李慶國

聊城市光明醫(yī)院，山東 聊城252000

細(xì)胞塊石蠟切片檢查對惡性漿膜腔積液的診斷價(jià)值

李慶國

聊城市光明醫(yī)院，山東 聊城252000

目的探討細(xì)胞塊石蠟切片檢查對惡性漿膜腔積液的診斷價(jià)值。方法對560例于2009年5月～2013年5月在本院就診的胸腔、腹腔和心包積液患者的穿刺抽取液分別采用細(xì)胞塊石蠟切片法與常規(guī)離心涂片法進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查，統(tǒng)計(jì)并分析兩種方法和兩種方法聯(lián)用對惡性漿膜腔積液的診斷符合率。結(jié)果560例漿膜腔積液患者中，經(jīng)手術(shù)病理、纖維支氣管鏡、胸腹腔鏡、影像引導(dǎo)下穿刺活檢、診斷性治療等確診為惡性腫瘤并發(fā)積液的有210例。常規(guī)離心涂片法對惡性漿膜腔積液的敏感度為57.6%，特異度為98.8%；細(xì)胞塊石蠟切片法對惡性漿膜腔積液的敏感度為69.5%，特異度為99.4%，兩種方法敏感度比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；兩種方法聯(lián)用對惡性漿膜腔積液的敏感度為72.3%，特異度為100%。結(jié)論在對漿膜腔的穿刺抽取液進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查時(shí)，細(xì)胞塊石蠟切片法要優(yōu)于常規(guī)離心涂片法，兩種方法聯(lián)用可進(jìn)一步提高對惡性漿膜腔積液的診斷符合率。

惡性漿膜腔積液；高速離心機(jī)；細(xì)胞塊石蠟切片法；常規(guī)離心涂片法

漿膜腔積液是臨床多種疾病的常見并發(fā)癥，脫落細(xì)胞學(xué)檢查為鑒別良性和惡性漿膜腔積液的重要手段。傳統(tǒng)的離心涂片法細(xì)胞學(xué)檢查的特異性高，但由于惡性漿膜腔積液中的腫瘤細(xì)胞少且分散，其敏感性較低，易造成漏診[1]。細(xì)胞塊石蠟切片法收集的細(xì)胞數(shù)多，可明顯提高對惡性漿膜腔積液的診斷符合率，但其脫水、浸蠟等過程中會有固縮和人為損害，導(dǎo)致有時(shí)細(xì)胞形態(tài)不如涂片法清晰，從而造成假陰性或假陽性[2]。筆者應(yīng)用細(xì)胞塊石蠟切片法與常規(guī)離心涂片法對漿膜腔積液進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2009年5月～2013年5月在本院通過影像診斷和穿刺確診的560例漿膜腔積液患者，其中胸腔積液322例，腹腔積液150例，心包積液56例，多漿膜腔積液32例（指積液2處或2處以上）；男性341例，女219例，年齡13～85歲，中位年齡49歲；積液為黃色392例，血性147例，乳糜性21例。

1.2 檢查方法

將每例患者漿膜腔的穿刺抽取液分為2份，1份經(jīng)常規(guī)離心涂片法制成涂片，另1份則經(jīng)細(xì)胞塊石蠟切片法制成切片。由兩位副主任醫(yī)師采用雙盲法通過會診作出診斷報(bào)告。

1.2.1 常規(guī)離心涂片制作方法

常規(guī)離心涂片制作方法如下：取新鮮漿膜腔積液標(biāo)本10～20 mL，經(jīng)高速離心機(jī)以2000 r/min的轉(zhuǎn)速離心5 min后取沉渣，用推片法制片5～7張／例，自然干燥后用瑞特-姬姆薩雙染色法進(jìn)行染色。血性混濁標(biāo)本離心后取有核細(xì)胞層制片。對可疑癌細(xì)胞涂片要縮短染色時(shí)間。

1.2.2 細(xì)胞塊石蠟切片制作方法

細(xì)胞塊石蠟切片制作方法如下：漿膜腔積液標(biāo)本室溫靜置10～20 min，用尖底離心管取容器底層標(biāo)本50 mL，經(jīng)高速離心機(jī)以5000 r/min的轉(zhuǎn)速離心5 min，棄上清留沉淀物；在離心管中加10%中性甲醛5～10 mL，與沉淀物混勻，室溫固定處理1 h后離心棄上清；再加入10%中性甲醛5～10 mL，混勻后補(bǔ)充固定1 h后離心，棄上清，用濾紙包好沉淀物（若漿膜腔積液中沉淀物較少時(shí)，可加入75%的乙醇5～10 mL，然后靜置30 min，使沉淀物凝固硬化）；用吸管吸取細(xì)胞塊到顯微鏡擦鏡紙上，包好后放入自動脫水機(jī)中進(jìn)行組織處理，制成石蠟細(xì)胞塊，再將細(xì)胞塊切成厚度為3 μm的切片，60 ℃烘干1 h。

1.2.3 閱片方法

閱片方法如下：將離心涂片及細(xì)胞切片置于顯微鏡下觀察，若見到多個(gè)具有惡性特征的細(xì)胞則診斷為陽性，未見異型細(xì)胞則診斷為陰性，查見異型細(xì)胞但不足以診斷為惡性的則要結(jié)合臨床進(jìn)行綜合診斷。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

全部數(shù)據(jù)經(jīng)核查無誤后采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，兩組計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腫瘤來源分析

560例漿膜腔積液標(biāo)本中經(jīng)手術(shù)病理、纖維支氣管鏡、胸腔鏡、胃鏡、穿刺活檢及痰檢等證實(shí)為惡性積液的有210例，其中141例為惡性胸腔積液，來源于原發(fā)性肺癌100例（70.9%），乳腺癌15例（10.6%），食道癌11例（7.8%），惡性淋巴瘤7例（4.9%），惡性間皮瘤4例（2.8%），胸腺癌4例（2.8%）；57例為惡性腹腔積液，來源于消化道腫瘤25例（43.8%），卵巢癌14例（24.5%），肝癌8例（14.0%），腎癌3例 （5.3%）， 惡性間皮瘤3例 （5.3%）， 惡性淋巴瘤3例（5.3%），原發(fā)于大網(wǎng)膜腺癌1例（1.7%）；12例為惡性心包腔積液，來源于肺癌7例（58.3%），胸腺癌2例（16.7%），食道癌3例（25.0%）。

2.2 常規(guī)離心涂片法與細(xì)胞塊石蠟切片法的診斷結(jié)果比較

常規(guī)離心涂片法與細(xì)胞塊石蠟切片法對惡性漿膜腔積液的敏感度分別為57.6%和69.5%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），特異度分別為98.8%和99.4%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；兩種方法聯(lián)用對惡性漿膜腔積液的敏感度為72.3%，特異度為100%。結(jié)果見表1～3。

表1 常規(guī)離心涂片法的診斷結(jié)果（例）

表2 細(xì)胞塊石蠟切片法的診斷結(jié)果（例）

表3 兩種方法聯(lián)用的診斷結(jié)果（例）

2.3 常規(guī)離心涂片及細(xì)胞切片的鏡下表現(xiàn)

常規(guī)離心涂片中的細(xì)胞數(shù)量少，呈分散或堆積重疊樣，背景雜質(zhì)較多，但細(xì)胞排列良好，對于判斷腫瘤細(xì)胞的來源有較高的價(jià)值（圖1）。細(xì)胞塊石蠟切片中的細(xì)胞數(shù)量多，呈大量集中樣，有核細(xì)胞密度高，細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，圖像背景清晰，便于觀察分析（圖2）。

圖1 離心涂片鏡下表現(xiàn)

圖2 細(xì)胞塊石蠟切片鏡下表現(xiàn)

3 討論

惡性漿膜腔積液常由癌細(xì)胞刺激、癌栓阻塞淋巴管和血管致組織液回流障礙等引起，人體任何系統(tǒng)的惡性腫瘤都可能發(fā)生漿膜腔轉(zhuǎn)移，其中以肺癌、胃腸道癌、乳腺癌、卵巢癌、惡性淋巴瘤最為常見。漿膜腔積液內(nèi)各種細(xì)胞形態(tài)在以往文獻(xiàn)中描述較多[3-4]，應(yīng)用漿膜腔穿刺抽取液查找癌細(xì)胞不僅能夠快速進(jìn)行診斷，還能夠避免腹腔鏡、支氣管鏡、胃鏡、穿刺活檢等操作對患者造成的不必要的損傷。目前多數(shù)醫(yī)院采用常規(guī)離心涂片法來檢查癌細(xì)胞，具有快速、簡便、易行的優(yōu)點(diǎn)，缺點(diǎn)主要是檢出率較低，文獻(xiàn)[5-6]報(bào)道其檢出率約為40%～50%，主要原因在于：① 常規(guī)涂片法只能留取10 mL樣本離心，收集的細(xì)胞數(shù)量少，容易造成假陰性；② 涂片常存在厚薄不均的現(xiàn)象，涂片太厚可導(dǎo)致細(xì)胞互相重疊而影響觀察；涂片太薄時(shí)，細(xì)胞數(shù)又太少，只能觀察到少數(shù)細(xì)胞及單個(gè)細(xì)胞的形態(tài)變化，難以做出判斷；③ 細(xì)胞來源多、成分復(fù)雜，細(xì)胞漿角化傾向不明顯，常遇到增生的間皮細(xì)胞和腺癌細(xì)胞難以鑒別的問題。

漿膜腔積液離心沉淀物細(xì)胞塊石蠟切片法是較好的細(xì)胞學(xué)檢查技術(shù)，有研究表明胸腹腔積液標(biāo)本的石蠟切片的平均細(xì)胞數(shù)量高于涂片法[7]。本研究結(jié)果顯示，細(xì)胞塊石蠟切片厚薄均勻，其中的細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，圖像背景清晰，便于觀察分析；細(xì)胞塊石蠟切片法對惡性漿膜腔積液的敏感度為69.5%，高于常規(guī)離心涂片法的57.6%（P＜0.05）；且蠟塊可反復(fù)、間斷切片，并可根據(jù)需要采用敏感抗體進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，以明確標(biāo)記出間皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞，起到鑒別診斷和鑒別腫瘤來源的作用[8-9]。

盡管細(xì)胞塊石蠟切片法對惡性漿膜腔積液的檢出率高于常規(guī)涂片法，但是本組210例惡性漿膜腔積液中，有4例由常規(guī)離心涂片法檢出而細(xì)胞塊石蠟切片法卻呈假陰性，考慮原因?yàn)椋撼Ｒ?guī)離心涂片中的細(xì)胞排列良好，近似原細(xì)胞的體積和形狀，更能反映出細(xì)胞的染色性、顆粒性和真實(shí)性，在一定程度上也能反映出器官的功能狀態(tài)和反應(yīng)性變化如增生、炎性反應(yīng)等，易辨認(rèn)良惡性細(xì)胞；而細(xì)胞塊石蠟切片中的細(xì)胞較為集中，雖便于觀察各種細(xì)胞的特殊排列，但因其脫水、浸蠟、切片等過程中有固縮和人為損害，有時(shí)會出現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)不如涂片清晰從而造成假陰性的情況。因此，臨床上應(yīng)聯(lián)用常規(guī)離心涂片法和細(xì)胞塊石蠟切片法進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查。本研究結(jié)果顯示，兩種方法聯(lián)用對惡性漿膜腔積液的檢出率達(dá)72.3%，顯著高于常規(guī)離心涂片法及細(xì)胞塊石蠟切片法單獨(dú)應(yīng)用時(shí)的檢出率，且無假陽性情況出現(xiàn)。

檢驗(yàn)科對如何留取漿膜腔積液也應(yīng)該和臨床穿刺醫(yī)生進(jìn)一步溝通，本研究中注意事項(xiàng)如下：① 大量積液患者行穿刺抽液時(shí)，開始抽取的積液較為清澈，離心后獲得的細(xì)胞塊可能較小或不宜制成蠟塊，因此應(yīng)對最后抽取的較為渾濁的積液進(jìn)行離心，以獲得較為理想的細(xì)胞蠟塊；② 穿刺抽液最好在超聲監(jiān)視下完成，以實(shí)時(shí)觀察抽液過程，避免并發(fā)癥的發(fā)生；③ 對血性及乳糜性積液，應(yīng)對其中的紅細(xì)胞進(jìn)行脫色處理。

綜上所述，在對漿膜腔的穿刺抽取液進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查時(shí)，細(xì)胞塊石蠟切片法要優(yōu)于常規(guī)離心涂片法，兩種方法聯(lián)用可進(jìn)一步提高對惡性漿膜腔積液的診斷符合率。

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E ff ectiveness of Cellblock Para ffi n-Imbedded Sections in Diagnosis of Malignant Serous Cavity E ff usion

LI Qing-guo
Liaocheng Guangming Hospital, Liaocheng Shandong 252000, China

ObjectiveTo discuss the e ff ectiveness of cellblock paraffin-imbedded sections in diagnosis of malignant serous cavity e ff usion.MethodsA total of 560 patients were selected among all the patients with pleural, ascites and pericardial e ff usion who had been treated in the hospital from May 2009 to May 2013. The cellblock paraffin-imbedded sections and the cell centrifugation smear had been performed to make cytological examinations of pleural, ascites and pericardial effusion for these patients. The accuracy rates of two methods and combined use of two methods in diagnosis of malignant serous cavity effusion were analyzed respectively.ResultsAmong 560 cases, 210 were identified with malignant serous cavity e ff usion through the surgical pathology, fi beroptic bronchoscopy, laparoscope, imagingguided needle biopsy and diagnostic treatment. The sensibility and speci fi city of the cell centrifugation smear were 57.6% and 98.8% in comparison with the cellblock paraffin-imbedded sections’ 69.5% and 99.4% respectively. There were statistically signi fi cant di ff erences (P＜0.05) between two methods. The sensibility and speci fi city of the combined use of the two methods were 72.3% and 100%.ConclusionCellblock paraffin-imbedded sections demonstrated its superiority over the cell centrifugation smear in cytological examinations of serous cavity e ff usion. Combined use of two methods can further improve the accuracy rate in diagnosis of serous cavity e ff usion.

malignant serous cavity effusion; high-speed centrifuge; cellblock paraffin-imbedded sections; cell centrifugation smear

TH776+.2

B

10.3969/j.issn.1674-1633.2015.03.034

1674-1633(2015)03-0111-03

2014-10-17

作者郵箱：15339949026@163．com