韓芳潔，劉 晶，南匯株，劉 群

（中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京海淀100193）

北京某奶牛場(chǎng)新孢子蟲(chóng)病血清學(xué)調(diào)查

韓芳潔，劉 晶，南匯株，劉 群

（中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京海淀100193）

新孢子蟲(chóng)病是由新孢子蟲(chóng)（Neospora caninum）引起的多種動(dòng)物共患寄生原蟲(chóng)病，廣泛流行于世界各地，主要引起懷孕母畜的流產(chǎn)、死胎以及木乃伊胎等，對(duì)畜牧業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失，對(duì)牛的危害最為明顯。新孢子蟲(chóng)可通過(guò)水平傳播和垂直傳播兩種途徑感染，一旦牛群中有牛食入新孢子蟲(chóng)卵囊，新孢子蟲(chóng)將會(huì)通過(guò)垂直傳播在該牛群中散播，感染可持續(xù)存在多年。

已有報(bào)道，我國(guó)多地的奶牛中普遍存在新孢子蟲(chóng)感染。牛群中新孢子蟲(chóng)的傳播來(lái)源較多，養(yǎng)殖方式、飼養(yǎng)管理等諸多因素影響著牛群新孢子蟲(chóng)的感染。我們隨機(jī)采集北京某規(guī)?；膛?chǎng)牛只血液，利用間接ELISA方法檢測(cè)新孢子蟲(chóng)抗體，結(jié)合該奶牛群體資料信息，分析血清抗體陽(yáng)性與奶牛年齡、流產(chǎn)發(fā)生以及奶牛之間血緣關(guān)系相關(guān)性，了解該牛場(chǎng)新孢子蟲(chóng)感染現(xiàn)狀和感染來(lái)源，為進(jìn)一步掌握新孢子蟲(chóng)在牛群中的感染規(guī)律以及防控牛新孢子蟲(chóng)病提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 血清某奶牛場(chǎng)奶牛存欄數(shù)約2 400頭，牛場(chǎng)全群牛布魯菌抗體陰性。一年四季均有流產(chǎn)發(fā)生，2014年3月有一流產(chǎn)高峰期，流產(chǎn)多發(fā)于妊娠5～6個(gè)月，死胎時(shí)有發(fā)生，沒(méi)有明確原因。該奶牛場(chǎng)有3只犬和15只左右流浪貓。2014年8月至10月從該奶牛場(chǎng)隨機(jī)采集不同年齡奶牛血樣283份。

1.2 檢測(cè)方法采用本實(shí)驗(yàn)室建立的檢測(cè)牛血清新孢子蟲(chóng)抗體的間接ELISA試劑盒。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)用SPSS軟件對(duì)不同年齡、流產(chǎn)發(fā)生史和母-犢奶牛的新孢子蟲(chóng)血清抗體陽(yáng)性率進(jìn)行差異性分析。

2 結(jié)果

所采集的283份血清新孢子蟲(chóng)陽(yáng)性率為61.84%，其中成年母牛60.82%，后備牛為68.42%，二者差異不顯著。見(jiàn)表1。

表1 奶牛新孢子蟲(chóng)血清抗體檢測(cè)

2.1 不同年齡奶牛血清新孢子蟲(chóng)抗體檢測(cè)對(duì)283頭奶牛的血清新孢子蟲(chóng)抗體檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)各年齡段奶牛血清中均可檢測(cè)到新孢子蟲(chóng)抗體，其中4歲齡奶牛的抗體陽(yáng)性率最低，為41.79%，與其他各年齡組奶牛之間抗體陽(yáng)性率差異極顯著（P＜0.01）；其他各年齡段奶牛的血清抗體陽(yáng)性率差異不顯著（P＞0.05），見(jiàn)表2。

表2 各年齡組奶牛新孢子蟲(chóng)血清抗體檢測(cè)

2.2 新孢子蟲(chóng)血清抗體與奶牛流產(chǎn)相關(guān)性283頭被檢奶牛中，有245頭成年母牛，其中43頭有流產(chǎn)史，202頭無(wú)流產(chǎn)史，有流產(chǎn)史奶牛新孢子蟲(chóng)抗體陽(yáng)性率高達(dá)81.40%，無(wú)流產(chǎn)史的奶牛陽(yáng)性率為56.44%，見(jiàn)表3。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，抗體陽(yáng)性率與奶牛流產(chǎn)之間存在極顯著差異（P＜0.01），說(shuō)明奶牛感染新孢子蟲(chóng)是流產(chǎn)發(fā)生的主要因素。

表3 奶牛新孢子蟲(chóng)血清抗體陽(yáng)性與奶牛流產(chǎn)相關(guān)性

2.3 母奶牛與其子代奶牛之間新孢子蟲(chóng)感染的相關(guān)性比對(duì)該牛場(chǎng)68對(duì)具有直系親緣關(guān)系的母奶牛與其子代奶牛血清新孢子蟲(chóng)抗體的檢測(cè)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)新孢子蟲(chóng)抗體陽(yáng)性奶牛所產(chǎn)子代牛的抗體陽(yáng)性率為93.94%，明顯高于新孢子蟲(chóng)抗體陰性奶牛所產(chǎn)子代牛的抗體陽(yáng)性率20.00%，見(jiàn)表4。這一結(jié)果充分表明，垂直傳播是該牛場(chǎng)新孢子蟲(chóng)感染的主要途徑。

表4 母牛和子代牛血清抗體陽(yáng)性的相關(guān)性

3 分析與討論

自1988年新孢子蟲(chóng)被確認(rèn)以來(lái)，世界各地陸續(xù)有關(guān)于各種動(dòng)物新孢子蟲(chóng)感染的報(bào)道，由于新孢子蟲(chóng)對(duì)奶牛的危害最大，對(duì)奶牛新孢子蟲(chóng)感染的研究報(bào)道較多。劉群等（2003）首次報(bào)道了其對(duì)北京及山西5個(gè)奶牛場(chǎng)的40份新孢子蟲(chóng)血清抗體的檢測(cè)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)血清抗體陽(yáng)性率為26.67%［2］。其后，國(guó)內(nèi)有數(shù)篇關(guān)于奶牛新孢子蟲(chóng)感染和檢測(cè)的報(bào)道，發(fā)現(xiàn)不同區(qū)域不同飼養(yǎng)方式的奶牛新孢子蟲(chóng)感染率變化較大，姚雷等2009年報(bào)道，北京地區(qū)奶牛新孢子蟲(chóng)抗體陽(yáng)性率為43.4%，天津某養(yǎng)殖小區(qū)奶牛新孢子蟲(chóng)抗體陽(yáng)性率為5.7%［3］。夏惠焰等2011年報(bào)道，我國(guó)南方某地奶牛新孢子蟲(chóng)抗體陽(yáng)性率為18.9%［4］。郝攀等2013年報(bào)道，南京某奶牛場(chǎng)新孢子蟲(chóng)抗體陽(yáng)性率為12.2%［5］。本試驗(yàn)利用前期構(gòu)建的間接ELISA法檢測(cè)了北京某奶牛場(chǎng)的部分血清樣品，被檢奶牛新孢子蟲(chóng)抗體陽(yáng)性率為61.84%。該牛場(chǎng)建于上世紀(jì)50年代，設(shè)施較為陳舊，2013年之前，場(chǎng)內(nèi)養(yǎng)殖多條犬并有多條流浪犬自由出入，為新孢子蟲(chóng)感染和傳播創(chuàng)造了條件。

對(duì)照被檢牛的背景資料，發(fā)現(xiàn)不同年齡奶牛的新孢子蟲(chóng)抗體陽(yáng)性率不同，年齡較大的奶牛和后備牛的感染率較高，4歲齡奶牛的抗體陽(yáng)性率最低。究其原因，可能是由于后備牛初次感染新孢子蟲(chóng)后抗體水平較高，隨著年齡增長(zhǎng)，抗體水平逐漸下降，機(jī)體處于隱性感染狀態(tài)，導(dǎo)致不易檢出，但隨著年齡增長(zhǎng)、妊娠增多或同時(shí)感染其他疾病，隱性感染蟲(chóng)體再次活躍，以致血清抗體水平升高；其次，隨著奶牛飼養(yǎng)時(shí)間的增長(zhǎng)，與環(huán)境中病原接觸的機(jī)會(huì)越多，感染機(jī)會(huì)隨之增加。已有研究表明，動(dòng)物感染新孢子蟲(chóng)后可很快轉(zhuǎn)為隱性狀態(tài)，當(dāng)抗體水平降至一定程度后，會(huì)持續(xù)保持較長(zhǎng)時(shí)間，而當(dāng)其他因素具備時(shí)，可引發(fā)隱性感染蟲(chóng)體繁殖，導(dǎo)致機(jī)體的抗體水平升高［6］。

奶牛感染新孢子蟲(chóng)的主要臨床癥狀是流產(chǎn)，大量報(bào)道顯示，奶牛流產(chǎn)與新孢子蟲(chóng)血清抗體陽(yáng)性率密切相關(guān)，新孢子蟲(chóng)抗體陽(yáng)性牛比抗體陰性牛更容易發(fā)生流產(chǎn)［7-8］。Koiwai等的研究發(fā)現(xiàn)，血清抗體陽(yáng)性奶牛的流產(chǎn)率比陰性牛高9.2倍［9］。姚雷等（2009）對(duì)北京和天津奶牛研究發(fā)現(xiàn)，新孢子蟲(chóng)感染奶牛流產(chǎn)率是未感染新孢子蟲(chóng)奶牛的1.5倍到2.0倍［3］。本研究對(duì)比有流產(chǎn)史和無(wú)流產(chǎn)史奶牛的新孢子蟲(chóng)抗體檢測(cè)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)有流產(chǎn)史的?？贵w陽(yáng)性率81.40%，無(wú)流產(chǎn)史的牛抗體陽(yáng)性率56.44%，再次證明新孢子蟲(chóng)感染與奶牛流產(chǎn)的發(fā)生密切相關(guān)。

新孢子蟲(chóng)是機(jī)會(huì)性原蟲(chóng)，一般情況下感染牛并不表現(xiàn)可見(jiàn)癥狀。牛群中新孢子蟲(chóng)最有效的傳播方式是經(jīng)胎盤(pán)垂直傳播給胎兒，一旦新孢子蟲(chóng)感染牛群，高達(dá)90%的子代牛可以經(jīng)胎盤(pán)獲得感染［10］，有報(bào)道可高達(dá)95%［7］。因此，環(huán)境中少量的卵囊就能導(dǎo)致新孢子蟲(chóng)在牛群中的散播。我們比較了有血緣關(guān)系的奶牛檢測(cè)結(jié)果，血清抗體陽(yáng)性母牛的子代牛陽(yáng)性率高達(dá)93.94%，而血清抗體陰性母牛的子代陽(yáng)性率為20.00%，二者之間差異極顯著（P＜0.01）。推測(cè)該場(chǎng)奶牛群體最初的感染來(lái)源于犬，之后通過(guò)母代牛與子代牛之間的垂直傳播進(jìn)一步播散，因此該牛場(chǎng)當(dāng)前的主要傳播方式是垂直傳播。

本次調(diào)查表明，該牛場(chǎng)存在嚴(yán)重的新孢子蟲(chóng)感染，奶牛流產(chǎn)與新孢子蟲(chóng)感染密切相關(guān)，垂直傳播是新孢子蟲(chóng)感染奶牛的主要途徑。

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S852.72+3

B

0529-6005（2015）12-0050-02

2015-07-20

國(guó)家奶牛產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系（CARS-37-02A）

韓芳潔（1989-），女，碩士，研究方向?yàn)轭A(yù)防獸醫(yī)學(xué)，E-mail：hanfangjie7549@163.com

劉群，E-mail：qunliu@cau.edu.cn