郗艷麗，陳航宇，李雅玲，張洋婷，葛紅娟，劉 敏 (吉林醫(yī)藥學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，吉林 吉林 132013)

齊墩果酸是一種天然產(chǎn)物化學(xué)成分，廣泛存在于青葉膽、血膽、女貞子、西洋參、連翹、柿葉、景天三七、夏枯草等植物中［1-3］。從1908 年齊墩果酸首次被分離出來(lái)以后，其新的藥用價(jià)值不斷被發(fā)現(xiàn)。目前，已經(jīng)證實(shí)齊墩果酸具有降糖、降脂、抗病毒、抗癌等多種生物學(xué)活性［4-6］。此外，齊墩果酸還被證實(shí)具有抑制自由基生成，保肝、護(hù)肝的作用。由于齊墩果酸不斷地被開(kāi)發(fā)和利用，其作用機(jī)制也不斷地被探索。齊墩果酸能抑制四氯化碳(CCl4)所致自由基生成，其作用機(jī)制與齊墩果酸本身帶有一些活潑的官能團(tuán)有關(guān)。這些官能團(tuán)可以與毒CCl4結(jié)合，起到解毒的作用［7］，且在注射CCl4之前預(yù)先皮下注射齊墩果酸有保肝作用［8］。但注射CCl4的同時(shí)給予齊墩果酸灌胃是否也能起到保肝、護(hù)肝作用則鮮有報(bào)道。本研究通過(guò)檢測(cè)齊墩果酸對(duì)小鼠臟器系數(shù)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量的影響，觀察CCl4與齊墩果酸同時(shí)給藥的方法對(duì)小鼠氧化損傷的作用，為齊墩果酸的開(kāi)發(fā)奠定試驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試劑與設(shè)備

齊墩果酸(西安文竹生物科技有限公司，用時(shí)制備成300 mg/mL 豆油溶液)，肝素鈉(天津生物化學(xué)制藥有限公司)，CCl4(天津市巴斯夫化工有限公司)，無(wú)水乙醇和氯仿(天津市永大化學(xué)試劑有限公司)。

電子分析天平(BS224S，北京賽多利斯)，分光光度計(jì)(722 型，中國(guó)廈門分析儀器廠)，離心機(jī)(TDZ5-WS，湖南湘儀離心機(jī)儀器有限公司)，冰箱(海爾)。

1.2 動(dòng)物分組

健康雄性小鼠30 只，體重(25 ～28)g，購(gòu)于長(zhǎng)春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。用普通飼料飼養(yǎng)1周后使用。隨機(jī)分為3 組:空白組(3 mL/kg 生理鹽水腹腔注射同時(shí)給予0.1 mL/100 g 豆油灌胃，隔天相同劑量豆油再灌胃一次)、模型組(3 mL/kg CCl4原液腹腔注射一次同時(shí)給予0.1 mL/100 g 豆油灌胃，隔天相同劑量的豆油再灌胃一次)，同時(shí)給藥組(3 mL/kg CCl4原液腹腔注射一次同時(shí)給予0.1 mL/100 g 齊墩果酸油溶液灌胃，隔天齊墩果酸油溶液再灌胃一次)，每組10 只。各組于末次給藥后禁食24 h，不禁水，眼球取血，制成抗凝血。同時(shí)取出臟器(心、肝、脾、肺、腎)。

1.3 臟器系數(shù)計(jì)算

每只小鼠處死前稱量活體體重，處死后立即摘取臟器，快速浸于生理鹽水中，洗去血污，用濾紙吸干水分，稱量臟器濕重，小鼠活體體重和臟器濕重均以(g)為單位。臟器系數(shù)= 臟器濕重/活體體重×100%。

1.4 全血SOD 含量檢測(cè)

取抗凝血50 μL，迅速?zèng)_入含有1 mL 生理鹽水的2 mL 具塞刻度離心管中，在漩渦混合器上混合均勻，3 000 rpm 離心10 min，棄去上清。加入4 ℃預(yù)冷的雙蒸餾水0.2 mL，使其完全溶血，再加入4 ℃預(yù)冷的乙醇-氯仿混合液0.2 mL，于漩渦混合器上混懸1 min，3 000 rpm 離心15 min。離心后的液體分為三層:上層為SOD 抽提液，中層為血紅蛋白沉淀物，下層為氯仿。吸取上層SOD 抽提液，按照鄰苯三酚法測(cè)定全血中SOD 的含量［9］。

肝組織勻漿SOD 含量檢測(cè):留取肝臟相同部位0.5 g，以1∶ 9(m/V)的生理鹽水制成組織勻漿，鄰苯三酚法檢測(cè)肝組織SOD 含量。

1.5 MDA 含量測(cè)定

血清 MDA 含量檢測(cè):將抗凝血靜止后，3 000 rpm離心10 min，吸取血清，采用硫代巴比妥鈉法測(cè)定血清中MDA 的含量，比色后利用公式求出MDA 含量［10］。

肝組織勻漿MDA 含量檢測(cè):留取肝臟相同部位0.5 g，以1∶ 9(m/V)的KCl 溶液(150 mmol/L)制成勻漿，硫代巴比妥鈉法測(cè)定肝組織MDA 含量。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。各項(xiàng)數(shù)據(jù)以(±s)表示，用單因素方差分析及t 檢驗(yàn)比較組間差異。

2 結(jié) 果

2.1 臟器系數(shù)

與對(duì)照組比較，模型組和同時(shí)給藥組肝臟臟器系數(shù)明顯升高(P ＜0.05)，腎臟臟器系數(shù)、肺臟臟器系數(shù)、脾臟臟器系數(shù)、心臟臟器系數(shù)均沒(méi)有明顯變化(P ＞0.05);與模型組比較，同時(shí)給藥組肝臟臟器系數(shù)、腎臟臟器系數(shù)、肺臟臟器系數(shù)、脾臟臟器系數(shù)、心臟臟器系數(shù)均沒(méi)有明顯改變(P ＞0.05)。

2.2 SOD 含量測(cè)定

模型組和同時(shí)給藥組全血SOD 含量較對(duì)照組明顯降低(P ＜0.05);同時(shí)給藥組全血SOD 含量與模型組相比沒(méi)有明顯差異(P ＞0.05)。模型組和同時(shí)給藥組肝組織勻漿SOD 含量較對(duì)照組明顯降低(P ＜0.05);同時(shí)給藥組肝組織勻漿SOD 含量與模型組相比沒(méi)有明顯差異(P ＞0.05)。

2.3 MDA 含量測(cè)定

模型組和同時(shí)給藥組血清MDA 含量較對(duì)照組明顯升高(P ＜0.05);同時(shí)給藥組血清MDA 含量與模型組相比沒(méi)有明顯差異(P ＞0.05)。模型組和同時(shí)給藥組肝組織勻漿MDA 含量較對(duì)照組明顯升高(P ＜0.05);同時(shí)給藥組肝組織勻漿MDA 含量與模型組相比沒(méi)有明顯差異(P ＞0.05)。

3 討 論

CCl4誘導(dǎo)肝臟發(fā)生的損傷，會(huì)在短時(shí)間內(nèi)快速的出現(xiàn)，經(jīng)一段時(shí)間的恢復(fù)，可以恢復(fù)到用藥前水平，模型具有可逆性。為了避免模型自愈，能及時(shí)觀察干預(yù)效果，本研究選擇了短期給藥的方式，觀察齊墩果酸對(duì)化學(xué)性肝損傷的影響。

齊墩果酸廣泛存在于各種藥材植物中，水果當(dāng)中(如木瓜)也含有豐富的齊墩果酸?？紤]到動(dòng)物給藥方式盡可能與人接近的原則，本研究采用灌胃的方式給予齊墩果酸。

表1 齊墩果酸對(duì)化學(xué)性肝損傷雄性小鼠臟器系數(shù)的影響(±s，n=10)

表1 齊墩果酸對(duì)化學(xué)性肝損傷雄性小鼠臟器系數(shù)的影響(±s，n=10)

與對(duì)照組比較，* P ＜0.05

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圖1 齊墩果酸對(duì)化學(xué)性肝損傷雄性小鼠SOD 含量的影響

圖2 齊墩果酸對(duì)化學(xué)性肝損傷雄性小鼠MDA 含量的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與正常對(duì)照組比較，CCl4致化學(xué)性肝損傷模型組肝臟臟器系數(shù)及各項(xiàng)生化指標(biāo)均有顯著性改變，說(shuō)明本試驗(yàn)建立的化學(xué)性肝損傷模型成功。注射CCl4的同時(shí)給予齊墩果酸，并未抑制CCl4致化學(xué)性肝損傷導(dǎo)致的肝組織和血液中SOD 含量的下降和MDA 含量的升高。說(shuō)明齊墩果酸沒(méi)能提高SOD 的活力，并及時(shí)清除產(chǎn)生的自由基，避免由自由基的大量堆積引起的氧化損傷和脂質(zhì)過(guò)氧化，在抗氧化損傷和脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程中沒(méi)能發(fā)揮作用。高濃度的CCl4有溶酶的作用，齊墩果酸需要先激活體內(nèi)的酶系統(tǒng)發(fā)揮作用。本研究表明CCl4與齊墩果酸發(fā)揮效應(yīng)的酶系統(tǒng)可能是相同的，一旦酶系統(tǒng)受損后，齊墩果酸很難在短時(shí)間內(nèi)恢復(fù)受損的酶系統(tǒng)。此外，CCl4腹腔注射以后，會(huì)快速進(jìn)入血液，引起損傷。齊墩果酸通過(guò)灌胃的途徑吸收后，需要經(jīng)過(guò)肝臟的首過(guò)消除作用，大大降低了齊墩果酸入血的量，而且延長(zhǎng)了齊墩果酸到達(dá)血液的時(shí)間，導(dǎo)致齊墩果酸發(fā)揮作用的時(shí)間可能晚于損傷的時(shí)間，影響了干預(yù)效果。綜上所述，注射CCl4的同時(shí)給予齊墩果酸灌胃的方式，不能有效抑制損傷，發(fā)揮保肝、護(hù)肝的作用。

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