程海燕，楊秀鳳，馬會(huì)清

(青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院婦科,山東 青島 266042)

?

宮頸癌介入化療前后SDF-1和CXCR4表達(dá)及意義

程海燕，楊秀鳳，馬會(huì)清

(青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院婦科,山東 青島 266042)

目的 探討宮頸癌介入化療前后基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(SDF-1)及其特異性受體CXC趨化因子受體4(CXCR4)蛋白表達(dá)變化，以及對(duì)預(yù)測(cè)介入化療敏感性的作用。方法 應(yīng)用免疫組化方法，測(cè)定40例宮頸癌組織介入化療前后SDF-1、CXCR4蛋白的表達(dá)，分析其與介入化療效果的關(guān)系。結(jié)果 宮頸癌介入化療臨床總有效率為85.0%，介入化療有效率與臨床期別無(wú)關(guān)(P>0.05)。介入化療前后宮頸癌組織中SDF-1蛋白的表達(dá)差異無(wú)顯著性(P>0.05)，CXCR4蛋白表達(dá)差異有顯著性(χ2=4.645，P<0.05)。介入化療前SDF-1陽(yáng)性及陰性者介入化療有效率分別為84.0%(21/25)、80.0%(12/15)，兩者比較差異無(wú)顯著性(P>0.05)；介入化療前CXCR4陽(yáng)性者及CXCR4陰性者介入化療總有效率分別為96.7%(29/30)、70.0%(7/10)，兩者比較差異有顯著性(χ2=6.125，P<0.05)。結(jié)論 介入化療能通過(guò)改變宮頸癌組織中CXCR4蛋白表達(dá)，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和浸潤(rùn)；介入化療前檢測(cè)宮頸癌組織中CXCR4蛋白的表達(dá)可能用于預(yù)測(cè)介入化療的臨床療效。

宮頸腫瘤；化學(xué)栓塞，治療性；趨化因子CXCL12；免疫組織化學(xué)

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)惡性腫瘤之一[1]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球每年約有50萬(wàn)宮頸癌新發(fā)病例，每年死亡病例約為28萬(wàn)，近年來(lái)宮頸癌的發(fā)病有逐漸年輕化趨勢(shì)[2]。對(duì)于巨塊型宮頸癌(原發(fā)腫瘤直徑>4 cm)，腫瘤大小是宮頸癌預(yù)后不良的一個(gè)重要因素，易發(fā)生宮旁浸潤(rùn)、淋巴轉(zhuǎn)移。根治性手術(shù)和放療都不能有效提高病人生存率和降低治療相關(guān)的并發(fā)癥。近年來(lái)，隨著新輔助化療及介入放射治療學(xué)的發(fā)展,新輔助化療已成為宮頸癌治療的發(fā)展趨勢(shì)。本文研究通過(guò)檢測(cè)40例ⅠB～ⅡB期宮頸癌病人介入化療前后基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(SDF-1)及其特異性受體CXC類趨化因子受體4(CXCR4)蛋白表達(dá)的變化，進(jìn)一步研究介入化療對(duì)宮頸癌組織浸潤(rùn)能力及細(xì)胞增殖的影響，旨在為宮頸癌病人制定合理的治療方案、預(yù)測(cè)介入化療療效和判定預(yù)后提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料

2009年1月—2013年3月，在我科住院初治的宮頸癌病人40例，年齡31～54歲，中位年齡43歲。按2009年國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)分期標(biāo)準(zhǔn)：ⅠB期26例，ⅡA期8例，ⅡB期6例。入選標(biāo)準(zhǔn)：①我院初治，宮頸活組織病理檢查確診為宮頸鱗狀細(xì)胞癌；②局部腫瘤直徑≥4 cm；③盆腔檢查提示宮旁組織增厚，但彈性好；④未合并或繼發(fā)第二癌，術(shù)前均行介入化療；⑤血常規(guī)及肝腎功能等檢查均正常；⑥臨床資料及病理標(biāo)本完整齊備，術(shù)后隨訪資料比較完整。所有宮頸癌病人介入化療后均行手術(shù)治療。病人簽署化療知情同意書(shū)。

1.2化療方法

化療方案：順鉑80 mg+氟尿嘧啶1 000 mg+博來(lái)霉素15～20 mg。用Sedlinger技術(shù)經(jīng)股動(dòng)脈穿刺插管，行造影檢查，可見(jiàn)子宮動(dòng)脈或腫瘤主要營(yíng)養(yǎng)血管，一次性注入化療藥物總量的1/3～1/2，然后退出導(dǎo)管經(jīng)腹主動(dòng)脈插入對(duì)側(cè)髂內(nèi)動(dòng)脈，注入剩余藥物。病人栓塞化療結(jié)束后局部加壓、包扎、制動(dòng)24 h，給予水化等治療，觀察病人腫瘤所致陰道流血、陰道排液、疼痛以及下肢疼痛等情況。化療后10～14 d進(jìn)行療效評(píng)估，對(duì)介入化療有效但局部腫瘤仍較大或?qū)m旁浸潤(rùn)較嚴(yán)重者，間隔21 d后再次行介入化療，但不超過(guò)2個(gè)療程。

1.3療效判斷標(biāo)準(zhǔn)

介入化療結(jié)束10～14 d后，由兩位副主任醫(yī)師以上婦科腫瘤專家行常規(guī)婦科檢查評(píng)估宮頸病變及盆腔情況；行B超檢查或盆腔CT或盆腔MRI檢查，測(cè)量子宮頸病灶大小，評(píng)定介入化療的近期療效。采用世界衛(wèi)生組織(WHO)實(shí)體瘤的近期療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)。①完全緩解(CR)：所有可測(cè)量大小的腫瘤病灶全部消失而且無(wú)新病灶發(fā)生；②部分緩解(PR)：所有可測(cè)量大小的腫瘤全部縮小>50%，且無(wú)新病灶發(fā)生；③病灶穩(wěn)定(SD)：腫瘤大小改變≤25%且無(wú)新腫瘤發(fā)生；④疾病進(jìn)展(PD)：腫瘤體積無(wú)縮小甚或有新病灶發(fā)生。有效率=(CR+PR)例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.4SDF-1和CXCR4蛋白表達(dá)檢測(cè)

采用免疫組織化學(xué)SP法，檢測(cè)宮頸癌病人介入化療前、后宮頸癌組織中SDF-1及CXCR4蛋白的表達(dá)。收集病人術(shù)前宮頸組織活檢及宮頸癌根治手術(shù)切除腫瘤組織蠟塊，4 μm厚連續(xù)切片，依次行脫蠟水化，抗原修復(fù)，一抗、二抗孵育，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，分化-封片，鏡檢，拍照。用已知陽(yáng)性切片做陽(yáng)性對(duì)照，以PBS代替一抗做陰性對(duì)照。鼠抗人SDF-1、鼠抗人CXCR4試劑均購(gòu)于上海長(zhǎng)島生物科技有限公司。

1.5免疫組化染色結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)

SDF-1和CXCR4陽(yáng)性細(xì)胞著色定位于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)。隨機(jī)觀察10個(gè)高倍視野(400倍),每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞,根據(jù)其中陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比和染色強(qiáng)度分別進(jìn)行評(píng)分，最后綜合評(píng)定結(jié)果。①陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比評(píng)分:0分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)<10%；1分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)10%～25%；2分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)26%～50%；3分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)>50%。②染色強(qiáng)度評(píng)分:0分，無(wú)染色；1分，淡黃色；3分，黃色至棕黃色；2分，染色強(qiáng)度介于1分與3分之間?？偡e分=陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)分×染色強(qiáng)度評(píng)分?？偡e分0～1分為陰性(-),2～3分為弱陽(yáng)性(+),4～5分為中強(qiáng)陽(yáng)性(),6分以上為強(qiáng)陽(yáng)性()。

2 結(jié) 果

2.1介入化療的臨床效果

本文40例宮頸癌病人中有32例行1個(gè)療程介入化療，8例病人行2個(gè)療程介入化療。介入化療后復(fù)查，宮頸腫瘤均有縮小，陰道穹隆及宮旁增厚組織明顯變軟，其中CR者4例，PR者30例，SD者6例，無(wú)PD病人，總有效率為85.0%。其中ⅠB期有效率84.6%(22/26)，ⅡA期有效率87.5%(7/8)，ⅡB期有效率83.3%(5/6)，不同臨床分期的宮頸癌病人介入化療有效率相比較差異無(wú)顯著意義(χ2=3.063，P>0.05)。

2.2介入化療前后宮頸癌組織中SDF-1和CXCR4蛋白表達(dá)的變化

介入化療前、后宮頸癌組織中SDF-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為62.5%(25/40)和72.5%(29/40)，CXCR4蛋白陽(yáng)性表達(dá)率則分別為75.0%(30/40)和55.0%(22/40)。介入化療前、后宮頸癌組織SDF-1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異無(wú)顯著性(χ2=3.82,P>0.05)；而CXCR4蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異有顯著性(χ2=4.645，P<0.05)。

2.3SDF-1和CXCR4蛋白表達(dá)與介入化療效果的關(guān)系

介入化療前宮頸癌活檢組織標(biāo)本中SDF-1陽(yáng)性病人化療有效率為84.0%(21/25)，而SDF-1陰性病人化療有效率為80.0%(12/15)，兩者比較差異無(wú)顯著性(χ2=3.06，P>0.05)；CXCR4陽(yáng)性者化療有效率為96.7%(29/30)，CXCR4陰性者化療有效率為70.0%(7/10)，兩者比較差異有顯著性(χ2=6.125，P<0.05)。

3 討 論

宮頸癌是局部進(jìn)展型腫瘤，其血液供應(yīng)主要來(lái)自子宮動(dòng)脈，而且宮頸癌的原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶主要局限于盆腔內(nèi)，為宮頸癌術(shù)前介入化療提供了可靠的病理學(xué)及藥物作用基礎(chǔ)[3]。近年來(lái)研究結(jié)果顯示，術(shù)前介入化療有利于縮小腫瘤的體積，改善宮旁浸潤(rùn)，獲取手術(shù)機(jī)會(huì)，有利于腫瘤的完全切除，減少術(shù)中腫瘤細(xì)胞的播散及術(shù)后的轉(zhuǎn)移，消滅微轉(zhuǎn)移灶，起到放療增敏的作用，提高手術(shù)的成功率，改善病人的長(zhǎng)期生存率，尤其對(duì)于年輕女性，有利于改善病人的卵巢功能，提高生活質(zhì)量[4-5]。本研究結(jié)果顯示，40例ⅠB～ⅡB期的巨塊型宮頸癌病人介入化療后復(fù)查，宮頸腫瘤均發(fā)生壞死、縮小，陰道穹隆及宮旁增厚的組織變軟，術(shù)中解剖層次較清晰，宮旁組織切除較徹底，分離直腸、輸尿管較容易，治療總有效率為85%，與馮亞林等[5]報(bào)道結(jié)果基本一致。這再次證實(shí)了術(shù)前介入化療的有效性。本研究ⅠB2、ⅡA、ⅡB期宮頸癌病人介入化療有效率比較差異無(wú)顯著性，與楊秀鳳等[6]的研究結(jié)果一致。

盡管新輔助化療的作用已被大多數(shù)研究所肯定，但臨床上仍有部分病人對(duì)化療不敏感，因此評(píng)價(jià)新輔助化療的療效尤為重要。趨化因子是可以激活和吸引白細(xì)胞等多種具有趨化定向運(yùn)動(dòng)作用細(xì)胞的小分子蛋白質(zhì)，根據(jù)蛋白質(zhì)中前兩個(gè)半胱氨酸殘基相對(duì)位置的不同分為CXC、CC、C和CX3C共4類。SDF-1又名CXCL12，在許多組織器官中均有表達(dá),SDF-1的分泌與組織損傷有關(guān)，如肢體缺血、全身輻射及化療相關(guān)組織損傷[7-8]。它是造血干細(xì)胞動(dòng)員和歸巢的關(guān)鍵因子,影響組織血管生成，影響腫瘤細(xì)胞的黏附、遷移和侵襲，從而與腫瘤細(xì)胞的定向轉(zhuǎn)移有著緊密的聯(lián)系[9-10]。本研究結(jié)果顯示，ⅠB～ⅡB期的巨塊型宮頸癌病人介入化療前后SDF-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率差異無(wú)顯著性；介入化療前SDF-1蛋白陽(yáng)性組與陰性組病人化療有效率比較差異無(wú)顯著性，說(shuō)明介入化療可能還通過(guò)其他途徑來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、分化及轉(zhuǎn)移，從而使腫瘤細(xì)胞發(fā)生壞死和凋亡。

CXCR4為SDF-1的惟一受體。近年研究表明，腫瘤組織細(xì)胞中CXCR4過(guò)量表達(dá)，在腫瘤細(xì)胞的發(fā)生、增殖、分化、轉(zhuǎn)移中起著重要的作用；CXCR4還可以上調(diào)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤血管生成和轉(zhuǎn)移[7]。CXCR4與SDF-1特異性結(jié)合后參與調(diào)控造血干細(xì)胞遷移及歸巢、腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移等病理及生理過(guò)程[11]。迄今為止，已有很多研究證實(shí)，SDF-1/CXCR4軸在多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移中起非常重要的作用[12-15]。本研究結(jié)果顯示，ⅠB～ⅡB期的巨塊型宮頸癌病人介入化療后CXCR4蛋白陽(yáng)性表達(dá)率較化療前下降，化療前后比較差異有顯著性，提示介入化療使宮頸癌腫瘤細(xì)胞的DNA合成變慢，從而抑制了腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、進(jìn)一步轉(zhuǎn)移，促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞凋亡，臨床上表現(xiàn)為腫瘤體積縮小，增厚的宮旁組織變軟，降低了癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移率。本研究結(jié)果還顯示，CXCR4陽(yáng)性病人化療有效率高于CXCR4陰性者，差異有顯著性，提示化療藥物可以使增殖活躍的腫瘤細(xì)胞發(fā)生壞死和凋亡。因此，推測(cè)CXCR4蛋白表達(dá)可能反映了宮頸癌腫瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為，在宮頸癌病人化療前后檢測(cè)CXCR4蛋白的表達(dá)情況，可以作為腫瘤介入化療效果評(píng)價(jià)的敏感性指標(biāo)。

因本研究樣本例數(shù)少，故仍需大樣本量的前瞻性隨機(jī)對(duì)照研究，進(jìn)一步探討宮頸癌介入化療前后SDF-1和CXCR4蛋白表達(dá)情況，從而找到合適的預(yù)測(cè)宮頸癌病人化療敏感性、判斷化療效果的指標(biāo)，以提高局部晚期宮頸癌病人的治療效果，延長(zhǎng)生存期，降低復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，改善預(yù)后。

[1] SCHMID M P, KIRISITS C, NESVACIL N, et al. Local recurrences in cervical cancer patients in the setting of image-guided brachytherapy: a comparison of spatial dose distribution within a matched-pair analysis[J]. Radiother Oncol, 2011,100(3):468-472.

[2] FERLAY J, SHIN H R, BRAY F, et al. Estimates of worldwide burden of cancer in 2008: Globocan 2008[J]. Int J Can-cer, 2010,127(12):2893-2917.

[3] PARK J H, KIM Y S, AHN S D, et al. Concurrent chemoradiotherapy or radiotherapy alone for locally advanced cervical cancer in elderly women[J]. Tumori, 2011,96(6):959-965.

[4] 張金敏,王翔宇,王蓁. PB方案在宮頸癌介入化療中的應(yīng)用[J]. 齊魯醫(yī)學(xué)雜志, 2014,29(1):13-14,18.

[5] 馮亞林,席志萍,王愛(ài)敏,等. 雙側(cè)子宮動(dòng)脈灌注化療及栓塞在宮頸癌治療中的應(yīng)用[J]. 陜西醫(yī)學(xué)雜志, 2010,39(6):672-673.

[6] 楊秀鳳,魏曉強(qiáng),張文華. 宮頸癌介入化療前后MMP-2和Ki67表達(dá)及意義[J]. 齊魯醫(yī)學(xué)雜志, 2010,25(5):391-393.

[7] 李紅玉,陳科達(dá),于海濤,等. CXCL12(SDF-1)/CXCR4信號(hào)傳導(dǎo)通路及其腫瘤相關(guān)性研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)小兒血液與腫瘤雜志, 2011,16(6):279-282,286.

[8] PATRICIA A C, JIANG H W, REDMOND H P. Hypoxial increases the metastatic ability of breast cancer cells via upre-gulation of CXCR4[J]. BMC Cancer, 2010,10:225-234.

[9] BALABANIAN K, LAGANE B, INFANTINO S, et al. The chemokine SDF-1/CXCL12 binds to and signals through the orphan receptor RDC1 in T lymphocytes[J]. J Biol Chem, 2005,280(42):35760-35766.

[10]蔡劍,王佳. SDF-1/CXCR4與泌尿系腫瘤的研究進(jìn)展[J]. 陜西醫(yī)學(xué)雜志, 2009,38(1):114-118.

[11]DUDA D G, KOZIN S V, KIRKPATRICK N D, et al. CXCL12 (SDF1alpha)-CXCR4/CXCR7pathway inhibition: an emerging sensitizer for anticancer therapies[J]? Clin Cancer Res, 2011,17(8):2074-2080.

[12]KAJIYAMA H, SHIBATA K, TERAUCHI M, et al. Involvement of SDF-1alpha/CXCR4 axis in the enhanced peritoneal metastasis of epithelial ovarian carcinoma[J]. Int J Can-cer, 2008,122(1):91-99.

[13]RHODES L V, ANTOON J W, MUIR S E, et al. Effects of human mesenchymal stem cells on ER-positive human breast carcinoma cells mediated through ER-SDF-1/CXCR4 crosstalk[J]. Mol Cancer, 2010,9(18):295.

[14]陳友權(quán),于燕妮. 胃癌中SDF-1、CXCR4、MMP-2和MMP-9的表達(dá)及意義[J]. 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志, 2012,28(2):135-139,143.

[15]鄭淑芳,展曉紅,時(shí)麗芳,等. 大腸癌中SDF-1與CXCR4的表達(dá)及臨床意義[J]. 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志, 2013,29(1):9-13.

(本文編輯 黃建鄉(xiāng))

EXPRESSIONS AND SIGNIFICANCE OF SDF-1 AND CXCR4 IN CERVICAL CANCER BEFORE AND AFTER CHEMOTHERAPY

CHENGHaiyan,YANGXiufeng,MAHuiqing

(Department of Gynecology, The Second Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College, Qingdao 266042, China)

ObjectiveTo explore the expressions of SDF-1 and CXCR4 in cervical cancer before and after interventional chemotherapy (IC), and its role in predicting the sensitivity of IC.MethodsExpressions of SDF-1 and CXCR4 protein in 40 cases of cervical cancer were detected by immunohistochemistry, before and after IC, and their association with the efficacy of the chemotherapy was evaluated.ResultsThe total clinical efficiency of IC was 85.0%, which was not correlated with clinical stages (P>0.05). The difference of expression of SDF-1 before and after IC was not significant (P>0.05), but the difference of expression of CXCR4 was significant (χ2=4.645,P<0.05). Those with positive SDF-1 before IC,the effective rate of chemotherapy was 84% (21/25); for those with negative SDF-1 was 80.0% (12/15), no significant difference was found between them (P>0.05). Those with positive CXCR4 before IC,the effective rate was 96.7%;and those with negative CXCR4, 70.0% (7/10), the difference between them was significant (χ2=6.125,P<0.05).ConclusionInterventional chemotherapy can inhibit tumor cell proliferation and invasion through changing the expressions of CXCR4 in cervical cancer tissue. Detection of CXCR4 expression before chemotherapy intervention is expected to be used for predicting clinical efficacy of the therapy.

uterine cervical neoplasm; chemoembolization, therapeutic; chemokine CXCL12; immunohistochemistry

2014-04-26;

2014-10-30

青島市衛(wèi)生局資金資助項(xiàng)目(2010-wszd042)

程海燕(1979-)，女，碩士，主治醫(yī)師。

馬會(huì)清(1963-)，男，碩士，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師。

R737.33

A

1008-0341(2015)02-0135-04