全 忠，王 帥，劉 毅

(1.老河口市第一人民醫(yī)院骨科病區(qū)，湖北 老河口 441800；2.襄陽市解放軍477醫(yī)院骨科病區(qū)，湖北 襄陽 441800)

·循證醫(yī)學(xué)·

谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶基因多態(tài)性與中國人群骨肉瘤化療敏感性的meta分析

全 忠1，王 帥2，劉 毅1

(1.老河口市第一人民醫(yī)院骨科病區(qū)，湖北 老河口 441800；2.襄陽市解放軍477醫(yī)院骨科病區(qū)，湖北 襄陽 441800)

目的系統(tǒng)評(píng)估谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶GSTT1、SGTM1、GSTP1基因多態(tài)性與中國人群骨肉瘤化療敏感性。方法計(jì)算機(jī)檢索PubMed、Embase、Web of Science、Cochrane Library、中國知網(wǎng)(CNKI)、維普(VIP)、萬方數(shù)據(jù)庫及中國生物醫(yī)藥文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(CBD)，收集有關(guān)GSTM1、GSTT1、GSTP1與中國人群骨肉瘤化療敏感性的研究，按照納入和排除標(biāo)準(zhǔn)篩選文獻(xiàn)，對(duì)符合標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)并提取數(shù)據(jù)，采用RevMan5.3、Stata12.0軟件進(jìn)行meta分析，計(jì)算合并OR值和95%CI，進(jìn)行發(fā)表偏倚評(píng)價(jià)和敏感性分析。結(jié)果共納入4篇文獻(xiàn)由12個(gè)獨(dú)立的研究組成，累計(jì)病例681例。Meta分析結(jié)果顯示中國人群GSTT1(OR=0.92，95%CI=0.68～1.25，P=0.59)、GSTM1(OR=0.93，95%CI=0.68～1.26，P=0.63)缺失型與正常型及GSTP1各遺傳模型(GG vs AA+AG，OR=0.61，95%CI=0.34～1.11，P=0.11)對(duì)化療的敏感性差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但GSTP1 Meta分析穩(wěn)健性欠佳。結(jié)論GSTT1、GSTM1基因多態(tài)性與中國人群骨肉瘤患者化療敏感性無關(guān)。GSTP1基因多態(tài)性與中國人群骨肉瘤患者化療敏感性可能無關(guān)，更進(jìn)一步大樣本研究是必要的。

骨肉瘤；谷胱甘肽酶轉(zhuǎn)移酶；基因多態(tài)性；Meta分析

骨肉瘤(Osteosarcoma)又稱為“成骨肉瘤”，是一種好發(fā)于青少年和兒童的危及生命的惡性腫瘤[1]，其病因尚不明確，但研究證實(shí)其發(fā)病受遺傳因素的影響[2]。規(guī)范化的治療包括新輔助化療和術(shù)后進(jìn)一步化療[3]，然而腫瘤的多重耐藥性導(dǎo)致約50%的骨肉瘤患者對(duì)化療不敏感[4]，加之基因多態(tài)性對(duì)骨肉瘤患者化療敏感性影響[5]，使得骨肉瘤患者的預(yù)后欠佳。

谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GSTs)是一種可以緩解氧化應(yīng)激作用的解毒酶家族，能增加毒物的水溶性，使其排除體外[6]。到目前為止，在人和哺乳動(dòng)物體內(nèi)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)8種不同類的谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶[7]，他們分別是GSTα、GSTκ、GSTδ、GSTω、GSTμ、GSTπ、GSTξ、GSTθ。GSTM1和GSTT1屬于GSTμ家族，GSTP1屬于GSTπ家族中的一員，他們是目前在骨肉瘤中研究最多的GSTs成員之一，他們可以影響化療藥物在體內(nèi)的吸收與代謝，作用于腫瘤的耐藥機(jī)制[8]。目前有關(guān)GSTM1、GSTT1、GSTP1基因多態(tài)性與化療敏感性研究國內(nèi)報(bào)道較多，但都存在樣本量偏小，統(tǒng)計(jì)效力較低，因此研究結(jié)論也不太一致。為此，我們采用Meta分析的方法進(jìn)行綜合定量分析，明確GSTM1、GSTT1、GSTP1基因多態(tài)性與化療敏感性的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 文獻(xiàn)檢索 全面檢索PubMed、Embase、Web of Science、Cochrane Library、中國知網(wǎng)(CNKI)、維普(VIP)、萬方數(shù)據(jù)庫及中國生物醫(yī)藥文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫，收集有關(guān)GSTM1、GSTT1、GSTP1與中國人群骨肉瘤化療敏感性的文章。檢索策略：基于PICOS原則，中文檢索詞式：“谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶”或“GSTM1”或“GSTT1”或“GSTP1”并“基因多態(tài)性”并“骨肉瘤”或“骨腫瘤”；英文檢索式：”Glutathione S-Transferase”O(jiān)R“GSTs”O(jiān)R”GSTT1”O(jiān)R”GSTM1”O(jiān)R”GSTP1”AND“Polymorphisms”O(jiān)R“Variation”O(jiān)R“SNP”AND“Osteosarcoma”。所有文獻(xiàn)檢索至2015年3月15日，同時(shí)追溯所獲文獻(xiàn)的參考文獻(xiàn)，進(jìn)一步從中篩選符合要求的相關(guān)文獻(xiàn)。文獻(xiàn)出版語言限于中文和英文。

1.2 文獻(xiàn)篩選 ①閱讀所檢索出文獻(xiàn)的標(biāo)題和摘要，初步納入符合要求的文獻(xiàn)；②獲取初步納入文獻(xiàn)全文，仔細(xì)閱讀全文，排除不合格文獻(xiàn)；③在閱讀的過程中，追溯參考文獻(xiàn)以補(bǔ)充符合納入標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)。

1.3 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1 納入標(biāo)準(zhǔn) ①2015年3月15日以前公開發(fā)表的有關(guān)谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶基因多態(tài)性與骨肉瘤化療敏感性的文獻(xiàn)；②所納入文獻(xiàn)研究對(duì)象是中國人，且均行組織病理學(xué)證實(shí)，確診為骨肉瘤；③文中報(bào)告數(shù)據(jù)完整，能直接或間接的計(jì)算出OR值及95% CI；④所有納入病例均為首次診斷骨肉瘤，且之前未接受過化療，在治療過程中未接受過放療；⑤所有病例均接受以多柔比星、氨甲喋呤、順鉑、環(huán)磷酰胺等化療藥組成的標(biāo)準(zhǔn)化化療方案；⑥如果兩個(gè)研究中有重疊人群，納入樣本量較大的研究；⑦療效評(píng)判依據(jù)根據(jù)WHO標(biāo)準(zhǔn)或者RECIST標(biāo)準(zhǔn)。

1.3.2 排除標(biāo)準(zhǔn) ①重復(fù)發(fā)表的文獻(xiàn)；②數(shù)據(jù)不完整文獻(xiàn)；③會(huì)議、摘要、述評(píng)、個(gè)案報(bào)道、綜述類文獻(xiàn)。

1.4 文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)價(jià)及數(shù)據(jù)的提取 由兩個(gè)獨(dú)立的研究員依據(jù)紐卡斯?fàn)?渥太華標(biāo)準(zhǔn)(NOS)(http://www.ohri.ca/programs/clinical_epidemiology/oxford. asp)從選擇、可比性和結(jié)局三個(gè)方面對(duì)文獻(xiàn)進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)(滿分9分)，并按照標(biāo)準(zhǔn)化數(shù)據(jù)收集方案從原文中提取數(shù)據(jù)，然后交叉核對(duì)。在質(zhì)量評(píng)價(jià)及數(shù)據(jù)提取過程中，如有分歧，則由兩名研究員協(xié)商解決。資料提取的內(nèi)容包括第一作者、發(fā)表時(shí)間、基因型檢測方法、病例總數(shù)及各基因型化療敏感的例數(shù)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用RevMan5.3軟件及Stata12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。合并效應(yīng)量采用OR及95%CI表示。首先采用Q檢驗(yàn)對(duì)最終納入的文獻(xiàn)進(jìn)行異質(zhì)性檢驗(yàn)，當(dāng)各研究間無明顯異質(zhì)性(Ph＞0.1)時(shí)，采用固定效益模型，否則，使用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，用I2衡量異質(zhì)性大小[9-10]。應(yīng)用Stata12.0軟件采用Begg法和Egger法檢驗(yàn)評(píng)價(jià)發(fā)表偏倚，采用逐一排除法進(jìn)行敏感性分析。

2 結(jié) 果

2.1 文獻(xiàn)檢索及質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果 最終共有4篇文獻(xiàn)納入本研究[11-14]，均為英文文獻(xiàn)，累計(jì)病例681例，由12個(gè)獨(dú)立的研究組成，GSTP1基因型分布均經(jīng)檢驗(yàn)均符合哈溫(Hardy-Weinberg)平衡(P＞0.05)。納入病例的基本特征如表1，納入文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)分平均7分，質(zhì)量均較高。

2.2 Meta分析結(jié)果 各基因不同遺傳模型meta分析結(jié)果如表2。其中GSTT1、GSTM1均無明顯異質(zhì)性(I2=0，P＞0.1)，故采用固定效應(yīng)模型(圖1)。結(jié)果顯示：中國人群骨肉瘤患者GSTT1、GSTM1缺失型與正常型對(duì)化療的敏感性差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。GSTP1基因除了共顯性模型AG vs AA和超顯性模型GG+AAvsAA無明顯異質(zhì)性(I2=0，P＞0.1)采用固定效益模型外，其余遺傳模型均采用隨機(jī)效應(yīng)模型(I2＞50%，P＜0.1)進(jìn)行分析(圖1)，結(jié)果顯示中國人群骨肉瘤患者GSTP1基因各遺傳模型對(duì)化療敏感性差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

表1 納入病例的基本特征

表2 GSTT1、GSTM1、GSTP1基因多態(tài)性與中國人骨肉瘤化療敏感性Meta分析結(jié)果

2.3 發(fā)表偏倚 利用Stata12.0軟件，Beeg檢驗(yàn)法繪制各基因各遺傳模型漏斗圖，納入文獻(xiàn)均出現(xiàn)在漏斗圖上，對(duì)稱散開分布(圖2)。行Beeg檢驗(yàn)和Egger檢驗(yàn)結(jié)果顯示GSTT1、GSTM1、GSTP1各遺傳模型無發(fā)表偏倚(P＞0.05)，如圖1。

2.4 敏感性分析 采用逐一排除法對(duì)納入研究進(jìn)行敏感性分析，其中GSTT1、GSTM1基因排除其中任何一項(xiàng)研究后，Meta分析合并P值未發(fā)生明顯變化(P＞0.05)，提示結(jié)果穩(wěn)健。但GSTP1基因在剔除Yang等[11]研究后，各遺傳模型Meta分析合并P值變化明顯(P＜0.05)，因此，GSTP1基因Meta分析結(jié)果穩(wěn)健性較差。

圖1 各基因遺傳模型森林圖

圖2 各基因遺傳模型漏斗圖

3 討論

谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶是一種重要的II相代謝酶，在藥物代謝的過程中發(fā)揮重要的作用[15]，尤其是GSTT1、GSTM1、GSTP1，其基因多態(tài)性已被證實(shí)與多種腫瘤化療敏感性有關(guān)[16-18]，他們通過改變酶的活性來影響化療的敏感性[19]。從國內(nèi)外報(bào)道來看，目前大部分有關(guān)GSTT1、GSTM1、GSTP1基因多態(tài)性與骨肉瘤化療敏感性的研究均局限于國內(nèi)，但由于單個(gè)研究樣本量較小，檢驗(yàn)效能較低，故研究結(jié)論不盡相同。Yang等[11]研究發(fā)現(xiàn)，GSTP1 GG基因型對(duì)化療應(yīng)答率略高于AA基因型，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OR= 1.60，95%CI=0.84～4.15)，但在平衡了性別、年齡等混雜因素后，他認(rèn)為GG基因型對(duì)化療敏感(OR=2.19，95%CI=1.15～6.21)。但Liu等[12]的研究認(rèn)為GSTP1基因GG(OR=0.82，95%CI=0.35～1.91)基因型和等位基因G(OR=0.57，95%CI=0.36～0.88)對(duì)化療不敏感。類似的分歧在另外兩項(xiàng)研究中也存在[13-14]。

本研究顯示GSTT1、GSTM1缺失型與正常型相比，對(duì)化療的敏感性沒有顯著差異，采用逐步排除法進(jìn)行敏感性檢驗(yàn)時(shí)候，并沒有改變Meta分析結(jié)果，采用Beeg法和Egger法檢測也未發(fā)現(xiàn)發(fā)表偏倚。這表明GSTT1、GSTM1基因多態(tài)性與中國人群骨肉瘤患者化療敏感性無關(guān)。研究認(rèn)為GSTM1缺失型可以減少化療藥對(duì)化療更加敏感[20-21]。這與本研究結(jié)論不一致，這可能與樣本量及種族有關(guān)。

在研究GSTP1基因型對(duì)中國人群骨肉瘤患者化療敏感性影響時(shí)，我們分別采用等位基因(G vsA)、顯性模型(GG+AG vs AA)、隱性模型(GG vs AA+AG)、超顯性模型(GG+AA vs AG)、共顯性模型(GG vs AA和AG vs AA)逐步進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，所有遺傳模型對(duì)化療的敏感性均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＞0.05)，Beeg法和Egger法檢驗(yàn)也未發(fā)現(xiàn)發(fā)表偏倚。但采用逐步排除法在排除Yang等[11]研究后，GG vs AA，G vs A，GG+AG vs AA，AG vs AA，GG vs AG+AA遺傳模型與化療敏感性有關(guān)(P＜0.05)，提示該Meta分析的結(jié)果不穩(wěn)健。因此，更進(jìn)一步大樣本量的研究是必要的。

本研究雖然系統(tǒng)科學(xué)的設(shè)計(jì)了研究方案，但仍然存在一定的缺陷：(1)骨肉瘤發(fā)病是多因素共同作用的結(jié)果，其中難免存在基因-基因，基因-環(huán)境間的交互作用，由于原始數(shù)據(jù)缺失，故未能對(duì)此進(jìn)行分析；(2)骨肉瘤患者化療方案、化療藥物生成廠家不盡相同，也可能對(duì)化療效果有一定的影響；(3)基因型檢測方法不完全相同型，這也可能對(duì)研究結(jié)果有一定的影響。

總之，本研究顯示，GSTT1、GSTM1、GSTP1基因多態(tài)性可能與中國人群骨肉瘤化療敏感性無關(guān)。但由于遺傳異質(zhì)性的存在，我們期待今后開展更多大樣本量、更高質(zhì)量的研究，以更準(zhǔn)確評(píng)估GSTT1、GSTM1、GSTP1基因多態(tài)性與骨肉瘤化療敏感性的關(guān)系，為臨床治療提供更好的方案。

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Gene polymorphism of glutathion S-transferase and chemosensitivity of osteosarcoma in Chinese population:a meta-analysis.

QUAN Zhong1,WANG Shuai2,LIU Yi1.1.Department of Orthopedics,the First Hospital of Laohekou, Laohekou 441800,Hubei,CHINA;2.Department of Orthopedics,the 477 Hospital of Chinese People's Liberation Army, Xiangyang 441800,Hubei,CHINA

ObjectiveTo evaluate the gene polymorphism of glutathion S-transferase(GSTT1,SGTM1, GSTP1)and chemosensitivity of osteosarcoma in Chinese population in order to obtain a more precise and comprehensive estimation of the telationshion.MethodsAn independently comprehensive electronic online search was conducted in PubMed,Embase,the Cochrane Library,Web of Science,the China National Knowledge Infrastructure(CNKI), VIP,Wanfang Data,and the Chinese Biomedicine Database(CBD)to collect studies regarding glutathion S-transferase and chemosensitivity of osteosarcoma in Chinese population.The data were screened based on the inclusion and exclusion criteria,and the qualified studies were evaluated.The pooled odds ratios(OR)with 95%confidence intervals were calculated using RevMan 5.3 and Stata 12.0 software.Publication bias and sensitivity analysis were also performed.ResultsInitially,4 potentially relevant publications containing 12 separate studies involving 681 cases were included in the current meta-analysis.Resultsshowed that the GSTT1(Null vs Present,OR=0.92,95%CI=0.68～1.25,P=0.59),GSTM1(Null vs Present OR=0.93,95%CI=0.68～1.26,P=0.63),GSTP1(GG vsAA+AG,OR=0.61,95%CI= 0.34～1.11,P=0.11)polymorphism was not associated with chemosensitivity of osteosarcoma in Chinese population(P＞0.05).However,the robustness of the meta-analysis results of GSTP1 polymorphism was poor.ConclusionThe current meta-analysis demonstrates that the GSTT1,GSTM1 GSTP1 polymorphism may be not related to chemosensitivity of osteosarcoma in Chinese population.Further studies with a larger sample size are needed to determine the association of GSTP1 polymorphism and the chemosensitivity of osteosarcoma.

Osteosarcoma;Glutathion S-transferase;Gene polymorphism;Meta-analysis

R738

A

1003—6350（2015）21—3229—05

2015-04-20)

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.21.1175

全 忠。E-mail：Qzh_lhk@163.com