝癌小鼠瘤重可得，白術(shù)多糖中劑量抑瘤效果最好，其抑瘤率達(dá)28.36%，與豬苓多糖組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表2。

表1 白術(shù)多糖對小鼠血清中IL-2、VEGF及瘤組織Bcl-2、p21基因表達(dá)的影響

組別例數(shù)(n)劑量(mg/kg·d)IL-2(μg/mL)VEGF(μg/mL)p21/β-actinBcl-2(平均積分)空白對照組109.15±0.174.51±0.0117.26±2.238.32±0.43豬苓多糖組1010011.14±0.532.34±0.2226.16±2.363.69±0.42白術(shù)多糖低劑量組105010.31±0.28**2.24±0.25**21.34±1.68**3.05±0.28**白術(shù)多糖中劑量組1010011.78±0.75**2.14±0.39**26.51±2.28**3.13±0.78**白術(shù)多糖高劑量組1020010.56±0.57**2.59±0.38**23.55±3.16**3.59±0.48**

注：與豬苓多糖組比較，*P<0.05，**P<0.01。

表2 白術(shù)多糖對H22肝癌小鼠瘤重的影響 ±s)

注：與豬苓多糖組比較，*P<0.05，**P<0.01。

3 討論

隨著社會的發(fā)展和時代的進(jìn)步，人民的生活水平不斷提升，加之大氣、環(huán)境污染和電離輻射及食物各種添加劑的使用，使得普通人群中腫瘤的發(fā)生率不斷提高。其中最常見的為胃癌、肝癌、肺癌、消化道腫瘤等。臨床最直接且最有效的治療方法為手術(shù)切除和大面積清掃淋巴結(jié)等，對患者帶來了極大的創(chuàng)傷，且治療效果并不明顯，存活率不過數(shù)月或者幾年。因此，各國學(xué)者始終在尋找一種能夠有效遏制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的高效藥物[3]。

本項(xiàng)研究在祖國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)寶庫資料的基礎(chǔ)上建立，白術(shù)多糖為白術(shù)根莖的重要提取物，有資料記載其有抗氧化、抗自由基、提高對缺氧耐受度及控制機(jī)體細(xì)胞過度生長等作用。同時在細(xì)胞信號傳導(dǎo)和細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)中也有十分重要的作用，并且可以提高固有免疫細(xì)胞的功能，如NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞、B1細(xì)胞、肥大細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞等[4]。另外，其不僅能夠提高機(jī)體的體液免疫水平，還可提高小鼠淋巴細(xì)胞對ConA的反應(yīng)性及小鼠學(xué)習(xí)記憶和抗氧化作用。

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)明確顯示，不同給藥劑量的白術(shù)多糖相對于空白組腫瘤的重量都有不同程度的減輕，并且抑制腫瘤生長的效果較好。白術(shù)多糖的高、中、低劑量組與豬苓多糖組相對比，可以發(fā)現(xiàn)其能夠提高血清中IL-2含量達(dá)到提高機(jī)體免疫力效果，進(jìn)而消滅腫瘤細(xì)胞；同時減少VEGF含量水平，減少了腫瘤的生長營養(yǎng)和抑制其轉(zhuǎn)移效果；并抑制促凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，且上調(diào)p21基因表達(dá)，控制細(xì)胞周期殺死腫瘤細(xì)胞[5]。因此，希望本研究的進(jìn)一步推進(jìn)，為開發(fā)新型抗癌藥物提供理論依據(jù)。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010:95.

[2] 黃利，李利民，唐麗燕暢白術(shù)水煎劑對小鼠免疫功能的影響[J].中藥藥理與臨床，2012,28(1):114.

[3] 孫文平，李發(fā)勝，侯殿東，等.當(dāng)歸、白術(shù)、制白附子多糖對小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2008,15(7):37.

[4] 金伯泉.醫(yī)學(xué)免疫學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2011.

[5] Kamb A,Gruis NA.Weaver-Feldhaus J,et al.A cell regulator potentiallyinvolved in genseis of many tumor types[J].Science,1994,264:436-440.

(責(zé)任編輯：魏 曉)

2015-04-21

周劍(1984-)，男，黑龍江省牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院醫(yī)師，研究方向?yàn)橹蹦c腫瘤的臨床治療。

R285.5

A

1673-2197(2015)17-0009-01

10.11954/ytctyy.201517004