莊粵蕾

(湛江中心人民醫(yī)院病理科，廣東 湛江 524037)

CCN1和Mel-18在結腸癌中的表達及其臨床病理意義

莊粵蕾

(湛江中心人民醫(yī)院病理科，廣東 湛江 524037)

目的 探討CCN1和Mel-18在結腸癌中的表達及其臨床病理意義。方法采用免疫組化法觀察56例手術切除的結腸癌組織及相應的癌旁組織中CCN1和Mel-18的表達情況，分析兩種蛋白與結腸癌臨床病理特征的關系及預后意義。結果CCN1蛋白在結腸癌組織中的表達陽性率為76.79%，明顯高于相應癌旁組織的14.29%，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，且在不同臨床分期及有無淋巴結轉移結腸癌組織中表達的陽性率比較差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；Mel-18蛋白在結腸癌組織中的表達陽性率為39.29%，明顯低于相應癌旁組織的66.07%，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，且在不同臨床分期及有無淋巴結轉移結腸癌組織中表達的陽性率比較差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；相關性分析顯示，CCN1和Mel-18蛋白在結腸癌組織中的表達呈負相關(r=-0.472，P＜0.05)。結論CCN1在結腸癌中的表達上調和Mel-18在結腸癌中的表達下調可能與結腸癌的發(fā)生有關，有可能成為新的預測結腸癌惡性程度及是否發(fā)生遠處轉移的有效分子標志物。

結腸癌；CCN1；Mel-18；

CCN1是一種生長因子誘導產(chǎn)生的富含半胱氨酸的分泌性肝素連接蛋白，Mel-18屬于多梳基因家族的重要成員，已有多項研究發(fā)現(xiàn)CCN1和Mel-18蛋白在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，但兩種蛋白在不同腫瘤中的研究結果并不一致[1-2]。本研究分別檢測了CCN1和Mel-18蛋白在結腸癌組織及相應的癌旁正常組織中的表達情況，并分析兩種蛋白蛋白的表達與結腸癌的臨床病理特征的相關性，以初步探討CCN1和Mel-18蛋白與結腸癌發(fā)生和發(fā)展的關系，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院病理科2011年6月至2013年4月手術切除的結腸癌及相應癌旁結腸黏膜組織(距癌灶邊緣≥5 cm[3])標本各56例，均經(jīng)術后病理組織學確診。所有病例術前均未行放化療治療，臨床資料齊全，均簽署知情同意書。其中男性32例，女性24例；年齡38～79歲，平均(55.82±7.73)歲。

1.2 方法 采用免疫組化二步法檢測結腸癌及相應癌旁正常組織中CCN1、Mel-18的表達情況。鼠抗人多克隆抗體CCN1、兔抗人多克隆抗體Mel-18和免疫組織化學試劑盒均購自北京博奧森生物有限公司。使用時CCN1抗體按1:200稀釋，Mel-18抗體按1:100稀釋，DAB顯色，蘇木素輕度復染，鹽酸酒精固定，梯度酒精脫水，透明封片，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行，光鏡下觀察并攝片。采用已知陽性標本切片作陽性對照，并采用PBS代替一抗作陰性對照。

1.3 結果判定[4]所有標本切片均在雙盲條件下觀察，并根據(jù)陽性細胞計數(shù)及著色強弱判定表達結果。選取5個高倍鏡視野，根據(jù)陽性細胞率和著色強弱綜合判斷。陽性細胞率：0%為0分，1%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～70%為3分，71%～100%為4分。著色強弱：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分。兩項得分相乘：0～4分為陰性(-)表達，≥5分為陽性(+)表達。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理，計量資料以均數(shù)±標準差(x-±s)表示，計量資料比較采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，結腸癌組織中CCN1、Mel-18蛋白表達間的相關性檢驗采用Spearman相關分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 結腸癌及相應癌旁組織中CCN1和Mel-18的表達 CCN1陽性染色呈棕黃色或棕褐色顆粒狀，定位于細胞漿，Mel-18陽性染色呈黃色顆粒狀，定位于細胞核，見圖1。CCN1蛋白在結腸癌組織中的陽性表達率明顯高于相應癌旁正常組織，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；Mel-18蛋白在結腸癌組織中的陽性表達率明顯低于相應癌旁正常組織，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表1。

圖1 CCN1和Mel-18在結腸癌組織及相應癌旁組織中的表達

表1 CCN1和Mel-18蛋白在結腸癌及相應癌旁正常組織中陽性表達率的比較[例(%)]

2.2 CCN1和Mel-18蛋白與結腸癌臨床病理特征的關系 CCN1和Mel-18蛋白在結腸癌組織中的表達與患者的性別、年齡、腫瘤大小、分化程度無關(P＞0.05)。CCN1蛋白在不同臨床分期結腸癌組織中的陽性表達率比較差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，以Ⅲ、Ⅳ期最高，其次為Ⅱ期，最低為Ⅰ期；CCN1蛋白在有淋巴結轉移結腸癌組織中的陽性表達率明顯高于無淋巴結轉移結腸癌組織(P＜0.05)；Mel-18蛋白在不同臨床分期結腸癌組織中的陽性表達率比較差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，以I期最高，其次為Ⅱ期，最低為Ⅲ、IV期；CCN1蛋白在有淋巴結轉移結腸癌組織中的陽性表達率明顯低于無淋巴結轉移結腸癌組織(P＜0.05)，見表2。

表2 CCN1和Mel-18蛋白的表達與結腸癌臨床病理特征的關系

2.3 CCN1和Mel-18蛋白在結腸癌組織中表達的相關性 結腸癌組織中CCN1和Mel-18蛋白雙陽性表達率為17.86%(10/56)，雙陰性率為1.79%(1/56)，可見CCN1和Mel-18蛋白在結腸癌組織中的表達水平呈負相關(r=-0.472，P=0.008)，見表3。

表3 CCN1和Mel-18蛋白在結腸癌組織中表達的相關性(例)

3 討論

結腸癌是我國常見惡性腫瘤之一，近年來由于人們飲食習慣、生活方式發(fā)生變化，以及環(huán)境、基因突變等因素，結腸癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，且具有年輕化趨勢[5]。結腸癌的發(fā)生、發(fā)展是一個復雜的多階段過程，癌基因激活、抑癌基因失活及腫瘤血管生成是其發(fā)生、發(fā)展的基礎。

CCN1是結締組織生長因子(CCN)家族成員之一[6]，近年來多項研究發(fā)現(xiàn)CCN1在腫瘤微血管形成及腫瘤細胞增殖、粘附、擴散轉移、耐藥性產(chǎn)生等過程中起重要作用[7]。國內外大量研究[8-10]顯示，CCN1的功能具有顯著的組織特異性，其在不同組織來源的腫瘤中的表達水平及功能差異較大。在乳腺癌、胃癌、食管癌、前列腺癌等腫瘤組織中CCN1表達水平明顯升高，在功能上可增強腫瘤細胞增殖、遷徙能力；而在非小細胞癌、子宮內膜癌、宮頸癌等組織中CCN1表達水平明顯下降，在功能上起抑癌基因的作用，低表達可引發(fā)腫瘤形成和發(fā)展。本研究結果顯示，CCN1在結腸癌組織中的陽性表達率明顯高于相應的癌旁組織，且隨著結腸癌臨床分期進展和淋巴結轉移，CCN1陽性表達率明顯升高，提示CCN1參與了結腸癌的發(fā)生，且在結腸癌的發(fā)展中起促進腫瘤細胞增殖、遷徙作用。

Mel-18屬于多梳基因家族成員[11]，有研究報道[12]Mel-18在乳腺癌、胃癌、前列腺癌等腫瘤組織中表達強度降低，外源性Mel-18過表達可導致腫瘤細胞生長和增殖速度減慢，提示Mel-18在腫瘤進展過程中起抑制作用。Mel-18抑制腫瘤進展的機制可能是：抑制cyclin D2活性，導致其與CDK復合物結合受阻，阻滯腫瘤細胞由G1期轉化至S期；抑制c-myc/cdc25通路，進而抑制cyclin-CDK復合物的活性；通過與具有癌基因作用的Hox基因結合，從而抑制其活性[13-14]。本研究顯示Mel-18在結腸癌組織中的陽性表達率明顯低于相應的癌旁組織，且隨著結腸癌臨床分期進展和淋巴結轉移，Mel-18陽性表達率明顯降低，提示Mel-18的異常表達與結腸癌的發(fā)生發(fā)生有關，其在結腸癌中可能起抑癌基因的作用，在結腸癌的發(fā)生和發(fā)展過程中起抑制作用。

本研究發(fā)現(xiàn)CCN1和Mel-18在結腸癌組織中的表達呈顯著負相關，CCN1在結腸癌中的表達上調，而Mel-18表達下調，進一步提示CCN1在結腸癌發(fā)生發(fā)展過程中起癌基因的作用，促進結腸癌的發(fā)生發(fā)展，而Mel-18起抑癌基因的作用，抑制結腸癌的發(fā)生發(fā)展。本研究結果證實CCN1在結腸癌中的表達上調和Mel-18在結腸癌中的表達下調可能與結腸癌的發(fā)生有關，有可能成為新的預測結腸癌惡性程度及是否發(fā)生遠處轉移的有效分子標志物，其作用機制有待進一步深入研究。

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Expression and clinical significance of CCN1 and Mel-18 in colon cancer.

ZHUANG Yue-lei.Department of Pathology,Zhanjiang People's Central Hospital,Zhanjiang 524037,Guangdong,CHINA

Objective To discuss the expression and clinical significance of CCN1 and Mel-18 in colon cancer.MethodsFifty-six cases of colon cancer tissues and their matched pericarcinous tissues were respectively detected by immunohistochemical technique,to analyze the relationship of the expression of CCN1 and Mel-18 protein with the clinical pathological features.ResultsThe positive rate of CCN1 expression in colon cancer tissues (76.76%)was significantly higher than that of pericarcinous tissue(14.29%,P＜0.05),and there were no significant difference of CCN1 positive expression between different clinical stages and lymph node metastasis(P＜0.05).The positive rate of Mel-18 expression in colon cancer tissues(39.29%)was significantly lower than that of pericarcinous tissue(66.07%,P＜0.05),and there were no significant difference of Mel-18 positive expression between different clinical stages and lymph node metastasis(P＜0.05).There was a negative correlation between the expression of CCN1 and Mel-18 in colon cancer tissues(r=-0.472,P＜0.05).ConclusionThe up-regulated CCN1 expression and down-regulated Mel-18 expresson may be closely related with the occurrence of colon cancer,as a possible effective molecular markers to forecast the malignant degree and distant metastasis of colon cancer.

Colon cancer;CCN1;Mel-18

R735.3+5

A

1003—6350（2015）14—2153—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.14.0777

2014-12-08)

莊粵蕾。E-mail：785553163@qq.com