沈 會(huì)，陶漢華，張 詔，展兆雙，馬美燕，朱煒楷

(1.大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，遼寧大連 116011;2.山東中醫(yī)藥大學(xué)，濟(jì)南 250355)

《金匱》“虛勞建中”理論探討建中理勞湯對(duì)慢性腎衰的影響研究?

沈 會(huì)1，2，陶漢華2△，張 詔2，展兆雙2，馬美燕2，朱煒楷1

(1.大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，遼寧大連 116011;2.山東中醫(yī)藥大學(xué)，濟(jì)南 250355)

目的:通過檢測24 h尿蛋白、尿素氮、肌酐觀察建中理勞湯改善模型慢性腎衰大鼠的機(jī)制。方法:采用腺嘌呤灌胃法復(fù)制慢性腎衰大鼠模型，設(shè)空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、建中理勞湯預(yù)防干預(yù)高低劑量組、建中理勞湯高低劑量組、尿毒清組，觀察不同劑量給藥對(duì)模型大鼠各指標(biāo)的影響。結(jié)果:建中理勞湯能夠改善慢性腎衰大鼠臨床癥狀和體征，降低其24 h尿蛋白、血尿素氮、肌酐的含量，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:建中理勞湯能夠改善慢性腎衰大鼠腎功能。

虛勞建中;《金匱要略》;建中理勞湯;慢性腎衰

慢性腎衰(chronic Renal Failure，CRF)主要臨床癥狀與《金匱要略》虛勞病各種癥狀相類似，所以我們認(rèn)為，“虛勞”能更好地概括CRF基本特征。慢性腎衰為中醫(yī)虛勞病，當(dāng)按虛勞進(jìn)行辨證論治［1］。在前期研究中，我們?cè)凇疤搫诮ㄖ小崩碚撝笇?dǎo)下創(chuàng)立了建中理勞湯，該方能明顯改善慢性腎衰患者臨床癥狀，改善貧血，提高生活質(zhì)量，推遲透析和腎移植時(shí)間［2］。本研究以腺嘌呤灌胃法復(fù)制慢性腎衰模型為研究對(duì)象，評(píng)價(jià)“虛勞建中”法對(duì)慢性腎衰大鼠腎功能的影響及預(yù)防作用，以探討其作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物

建中理勞湯由黨參30 g、黃芪30 g、山藥30 g、茯苓30 g、炙甘草10 g、生地黃15 g、菟絲子15 g、澤瀉10 g、當(dāng)歸10 g、丹皮10 g組成。5劑量加適量水浸泡1 h，砂鍋煎2遍，將2次藥液混合后置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀內(nèi)濃縮至950 ml，配得每毫升含生藥1 g的建中理勞湯高劑量溶液。用蒸餾水將高劑量稀釋1倍即得低劑量建中理勞湯溶液。

尿毒清顆粒，廣州康臣藥業(yè)有限公司(國藥準(zhǔn)字H31022805，5 g/包);腺嘌呤，美國AMRESCO公司(EINECS號(hào)200-796-1，10 g/支)。

1.2 動(dòng)物

SPF級(jí)雄性Wista大鼠70只，體質(zhì)量200～230 g(山東中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證編號(hào)SCXK(魯)20110003)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)及觀察在山東中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心(SPF)。

1.3 試劑

苦味酸、生理鹽水、0.5%戊巴比妥鈉、伊紅染液、考馬司亮藍(lán)和BUN、Cre測定試劑盒。

1.4 儀器

普通天平、試管、電子天平、動(dòng)物手術(shù)臺(tái)、藥匙、灌胃器、注射器、勻漿機(jī)、離心機(jī)和生化分析儀等。

2 方法

2.1 模型復(fù)制

腺嘌呤誘導(dǎo)法復(fù)制慢性腎衰具有穩(wěn)定性好、與5/6腎切除法比較技術(shù)難度低等優(yōu)點(diǎn)［3］。將2.5%腺嘌呤溶液按1 mL/100 g體質(zhì)量對(duì)大鼠灌胃，每日1次，連續(xù)21 d?？瞻捉M每日灌胃等量的生理鹽水。

2.2 分組與處理

適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，根據(jù)大鼠體質(zhì)量，使用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件將大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為(剔除死亡動(dòng)物)空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、建中理勞湯預(yù)防干預(yù)高劑量組、建中理勞湯預(yù)防干預(yù)低劑量組、建中理勞湯高劑量組、建中理勞湯低劑量組、尿毒清組7組，每組各10只。除空白對(duì)照組每籠飼養(yǎng)5只外，其余各組均每籠飼養(yǎng)1只。實(shí)驗(yàn)期間大鼠飼料由山東中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心提供。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中大鼠均自由攝食和飲用自來水，室溫控制在19～22℃，相對(duì)濕度維持在60% ～70%。造模當(dāng)日，建中理勞湯預(yù)防干預(yù)高劑量組和低劑量組即開始給藥，其中建中理勞湯預(yù)防干預(yù)高劑量組以2 ml/ 100 g體質(zhì)量灌胃(每毫升含生藥1 g，用20倍人單位公斤體質(zhì)量劑量中藥)，建中理勞湯預(yù)防干預(yù)低劑量組以2 ml/100 g體質(zhì)量灌胃(每毫升含生藥0.5 g，用10倍人單位公斤體質(zhì)量劑量中藥)，共21 d。造模成功后，建中理勞湯(顆粒稀釋劑)高劑量組每日灌胃2 ml/100 g(每毫升含生藥1 g)，建中理勞湯低劑量組每日灌胃湯劑2 ml(每毫升含生藥0.5 g)，生理鹽水2 ml/100 g體質(zhì)量灌胃;尿毒清組每日中藥灌胃湯劑2 ml(每毫升含生藥0.5 g)。每日1次，連續(xù)給藥21 d。

2.3 指標(biāo)檢測

大鼠體質(zhì)量監(jiān)測，造模期間每5 d監(jiān)測體質(zhì)量1次，用藥后每周測量體質(zhì)量1次，隨時(shí)觀察動(dòng)物一般狀態(tài)及死亡情況，觀察并記錄實(shí)驗(yàn)動(dòng)物皮毛光澤度、豎毛情況、反應(yīng)靈敏度、自主活動(dòng)情況、飲食、大小便等情況。在各觀測時(shí)間點(diǎn)，取各組的大鼠分別置代謝籠，禁食、自由飲水，收集24 h尿液，考馬斯亮藍(lán)法測定24 h尿蛋白含量。留完尿液后，第2天用0.5%戊巴比妥鈉(麻醉劑量約1.5 ml/只)腹腔注射麻醉大鼠，將麻醉后大鼠固定于手術(shù)臺(tái)，用剪刀剪開腹壁，下腔靜脈取一定血樣離心后用生化分析儀檢測BUN、Cre。

3 結(jié)果

3.1 各組藥物對(duì)慢性腎衰大鼠一般情況影響

空白對(duì)照組大鼠體質(zhì)量增加，體形豐滿，眼睛有神、機(jī)警，對(duì)聲音刺激敏感，毛色光亮，反應(yīng)靈敏，活動(dòng)靈活，進(jìn)食飲水及二便均正常，墊料干燥。腺嘌呤灌胃的模型組大鼠5 d后體質(zhì)量有所下降，隨著實(shí)驗(yàn)進(jìn)程日漸消瘦，精神不振，反應(yīng)遲鈍，出現(xiàn)嗜睡、毛質(zhì)粗糙、有束發(fā)現(xiàn)象，飲食量減少，大鼠尿量增加，便稀，墊料嚴(yán)重潮濕。建中理勞湯預(yù)防組在14 d左右開始出現(xiàn)飲食減少，體質(zhì)量亦有下降，精神不振，活動(dòng)量少，反應(yīng)遲鈍，毛色干枯發(fā)黃并出現(xiàn)脫落，尿量增加，便稀，其癥狀表現(xiàn)均較模型組輕。建中理勞湯治療組給藥后大鼠狀態(tài)略有恢復(fù)，飲食稍增，尿量減少，大便變干且量較前增多，體質(zhì)量緩慢增加。

3.2 各組藥物對(duì)慢性腎衰大鼠24 h尿蛋白定量、腎功能的影響

表1顯示，空白組和模型組比較，24 h尿蛋白定量前者明顯較低(P＜0.01)，各治療組及干預(yù)組與模型組比較24 h尿蛋白定量，治療組及干預(yù)組偏低(P＜0.01)，建中理勞湯預(yù)防干預(yù)高低劑量組、建中理勞湯高低劑量組、尿毒清組24 h尿蛋白定量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

表1 各組大鼠治療后24 h尿蛋白定量、腎功能比較(±s)

表1 各組大鼠治療后24 h尿蛋白定量、腎功能比較(±s)

注:與空白組比較:＊＊P＜0.01;與模型組比較:ΔΔP＜0.01

組別 例數(shù) 24 h尿蛋白(g/L) 尿素氮(mmol/L) 肌酐(μmoI/L)空白組50.2020±0.195240 7.01±0.290 48.20±4.170模型組 5 0.8760±0.181330＊＊ 16.73±1.166＊＊ 95.80±6.730＊＊建中理勞湯預(yù)防干預(yù)高劑量組 6 0.3550±0.120210＊＊ΔΔ 12.48±1.010＊＊ΔΔ 79.00±7.581＊＊ΔΔ建中理勞湯預(yù)防干預(yù)低劑量組 5 0.3440±0.197560＊＊ΔΔ 12.63±1.641＊＊ΔΔ 72.22±4.701＊＊ΔΔ建 中 理 勞 湯 高 劑 量 組 8 0.4388±0.247350＊＊ΔΔ 11.77±1.271＊＊ΔΔ 83.20±9.951＊＊ΔΔ建 中 理 勞 湯 低 劑 量 組 8 0.4325±0.138440＊＊ΔΔ 10.59±0.651＊＊ΔΔ 70.42±3.931＊＊ΔΔ尿 毒 清 組 8 0.3950±0.313101＊＊ΔΔ 12.33±1.061＊＊ΔΔ 77.37±4.881＊＊ΔΔ

空白組和模型組比較，尿素氮、肌酐前者明顯較低(P＜0.01)，各治療組、干預(yù)組與模型組尿素氮、肌酐比較，治療組及干預(yù)組偏低(P＜0.01)，建中理勞湯預(yù)防干預(yù)高低劑量組、建中理勞湯高低劑量組、尿毒清組尿素氮、肌酐比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞ 0.05)。

4 討論

在CRF進(jìn)展過程中，往往各種病因交互影響致虛損勞傷、耗氣傷精血、陰損及陽、陽損及陰，最終導(dǎo)致陰陽兩虛。CRF雖然主要責(zé)之于腎的精氣陰陽虧虛，但脾為后天之本，與先天之本的腎緊密聯(lián)系。腎中精氣在人體出生之后必須依賴后天之精的充養(yǎng)，才能維持腎臟的正常生理功能。因此，應(yīng)注重脾腎在CRF發(fā)病過程中的相互關(guān)系，重視脾胃在CRF治療中的重要地位。對(duì)于陰陽兩虛之虛勞，正如尤在涇所說:“欲求陰陽之和者，必求于中氣，求中氣立者，必以建中也。［4］”因此我們認(rèn)為，CRF雖然病位在腎，但防治CRF亦應(yīng)從補(bǔ)腎與建補(bǔ)中氣法兩法入手。在“虛勞建中”理論指導(dǎo)下，結(jié)合前期研究成果提出慢性腎功能衰竭屬于中醫(yī)“虛勞”范疇，對(duì)其治療首先以“建補(bǔ)中氣為主，佐以補(bǔ)腎兼以化瘀泄?jié)帷薄?/p>

建中理勞湯由保元湯、當(dāng)歸補(bǔ)血湯、腎氣丸3方化裁而成。黨參、黃芪、山藥、茯苓均系味甘之品，主入脾經(jīng)，建中央以運(yùn)四旁，以資后天氣血生化之源;炙甘草補(bǔ)脾，生地黃、菟絲子補(bǔ)腎，先后天同補(bǔ);山藥、茯苓、澤瀉健脾養(yǎng)陰、利水泄?jié)?當(dāng)歸、生地黃、牡丹皮補(bǔ)腎養(yǎng)血活血。諸藥相合以建補(bǔ)中氣為主，脾腎同治，氣血陰陽并補(bǔ)，俾使先天與后天相互資生，氣血充足，陰陽平衡，并輔以化瘀泄?jié)?、補(bǔ)瀉兼施、寓瀉于補(bǔ)。

CRF患者在小便的排量上通常表現(xiàn)為少尿或無尿，而人體的代謝產(chǎn)物大部分都要經(jīng)尿液排出，一旦尿量減少、代謝產(chǎn)物蓄積，就會(huì)加重對(duì)腎功能的損害，因此尿量的多少既是CRF的臨床特征之一，又是加重腎臟負(fù)擔(dān)的重要因素［5］。本次實(shí)驗(yàn)表明，建中理勞湯預(yù)防干預(yù)組大鼠開始出現(xiàn)飲食減少、質(zhì)量下降、精神萎靡、反應(yīng)遲鈍、毛色干枯發(fā)黃、便稀等癥狀，均較模型組晚且輕。建中理勞湯治療組給藥后大鼠狀態(tài)略有恢復(fù)，飲食稍增，尿量減少，大便變干且量較前增多，體質(zhì)量緩慢增加，說明建中理勞湯能夠改善慢性腎衰的臨床癥狀和體征，可以預(yù)防慢性腎衰并延緩慢性腎衰的發(fā)生。

尿素氮和肌酐分別為含氮的有機(jī)物和蛋白質(zhì)代謝的終末產(chǎn)物，當(dāng)腎小球?yàn)V過功能減低時(shí)，血尿素氮和肌酐因潴留而增高［6］。本次實(shí)驗(yàn)表明，模型組大鼠血清尿素氮、肌酐水平與24 h尿蛋白定量和正常組比較均異常增高，各建中理勞湯預(yù)防及治療組大鼠血清尿素氮、肌酐水平均低于模型組。

總之，本研究從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)角度觀測建補(bǔ)中氣法為主的建中理勞湯對(duì)腺嘌呤致大鼠慢性腎衰模型的影響，進(jìn)一步研究和揭示建補(bǔ)中氣法為主的建中理勞湯治療慢性腎衰的主要功效和作用機(jī)理，為基于《金匱》“虛勞建中”理論的建中理勞湯治療慢性腎衰提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，利于建中理勞湯治療慢性腎衰的臨床推廣。

［1］沈會(huì)，陶漢華，張?jiān)t，等.基于金匱虛勞理論探討慢性腎衰的辨治規(guī)律［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2014，29(3):103-105.

［2］沈會(huì)，陶漢華，馬美燕，等.陶漢華治療慢性腎功能衰竭經(jīng)驗(yàn)［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2013，40(9):1783-1784.

［3］張志新，何立群.腎小管間質(zhì)纖維化動(dòng)物模型的研究進(jìn)展［J］.時(shí)珍國醫(yī)藥，2010，21(4):969-973.

［4］尤在涇.金匱要略心典［M］.上海:上?？萍汲霭嫔?，1958，9:44.

［5］黎磊石，劉志紅.中國腎臟病學(xué)［M］.北京:人民軍醫(yī)出版社，2008:1284-1287.

［6］王海燕，王梅.慢性腎臟病及透析的臨床指南［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2005:347-348.

Effects of Jianzhong Lilao Decoction on the Chronic Renal Failure Based on the Replenishing the Middle Theory in Jin Gui Yao Lue

SHEN Hui1，2，TAO Han-hua2△，ZHANG Zhao2，ZHAN Zhao-shuang2，MA Mei-yan2，ZHU Wei-kai1
(1．The First Affiliated Hospital of Dalian Medical University，Liaoning Dalian 116011，China; 2．Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Shandong Jinan 250355，China)

Objective:In reference to the existing chronic renal failure model of rat，observe impact on every index of 24 hours urine protein，urea nitrogen，creatinine in rats，mechanism of Jianzhonglilao Decoction to improve the kidney functions of chronic renal failure.Methods:Rats were randomly divided into 7 groups(blank control group，model control group，Jianzhonglilao Decoction for prevention and intervention in high dose group，Jianzhonglilao Decoction for prevention and intervention in low dose group，Jianzhonglilao Decoction in high dose group，Jianzhonglilao Decoction in low dose group，Niaoduqing group).Model was reproduced in rats with chronic renal failure induced by adenine.All groups were intragastric corresponding built in Jianzhonglilao Decoction，physiological saline，Niaoduqing，to observe the different indexes of model rats of different doses of Jianzhonglilao Decoction on renal function.Results:Jianzhonglilao Decoction can improve symptoms and signs of chronic renal failure rats caused by adenine，reduce urine protein of chronic renal failure rats of 24 hours，reduce urea nitrogen and serum creatinine in the blood of rats of chronic renal failur.There were significant differences compared with the model group.Conclusion:Jianzhonglilao Decoction can improve the disorder of metabolism in chronic renal failure rats.

Reinforcing middle-energizer;Synopsis of Golden Chamber;Jianzhonglilao Decoction;Chronic renal failure

R692.5

:B

:1006-3250(2015)09-1097-02

2015-03-25

國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81273635)-基于《金匱》“虛勞建中”理論探討建中理勞湯對(duì)慢性腎功能衰竭及TGF-β/smad通路的影響研究

沈 會(huì)(1979-)，女，貴州甕安人，副主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)博士，從事中醫(yī)的臨床、教學(xué)與科學(xué)研究。

△通訊作者:陶漢華(1951-)，男，山東萊蕪人，教授，博士研究生導(dǎo)師，從事中醫(yī)內(nèi)科雜病的辨證論治規(guī)律研究，Tel: 13698625509，E-mail:sdthh@163.com。