李俊軍，何 艷，唐 潔，歐陽強(qiáng)

(湖南省腫瘤醫(yī)院暨中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院病理科，湖南 長沙 410013)

·臨床病理·

腫瘤相關(guān)轉(zhuǎn)移因子-1、p53蛋白與子宮內(nèi)膜癌臨床病理的相關(guān)性

李俊軍，何 艷，唐 潔，歐陽強(qiáng)

(湖南省腫瘤醫(yī)院暨中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院病理科，湖南 長沙 410013)

目的 探討腫瘤相關(guān)轉(zhuǎn)移因子-1(MTA-1)及p53蛋白對子宮內(nèi)膜癌臨床診斷和預(yù)后評估的應(yīng)用價值。方法對31例子宮內(nèi)膜癌、19例不典型增生及26例正常子宮內(nèi)膜組織的病理切片進(jìn)行免疫組化研究，觀察MTA-1和p53蛋白的表達(dá)差異，并分析子宮內(nèi)膜癌組織MTA-1和p53蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果子宮內(nèi)膜癌、不典型增生及正常子宮組織的MTA-1陽性表達(dá)率分別為11.5%、47.4%、83.9%，p53蛋白陽性表達(dá)率分別為7.69%、36.8%、67.7%，其組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；其表達(dá)量的變化與表達(dá)率一致，且組間差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。MTA-1和p53蛋白表達(dá)量受到子宮內(nèi)膜癌TNM分期、組織學(xué)分級、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和ER陽性的影響（P＜0.05），且兩者之間具有顯著正相關(guān)性(r2=0.6248，P＜0.01)。結(jié)論MTA-1及p53蛋白與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展及病理進(jìn)程密切相關(guān)，可為其臨床診斷和預(yù)后評估提供指導(dǎo)。

腫瘤相關(guān)轉(zhuǎn)移因子-1；p53蛋白；子宮內(nèi)膜癌

子宮內(nèi)膜癌為女性生殖道三大惡性腫瘤之一，屬于上皮性病變，以腺癌最為多見[1]。腫瘤性疾病的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，涉及血管增生、細(xì)胞凋亡、免疫應(yīng)答和基因調(diào)控等多條信號通路的影響。癌基因和抑癌基因的靶控作用是近年的研究熱點(diǎn)，其中p53蛋白是目前已知的主要抑癌基因之一，在正常的人體組織中呈低表達(dá)或微表達(dá)，在部分腫瘤或癌組織中發(fā)生突變而表現(xiàn)出高表達(dá)狀態(tài)[2]。腫瘤相關(guān)轉(zhuǎn)移因子-1 (Metastasis-associated gene 1，MTA-1)最初分離于乳腺癌細(xì)胞株，瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因，因與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)而得名。近年，部分研究在子宮內(nèi)膜癌中發(fā)現(xiàn)p53蛋白和MTA-1的表達(dá)[3-4]，然而兩者與子宮內(nèi)膜癌的具體關(guān)系和相互聯(lián)系尚未明確。本研究對MTA-1及p53蛋白在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)特點(diǎn)及其與患者臨床病理特征之間的關(guān)聯(lián)做初步探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料 子宮內(nèi)膜癌組織來源于本院2013年3月至2014年9月收治、并行手術(shù)治療的31例患者，年齡31～63歲，平均(48.6±6.24)歲，所有患者均經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)為子宮內(nèi)膜癌，并排除繼發(fā)性癌變。不典型增生組織為本院同期收治、行診斷性刮宮的19例患者，年齡29～71歲，平均(49.2±7.31)歲，所有患者均經(jīng)病理診斷為不典型增生。正常子宮內(nèi)膜組織取自26例子宮良性疾病患者，年齡28～68歲，平均(48.8±7.03)歲，經(jīng)病理證實(shí)為健康組織。三組患者的平均年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn) 所取組織均制備5～7 μm石蠟病理切片，行免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)。主要步驟：①恒溫箱烘烤處理后脫蠟至水，采用酶消化方法進(jìn)行抗原修復(fù)。分別以0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶，37℃恒溫消化30 min。②抗體孵育，滴加適量一抗，4℃過夜；37℃復(fù)溫后滴加適量二抗，28℃孵育90～120 min。本實(shí)驗(yàn)所用MTA-1一抗(Ati-MTA1 antibody，ab71153)和p53蛋白一抗(Ati-p53 antibody，ab179477)均來源于兔，所配套二抗為Goat anti rabbit IgG(ab150077)，所有抗體均由Abcam提供。其中MTA-1一抗、p53一抗及二抗的使用濃度分別為1:200、1:100、1:500，以PBS稀釋。③DAB顯色，觀察顯色狀態(tài)，顯色理想者PBS清洗，蘇木素復(fù)染，二甲苯透明，中性樹膠封片鏡檢。

1.2.2 陽性表達(dá)率和表達(dá)量 將細(xì)胞著色比例和著色程度分開計(jì)分。著色比例得分：在400倍目鏡下，觀察視野內(nèi)100個細(xì)胞，著色率=著色細(xì)胞數(shù)/100，每張切片取5個視野，計(jì)算均值；將著色率分為≤5.0%、5.0%～25%、26%～50%、≥50%四個等次，分別記為0、1、2、3分。著色程度得分：將著色狀況分為無色、淡黃色、棕黃色和褐色四個等次，分別記為0、1、2、3分。陽性表達(dá)量=著色程度得分×著色比例得分；陽性表達(dá)量＞1者為陽性表達(dá)病例，計(jì)入陽性表達(dá)率。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所得數(shù)據(jù)均以SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用F檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率或構(gòu)成比表示，兩組間行Fisher檢驗(yàn)，多組間行χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性考察采用簡單線性回歸分析；以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01表示差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MTA-1和p53蛋白的表達(dá) MTA-1在正常組織、不典型增生及子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)率分別為11.5%、47.4%、83.9%，p53蛋白分別為7.69%、36.8%、67.7%，其組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；MTA-1和p53蛋白和在正常組織、不典型增生組織及子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)量變化與表達(dá)率一致，且組間差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；見表1、圖1。

表1 兩組患者M(jìn)TA-1和p53蛋白的表達(dá)情況[例(%)，±s]

表1 兩組患者M(jìn)TA-1和p53蛋白的表達(dá)情況[例(%)，±s]

注：與正常組織比較，aP＜0.05，bP＜0.01；與不典型增生比較，cP＜0.05，dP＜0.01。

正常組織不典型增生子宮內(nèi)膜癌檢驗(yàn)值P值26 19 31 3(11.5) 9(47.4)a26(83.9)bc3.924 0.016 0.52±0.10 1.82±0.13b3.62±0.27bd28.32 0.000 2(7.69) 7(36.8)a21(67.7)bc3.085 0.027 0.41±0.07 2.06±0.11b4.18±0.37bd35.26 0.000

2.2 MTA-1和p53蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌病理特征的關(guān)系 MTA-1的和p53蛋白表達(dá)量與患者年齡無關(guān)，而受到TNM分期、組織學(xué)分級、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和激素受體(ER)陽性的影響(P＜0.05)；TNM分期和組織學(xué)分級升高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤至漿膜下及ER陽性均能增加其表達(dá)量，見表2。

2.3 MTA-1和p53蛋白表達(dá)的相關(guān)性 簡單線性回歸分析結(jié)果顯示，MTA-1和p53蛋白表達(dá)量之間呈直線正相關(guān)性，y=0.7356x+0.2829，r2=0.6248，P＜0.001，其散點(diǎn)圖和相關(guān)直線見圖2。

圖1 MTA-1和p53蛋白免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果(×400)

表2 子宮內(nèi)膜癌患者M(jìn)TA-1和p53蛋白表達(dá)與病理特征的關(guān)系(±s)

表2 子宮內(nèi)膜癌患者M(jìn)TA-1和p53蛋白表達(dá)與病理特征的關(guān)系(±s)

病理特征類別例數(shù)p53蛋白年齡(歲)9 MTA-1 F或t值1.065 P值0.173 F或t值1.506 P值0.087 TNM分期13 11 6 19 3.0850.0243.3650.011組織學(xué)分級8 3 1 1 4.3570.0012.8430.026浸潤深度＜40 40～50＞50Ⅰ期Ⅱ期Ⅲ期Ⅰ級Ⅱ級Ⅲ級Ⅳ級漿膜漿膜下1.9870.0282.9350.003淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移2.8390.0043.5780.001 ER是否陽性2.8620.0042.9260.003陰性10 9 15 18 16 15 21 12表達(dá)水平3.62±0.27 3.66±0.26 3.63±0.28 3.24±0.21 3.57±0.29 3.86±0.38 3.27±0.14 3.53±0.28 3.69±0.35 3.81±0.26 3.56±0.21 3.73±0.27 3.92±0.41 3.53±0.35 3.81±0.31 3.46±0.37表達(dá)水平4.17±0.33 4.24±0.41 4.15±0.39 3.85±0.42 4.02±0.47 4.63±0.34 4.08±0.33 4.26±0.24 4.33±0.25 4.55±0.36 4.11±0.33 4.46±0.35 4.65±0.44 4.12±0.38 4.33±0.26 4.03±0.31

圖2 MTA-1和p53蛋白表達(dá)量的相關(guān)直線

3 討論

子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率超過所有女性生殖道惡性腫瘤的20%，且近幾年有不斷上升的趨勢，已成為影響我國女性健康的嚴(yán)峻問題之一。臨床調(diào)查結(jié)果顯示[5]，子宮內(nèi)膜癌預(yù)后不良的主要因素有兩個：一是確診時已發(fā)生較高程度的轉(zhuǎn)移和分化；二是治療后復(fù)發(fā)。正因如此，其早期診斷、病情評估及術(shù)后復(fù)發(fā)監(jiān)測工作尤為重要。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)的發(fā)展，腫瘤相關(guān)基因受到越來越多的重視，因其對病情的反應(yīng)更為敏感，有望為提高臨床診斷和病情評估的準(zhǔn)確性提供指導(dǎo)。

MTA-1和p53蛋白分別為近年研究較為廣泛的癌基因和抑癌基因之一，兩者在多種惡性腫瘤中存在異常高表達(dá)的現(xiàn)象。作為典型的抑癌基因，原生的p53蛋白起抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用，因其半衰期短，采用免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)很難測得。然而在惡性腫瘤中，p53蛋白發(fā)生突變，細(xì)胞周期阻滯在G1期，故而免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)可測得高表達(dá)態(tài)的突變p53蛋白[6]。近年部分學(xué)者發(fā)現(xiàn)在子宮內(nèi)膜癌中也有MTA-1和p53蛋白表達(dá)升高的現(xiàn)象，然而兩者與子宮內(nèi)膜癌的具體關(guān)系尚未明確。本研究采用免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)對子宮內(nèi)膜癌、不典型增生及正常子宮組織的MTA-1和p53蛋白表達(dá)情況作半定量分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜癌組織的MTA-1和p53蛋白表達(dá)率和表達(dá)量高于不典型增生組織，且不典型增生組織高于正常子宮組織，該結(jié)果與國內(nèi)學(xué)者張山嶺、丁聰聰?shù)萚7-8]研究一致，說明MTA-1和p53蛋白均參與了子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生。

另外，為探究兩者對子宮內(nèi)膜癌病情進(jìn)展的影響，本研究對MTA-1和p53蛋白表達(dá)情況與患者病理特征的關(guān)系進(jìn)行初步考察。在選取指標(biāo)方面，TNM分期是對原發(fā)灶、轉(zhuǎn)移灶和淋巴結(jié)受累情況的綜合評價，而組織學(xué)分級主要評定了子宮內(nèi)膜癌的分化程度，臨床常將TNM分期、組織學(xué)分級機(jī)浸潤深度作為治療方案選取和預(yù)后評估的重要指標(biāo)。另外，多數(shù)子宮內(nèi)膜癌屬于激素依賴型病變，與高雌激素刺激密切相關(guān)，已有研究證實(shí)其ER陽性表達(dá)率明顯高于健康人群[9]。因此本研究將ER也納入病理特征的考察范圍。結(jié)果發(fā)現(xiàn)MTA-1的和p53蛋白表達(dá)量受TNM分期、組織學(xué)分級、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和ER陽性的影響。該結(jié)果從一定程度上說明MTA-1的和p53蛋白與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展及病理進(jìn)程密切相關(guān)，對其臨床治療和預(yù)后評估有一定的指導(dǎo)意義。

另外，本研究對MTA-1的和p53蛋白表達(dá)量的相關(guān)性也進(jìn)行了初步分析，結(jié)果證實(shí)兩者呈直線正相關(guān)性。MTA-1屬于組蛋白去乙酞基酶的家族成員，能夠通過去乙?；D(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移；而經(jīng)典的抑癌基因如p53蛋白、p21蛋白等均受組蛋白乙酞化的調(diào)控[10]，可能為兩者相互聯(lián)系重要途徑之一。該結(jié)果提示MTA-1的和p53蛋白在子宮內(nèi)膜癌的病理機(jī)制中可能存在交互作用，有深入研究的潛在價值。

[1]劉書鵬,李庭芳,耿 英.子宮內(nèi)膜病變臨床病理診斷診治過程中的差異性[J].海南醫(yī)學(xué),2011,22(12):33-37.

[2]Kafshdooz T,Tabrizi AD,Mohaddes Ardabili SM,et al.Polymorphism of p53 gene codon 72 in endometrial cancer:Correlation with tumor grade and histological type[J].Asian Pac J Cancer Prev, 2014,15(22):9603-9606.

[3]張海艷,李立安,李亞里,等.ER、PR、P53在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及對預(yù)后的影響[J].軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院學(xué)報,2012,33(1):27-29,41.

[4]張山嶺,郝 權(quán),孫和熙,等.MTA1影響子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞侵襲遷移的體外研究[J].中國腫瘤臨床,2012,39(10):630-633.

[5]林春華,唐 蜜,陳 旻,等.P-VEGFR-3、P-AKT、P-PDGFR-α及D2-40在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及意義[J].海南醫(yī)學(xué),2014,25(24): 3634-3637.

[6]陸思千,賈舒婷,羅 瑛.突變p53功能研究新進(jìn)展與個性化的腫瘤治療新策略[J].遺傳,2011,33(6):539-548.

[7]張山嶺,郝 權(quán),孫和熙,等.MTA1表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌相關(guān)性研究[J].中國腫瘤臨床,2012,39(4):208-211.

[8]丁聰聰,董 悅.PBRM1和P53在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及其與病理分期的相關(guān)性研究[J].中國婦幼保健,2014,29(31):5046-5048.

[9]Kong X,Xu X,Yan Y,et al.Estrogen regulates the tumour suppressor MiRNA-30c and its target gene,MTA-1,in endometrial cancer [J].PLoS One,2014,9(3):e90810.

[10]Lee KE.Immunohistochemical assessment of O(6)-methylguanine-DNA methyltransferase(MGMT)and its relationship with p53 expression in endometrial cancers[J].J Cancer Prev,2013,18 (4):351-354.

Correlation of metastasis-associated gene 1 and p53 with clinicopathologic features of endometrial cancer.

LI Jun-jun,HE Yan,TANG Jie,OUYANG Qiang.
Department of Pathology,Hunan Cancer Hospital(the Affiliated Cancer Hospital of Xiangya School of Medicine,Central South University),Changsha 4100013,Hunan,CHINA

Objective To explore the application value of metastasis-associated gene 1(MTA-1)and p53 in the clinical diagnosis and prognosis assessment of endometrial cancer.MethodsPathological sections from 31 cases of endometrial cancer,19 cases of atypical hyperplasia and 26 cases of normal endometrial tissues were selected,and MTA-1 and p53 protein expression were detected by immunohistochemical assay.The relations of MTA-1 and p53 protein expression with clinicopathologic features of patients were analyzed.ResultsThe MTA-1 positive rate of endometrial cancer,atypical hyperplasia and normal endometrial tissues were 11.5%,47.4%and 83.9%,and the p53 positive rate were 7.69%,36.8%and 67.7%,respectively,with statistically significant differences between the two groups (P＜0.05).The change of expression quantity was in accordance with that of positive rate,with statistically significant difference between the two groups(P＜0.01).The MTA-1 and p53 expression were influenced by TNM stage,histological grade,infiltration depth,lymph node metastasis and the ER positive(P＜0.05),with positive correlations(r2=0.6248,P＜0.01).ConclusionMTA-1 and p53 are closely related to the occurrence,development and pathological process of endometrial cancer,which can provide guidance for its clinical diagnosis and prognosis assessment.

Metastasis-associated gene 1(MTA-1);p53 protein;Endometrial cancer

R737.33

A

1003—6350（2015）13—1997—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.13.0722

2015-02-11)

李俊軍。E-mail：494427973@qq.com