李開智，劉飛飛，王翠玲，王全義，李珍華

(1.濟寧醫(yī)學院附屬醫(yī)院病理科，山東 濟寧272029；2.山東省安康醫(yī)院，山東 濟寧272051)

·臨床病理·

淋巴管新生與胃癌淋巴道轉(zhuǎn)移的關系

李開智1，劉飛飛1，王翠玲1，王全義1，李珍華2

(1.濟寧醫(yī)學院附屬醫(yī)院病理科，山東 濟寧272029；2.山東省安康醫(yī)院，山東 濟寧272051)

目的檢測胃癌組織中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)-C、VEGF-D及其受體(VEGFR)-3的表達，探討淋巴管新生與胃癌淋巴道轉(zhuǎn)移的關系。方法應用免疫組織化學方法檢測108例胃癌患者(伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移76例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32例)癌組織及癌旁組織中VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3的表達。結(jié)果胃癌組織中VEGF-C和VEGF-D檢測陽性率均明顯高于癌旁組織，且二者表達在有、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3之間的表達具有關聯(lián)。結(jié)論VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3可能在胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中起促進作用，聯(lián)合檢測三者表達可能有助于預測胃癌淋巴道轉(zhuǎn)移情況。

胃癌；淋巴管新生；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；免疫組織化學

胃癌是常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率及死亡率居各類腫瘤前列，目前患者根治性手術后5年生存率僅30%。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響進展期胃癌患者預后的重要因素，近年來關于淋巴管新生在腫瘤擴散過程中的作用日益引起了人們的重視，而血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)對腫瘤淋巴管生成及轉(zhuǎn)移起到不可忽視的作用[1]。在己知的VEGF家族中，VEGF-C、VEGF-D與其受體(Vascular endothelial growth factor receptor，VEGFR)-3在調(diào)節(jié)淋巴管新生中起到重要作用[2]。本研究旨在探討VEGF-C、VEGF-D與VEGFR-3在胃癌及癌旁組織中的表達及其與胃癌淋巴道轉(zhuǎn)移的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料108例胃癌標本均來源于本院2009-2013年行胃癌根治術的患者，所有診斷均經(jīng)組織病理證實。患者年齡23～86歲，中位年齡59.81歲，男:女=4.14:1。其中高、中、低分化腺癌分別為21例、41例和46例；伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移76例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32例。所選標本包括癌中心組織和癌旁組織，癌旁組織距腫物邊緣在3cm以內(nèi)。

1.2 方法 所有標本均經(jīng)4%中性福爾馬林緩沖液固定、常規(guī)制片、蘇木素-伊紅(HE)染色、光鏡觀察，明確病理診斷組織學分級、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況。免疫組化染色采用SP法，DAB顯色。所用抗體(VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3)均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。實驗中以PBS液代替一抗為陰性對照，已知陽性切片做陽性對照。

1.3 結(jié)果判定 VEGF-C和VEGF-D陽性表達＞10%的腫瘤細胞胞漿內(nèi)有棕黃色顆粒，VEGFR-3陽性表達＞10%的脈管內(nèi)皮細胞或腫瘤細胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS19.0統(tǒng)計軟件包進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)數(shù)據(jù)各組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 VEGF-C、VEGF-D的表達與胃癌臨床病理參數(shù)的關系 VEGF-C、VEGF-D的表達在不同性別及不同分化程度的腫瘤組差異無統(tǒng)計學意義。在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中VEGF-C、VEGF-D陽性表達率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。在浸潤深度上，T2～3與T1比較，VEGF-C和VEGF-D的陽性表達率明顯升高(P＜0.05)。VEGF-C在胃癌組織中陽性表達率為31.48%(34/108)，明顯高于其癌旁組織的13.89%(15/108)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。VEGF-D在胃癌組織中陽性表達率為29.63%(32/108)，明顯高于其癌旁組織的12.96%(14/108)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表1和圖1～圖4。

表1 VEGF-C和VEGF-D的表達與胃癌臨床病理特征之間的關系

圖1 腫瘤細胞呈腺管狀浸潤性生長(HE×200)

圖2 腫瘤細胞VEGF-C陽性(SP法×200)

圖3 腫瘤細胞VEGF-D陽性(SP法×200)

圖4 腫瘤細胞VEGFR-3陽性（SP法×200）

2.2 胃癌中VEGFR-3的表達與VEGF-C、VEGF-D表達的關系 胃癌組織中隨著VEGF-C和VEGF-D陽性表達率的增加，VEGFR-3陽性率明顯增加，而VEGF-C和VEGF-D表達陰性者VEGFR-3陽性很少，說明VEGFR-3的表達與VEGF-C和VEGF-D之間具有關聯(lián)(P＜0.05)，見表2。

表2 胃癌中VEGFR-3的表達與VEGF-C、VEGF-D表達的關系(例)

3 討論

淋巴道是胃癌轉(zhuǎn)移的重要途徑，隨著血管內(nèi)皮生長因子(VEGF-C和VEGF-D)及其受體VEGFR-3的相繼發(fā)現(xiàn)，對淋巴管新生的研究不斷深入。與產(chǎn)生促血管生成因子一樣，腫瘤可能產(chǎn)生促淋巴管生成的因子，在促淋巴管生成因子的刺激下，先前存在的淋巴管可能被入侵，同時，高血管密度的血管生成，可能會增加淋巴管間接傳播，在淋巴路徑形成局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；許多淋巴管分流可能會繞開局部淋巴結(jié)，引起淋巴播散，形成惡性腫瘤早期傳播[3]。VEGF-C、VEGF-D與其受體VEGFR-3在調(diào)節(jié)淋巴管新生中起到至關重要的作用。

在本研究中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(N1～3)與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(N0)相比較，VEGF-C和VEGF-D的陽性表達率顯著增高，VEGF-C與VEGF-D的高表達和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的高發(fā)生率一致，說明VEGF-C和VEGF-D對誘導淋巴管新生起到至關重要的作用。同時，VEGFR-3陽性率與VEGF-C和VEGF-D的表達具有關聯(lián)，說明胃癌組織中VEGF-C、VEGF-D及其受體VEGFR-3相結(jié)合對淋巴管新生和腫瘤的淋巴轉(zhuǎn)移可能起到密切相關的作用。在浸潤深度上，T2～3與T1比較，VEGF-C和VEGF-D的陽性表達率明顯增高，說明VEGF-C和VEGF-D對腫瘤浸潤起到促進作用。胃癌組織與癌旁組織相比較，VEGF-C及VEGF-D的陽性率顯著升高，說明VEGF-C和VEGF-D在胃癌發(fā)展過程中可能起到促進作用。在本研究中，發(fā)現(xiàn)胃癌組織中VEGF的表達在不同性別或腫瘤分化程度差異無統(tǒng)計學意義。本課題組在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與浸潤深度的研究與相關文獻研究基本吻合[4]。

綜上所述，VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3可能在胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中起到促進作用，聯(lián)合檢測三者表達有助于預測胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，抑制三者功能可能是一個有效的胃癌治療方法[5]。

[1]Sun L,Duan J,Jiang Y,et al.Metastasis-associated in colon cancer-1 upregulates vascular endothelial growth factor-C/D to promote lymphangiogenesis in human gastric cancer[J].Cancer Lett,2015,357(1):242-253.

[2]Kostis G,Ioannis L,Helen K,et al.The expression of vascular endothelial growth factor-C correlates with lymphatic microvessel density and lymph node metastasis in prostate carcinoma:An immunohistochemical study[J].UrolAnn,2014,6(3):224-230.

[3]Tacconi C,Correale C,Gandelli A,et al.Vascular endothelial growth factor C disrupts the endothelial lymphatic barrier to promote colorectal cancer invasion[J].Gastroenterology,2015,148(7):1438-1451.

[4]Wang X,Chen X,Fang J,et al.Overexpression of both VEGF-A and VEGF-C in gastric cancer correlates with prognosis,and silencing of both is effective to inhibit cancer growth[J].Int J Clin Exp pathol,2013,6(4):586-597.

[5]Villarejo-Campos P,Padilla-Valverde D,Martin RM,et al.Serum VEGF and VEGF-C values before surgery and after postoperative treatment in gastric cancer[J].Clin Transl Oncol,2013,15(4):265-270.

Relationship between lymphangiogenesis and lymph node metastasis of gastric carcinoma.

LI Kai-zhi1,LIU Fei-fei1,WANG Cui-ling1,WANG Quan-yi1,LI Zhen-hua2.1.Department of Pathology,the Affiliated Hospital of Jining Medical University,Jining272029,Shandong,CHINA;2.Shandong Ankang Hospital,Jining272051,Shandong,CHINA

ObjectiveTo study the relationship between lymphangiogenesis and lymph node metastasis of gastric carcinoma by detecting the expression of vascular endothelial growth factor(VEGF)-C,VEGF-D and their receptor-3(VEGFR-3)in patients with gastric carcinoma.MethodsParaffin-embedded specimens from108 patients with gastric carcinoma(including76 patients with lymph node metastasis and32 patients without node metastasis)were used to evaluate the expression of VEGF-C,VEGF-D,and VEGFR-3 by S-P immunohistochemical staining.ResultsThe expression of VEGF-C and VEGF-D was significantly higher in specimens of gastric carcinoma than that of the corresponding adjacent peritumoral tissues.And there was statistically significant difference between the group with lymph node metastasis and the group without lymph node metastasis(P＜0.05).Positive correlation was found among the expression of VEGF-C,VEGF-D and VEGFR-3 in gastric carcinomas.ConclusionVEGF-C,VEGF-D and VEGFR-3 may promote the lymphatic metastasis of gastric carcinoma.Combined detection of these three markers in biopsy specimens of gastric carcinoma may be helpful in predicting the lymphatic metastasis．

Gastric carcinoma;Lymphangiogenesis;Lymphatic metastasis;Immunohistochemistry

R735.2

A

1003—6350（2015）22—3391—03

2015-04-23)

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.22.1229

濟寧市科技局基金(編號：濟科字[2010]85號)

王翠玲。E-mail：Wcuiling690@sina.com