車愛文，陳淑蘋，譚旭東，李家梁，馬紅梅

（1.深圳市龍崗區(qū)婦幼保健院病理科，廣東 深圳 518172；2.深圳市福田區(qū)人民醫(yī)院病理科，廣東 深圳 518033）

·臨床病理·

CIP2A在宮頸癌中的表達(dá)及其臨床意義

車愛文1，陳淑蘋1，譚旭東1，李家梁1，馬紅梅2

（1.深圳市龍崗區(qū)婦幼保健院病理科，廣東 深圳 518172；2.深圳市福田區(qū)人民醫(yī)院病理科，廣東 深圳 518033）

目的探討CIP2A在宮頸癌(Cervical cancer)、宮頸上皮內(nèi)瘤變(Cervical intraepithelial，CIN)及正常宮頸組織中的表達(dá)及其臨床意義。方法應(yīng)用免疫組化S-P法檢測(cè)50例宮頸鱗狀細(xì)胞癌、34例CINⅠ、40例CINⅡ、45例CINⅢ及12例正常宮頸組織中CIP2A蛋白的表達(dá)。結(jié)果CIP2A蛋白在宮頸癌中的表達(dá)明顯高于宮頸上皮內(nèi)瘤變及正常宮頸組織，且與宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期有關(guān)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論CIP2A在宮頸鱗狀細(xì)胞癌中過表達(dá)，且與宮頸癌的惡性臨床病理特征密切相關(guān)，為將來(lái)發(fā)展以CIP2A為靶分子的宮頸癌臨床診斷和新的治療策略提供了新的思路。

CIP2A；宮頸腫瘤；免疫組化

宮頸癌是第二常見的婦科惡性腫瘤，最多見的發(fā)病年齡為15～44歲[1]，其發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多步驟、多基因參與的復(fù)雜過程，發(fā)病率具有明顯增高趨勢(shì)，隨著診斷技術(shù)和治療方式的改善，宮頸癌患者的生活質(zhì)量有所改善，但其5年生存率仍未得到明顯提高，因此需要通過尋找宮頸癌的有效治療靶向標(biāo)志物來(lái)改善患者的預(yù)后。

蛋白磷酸酶2A(Protein phosphatase 2A，PP2A)的癌性抑制因子(Cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A，CIP2A)是最近被識(shí)別的一種癌蛋白。其通過抑制對(duì)c-myc蛋白的去磷酸化作用使c-myc蛋白表達(dá)升高，從而導(dǎo)致細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，促進(jìn)細(xì)胞的增殖及錨著非依賴性生長(zhǎng)，參與腫瘤的形成。已有研究表明，CIP2A在一些實(shí)體瘤如頭頸部鱗狀細(xì)胞癌、結(jié)腸癌、胃癌和乳腺癌中過表達(dá)，但CIP2A在宮頸癌中的表達(dá)情況及作用機(jī)制尚不明確。本實(shí)驗(yàn)利用免疫組化的方法來(lái)檢測(cè)CIP2A蛋白在宮頸癌中的表達(dá)情況，并探討其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 收集深圳市龍崗區(qū)婦幼保健院及深圳市福田區(qū)人民醫(yī)院2008年1月至2013年12月經(jīng)活檢、LEEP及手術(shù)切除50例浸潤(rùn)性宮頸鱗狀細(xì)胞癌、34例宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅰ(CINI)、40例CINⅡ、45例CINⅢ及12例正常宮頸組織存檔的蠟塊標(biāo)本。所有組織切片經(jīng)HE染色后均經(jīng)病理學(xué)檢查確診，根據(jù)國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO，2000年)標(biāo)準(zhǔn)分期，Ⅰ期29例、Ⅱ期17例、Ⅲ期4例；組織分化程度G1、G2、G3分別為27、14、9例；術(shù)前均未接受放療、化療；年齡36～71歲，中位年齡53.5歲。標(biāo)本用40 g/L甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，兔抗人CIP2A單克隆抗體凍干粉購(gòu)自Santa Cruz公司(工作濃度按1:100稀釋)。

1.2 免疫組織化學(xué)染色 免疫組化染色采用S-P法，實(shí)驗(yàn)步驟按說明書進(jìn)行。以試劑公司提供的陽(yáng)性對(duì)照片作為陽(yáng)性對(duì)照，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。CIP2A的表達(dá)主要位于細(xì)胞質(zhì)，以細(xì)胞質(zhì)染為棕黃色物質(zhì)為陽(yáng)性。所有染色的片子都要經(jīng)過兩位病理科專家的分別觀察和打分。打分方法如下：根據(jù)免疫組化檢測(cè)陽(yáng)性瘤細(xì)胞的百分比打分，分為0分(沒有陽(yáng)性的腫瘤細(xì)胞)、1分(陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞為≤25%)、2分(陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞為25%～50%)、3分(陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞為50%～75%)和4分(陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞為75%～100%)；根據(jù)免疫組化染色強(qiáng)度打分，分為陰性、弱染色、中度染色和強(qiáng)染色。每張切片最后的得分為兩次評(píng)分的乘積，最終記為四種結(jié)果：乘積為0，陰性，記為“-”；乘積≤4，低表達(dá)，記為“+”；乘積為5～8，中度表達(dá)，記為“++”；乘積≥大于9，強(qiáng)表達(dá)，記為“+++”。如果兩位病理醫(yī)師的打分結(jié)果不一致，則棄去此數(shù)據(jù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)相關(guān)的數(shù)據(jù)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。各組間樣本率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05確定為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CIP2A蛋白在宮頸組織各種病變中的表達(dá)情況 CIP2A免疫組化的陽(yáng)性表達(dá)主要為棕黃色顆粒，在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核均有表達(dá)，但在胞質(zhì)中的信號(hào)更強(qiáng)。50例宮頸鱗狀細(xì)胞癌中CIP2A陰性表達(dá)16例(32%)，弱陽(yáng)性9例(18%)，陽(yáng)性17例(34%)，強(qiáng)陽(yáng)性8例(16%)，CIP2A在12例正常宮頸組織、34例CINⅠ及40例CINⅡ組織陽(yáng)性表達(dá)率均為0，與宮頸癌之間(χ2=16.71，χ2=14.67，χ2=14.96，P＜0.05)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在45例CINⅢ中有6例表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率為13.3%(如圖1～圖4)，與宮頸癌之間(χ2=11.61，P＜0.05)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見表1)。

2.2 CIP2A蛋白表達(dá)水平與宮頸癌臨床病理特征分析 CIP2A蛋白表達(dá)與年齡無(wú)關(guān)，與腫瘤分期、腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)及轉(zhuǎn)移均有關(guān)，見表2。

圖1 CIP2A在CINⅠ中的表達(dá)(×100)；圖2 CIP2A在CINⅡ中的表達(dá)(×100)；圖3 CIP2A在CINⅢ中的表達(dá)(×200)；圖4 CIP2A在宮頸癌中的表達(dá)(×200)

表1 CIP2A蛋白在宮頸組織各種病變中的表達(dá)情況（例）

表2 CIP2A蛋白的表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系[例（%）]

3 討論

CIP2A(Cancerous inhibitor of PP2A)也稱為KIAA1524，定位于3號(hào)染色體上，是近年來(lái)識(shí)別的能夠抑制蛋白磷酸酶2A(PP2A)活性的蛋白，與多種基因蛋白如PP2A、myc等相互作用而發(fā)揮其功能，其可以通過抑制PP2A的B56α調(diào)節(jié)亞基對(duì)癌蛋白c-myc第62位絲氨酸的脫磷酸化作用，從而穩(wěn)定c-myc蛋白二元磷酸化結(jié)構(gòu)，抑制c-myc蛋白被泛素化水解。同時(shí)，c-myc作為核轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子又能夠調(diào)節(jié)CIP2A mRNA轉(zhuǎn)錄水平的變化，從而形成一個(gè)正反饋環(huán)路[2-3]。細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)[4]，CIP2A在維持細(xì)胞表形轉(zhuǎn)化，促進(jìn)細(xì)胞增殖和體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)方面起關(guān)鍵作用。CIP2A的過度表達(dá)可以阻止細(xì)胞衰老，促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)化和增殖[5]。由于其在良性組織中不表達(dá)或低表達(dá)，而在實(shí)體腫瘤及骨髓增生異常綜合征中均有高表達(dá)，如在人類頭頸部鱗狀細(xì)胞癌[4]、結(jié)腸癌[4]、胃癌[5-6]、乳腺癌[7]、肝癌[8]以及非小細(xì)胞肺癌[9]中存在高表達(dá)。最近新的研究顯示CIP2A還能在慢性粒細(xì)胞白血病中高表達(dá)[10]，因此，推測(cè)CIP2A可能參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，被列為一種新的癌候選基因。目前研究發(fā)現(xiàn)，CIP2A在不同的實(shí)體腫瘤中表達(dá)和預(yù)后均不同[11]。本研究顯示，50例浸潤(rùn)性宮頸鱗狀細(xì)胞癌中陰性表達(dá)16例(32%)，弱陽(yáng)性9例(18%)，陽(yáng)性17例(34%)，強(qiáng)陽(yáng)性8例(16%)，CIP2A在12例正常宮頸、34例CINⅠ、40例CINⅡ組織中不表達(dá)，在45例CINⅢ中有6例(13.3%)表達(dá)。本研究中CIP2A在約68.0%宮頸癌標(biāo)本中過表達(dá)，與其在胃癌、乳腺癌及喉癌[10]等惡性腫瘤表達(dá)相似。推測(cè)其致癌作用機(jī)制可能是：CIP2A主要通過穩(wěn)定PP2A介導(dǎo)的c-myc結(jié)構(gòu)來(lái)實(shí)現(xiàn)。Khanna等[12]也證實(shí)了CIP2A在胃癌細(xì)胞內(nèi)的缺失可增加癌細(xì)胞的增殖和降低c-myc蛋白的穩(wěn)定表達(dá)；而抑制c-myc可導(dǎo)致CIP2A的mRNA和蛋白表達(dá)下降，c-myc也可直接促進(jìn)CIP2A的基因表達(dá)。這說明CIP2A與c-myc具有協(xié)同作用，共同促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和生長(zhǎng)。此外，CIP2A與c-myc之間的相互作用在乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌和結(jié)直腸癌中也有發(fā)現(xiàn)[13-15]。

宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病呈年輕化趨勢(shì)，其發(fā)生發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜過程，經(jīng)過上皮非典型增生、原位癌及浸潤(rùn)癌這一連貫的演變過程。與許多因素有關(guān)，例如吸煙、長(zhǎng)期口服避孕藥、衣原體感染、高頻性行為、免疫抑制等，但最為重要的誘發(fā)因素是高危亞型人類乳頭瘤病毒(Human papilloma virus，HPV)的持續(xù)感染。其中，在宮頸癌患者體內(nèi)以HPV16和HPV18檢出率最高，兩者總計(jì)在60%～80%。過去的研究證實(shí)了HPV16、18的E6、E7能誘導(dǎo)宮頸組織正常細(xì)胞向癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化，并在實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化后繼續(xù)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。HPV16、18的這種惡性轉(zhuǎn)化能力以及促腫瘤細(xì)胞增殖能力是通過下調(diào)關(guān)鍵抑癌基因(例如p53和Rb)的表達(dá)和功能的同時(shí)，增強(qiáng)原癌基因的表達(dá)和功能來(lái)實(shí)現(xiàn)的[16-18]。近年來(lái)，HPV持續(xù)感染引起的細(xì)胞內(nèi)的變化仍然是宮頸癌致癌機(jī)制領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CIP2A其表達(dá)高低與宮頸癌的組織分級(jí)、臨床分期、淋巴轉(zhuǎn)移和組織分化有關(guān)，以上結(jié)果說明CIP2A參與與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程，并與宮頸癌的惡性程度相關(guān)，推測(cè)其作用機(jī)制可能是：在HPV16持續(xù)感染的情況下，HPV16基因組有機(jī)會(huì)整合入宿主基因組中，可使E7蛋白的表達(dá)升高，E7的升高又促進(jìn)了的CIP2A表達(dá)，表達(dá)水平提高的CIP2A通過穩(wěn)定c-myc蛋白或者其他未知途徑進(jìn)一步促進(jìn)了宮頸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖，從而促使腫瘤發(fā)展[19]，但其作用機(jī)制及相互關(guān)系還有待于進(jìn)一步研究。

綜上所述，CIP2A在宮頸鱗狀細(xì)胞癌中的過表達(dá)，且與宮頸癌的惡性臨床病理特征密切相關(guān)，提示CIP2A基因及其蛋白的異常表達(dá)參與了宮頸癌的發(fā)生發(fā)展。因此，檢測(cè)CIP2A在宮頸癌中的表達(dá)情況，為將來(lái)發(fā)展以CIP2A為靶分子的宮頸癌臨床診斷和新的治療策略提供了新的思路。近年來(lái)對(duì)CIP2A的研究報(bào)道也越來(lái)越多，但對(duì)其具體的分子結(jié)構(gòu)有待解決研究。

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Expression and clinical significance of CIP2A protein in cervical cancer.

CHE Ai-wen1,CHEN Shu-ping1,TAN Xu-dong1,LI Jia-liang1,MA Hong-mei2.
1.Department of Pathology,the Materal and Child Health Care Hospital of Longgang District of Shenzhen,Shenzhen 518172,Guangdong,CHINA;2.Department of Pathology,the People's Hospital of Futian District of Shenzhen,Shenzhen 518033,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo explore the expression and clinical significance of CIP2A protein in cervical cancer,cervical intraepithelial and normal cervical tissue.MethodsThe expressions of CIP2A in 50 cases of cervical cancer,34 cases of CINⅠ,40 cases of CINⅡ,45 cases of CINⅢand 12 cases of normal tissues were assessed by immunohistochemical S-P method.ResultsThe expression of CIP2A protein in cancer tissues was significantly higher than those in CIN tissues and normal tissues(P＜0.05)and closely correlated with TNM stage and metastasis.ConclusionCIP2A is overexpressed in cervical squamous cell cancer and closely correlated with the malignant clinicopathologic feature of cervical cancer.Therefore,CIP2A,as a target molecule,may provide a new thought for the clinical diagnosis and treatment strategy of cervical cancer.

CIP2A;Cervical cancer;Immunhistochemistry

R737.33

A

1003—6350（2015）02—0266—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.02.0095

2014-07-05)

車愛文。E-mail：ruochenxiong@163.com