鄭金龍++李秋潔+易克賢++習(xí)金根++高建明　張世清++陳河龍++賀春萍+吳偉懷++劉巧蓮

摘 要 采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定9種殺菌劑對(duì)膠孢炭疽菌的室內(nèi)毒力。結(jié)果表明：咪鮮胺、丙環(huán)唑、抑霉唑和苯醚甲環(huán)唑4種藥劑對(duì)柱花草炭疽病菌株CH008的抑菌效果最好，其EC50值在0.032 3～0.735 2 μg/mL，成為最具潛力的替代使用殺菌劑；戊唑醇和吡唑醚菌酯的抑菌效果也較好，其EC50值在1.381 3～3.208 8 μg/mL。

關(guān)鍵詞 柱花草 ；膠孢炭疽菌 ；室內(nèi)毒力測(cè)定

分類號(hào) S541.9

柱花草（Stylosanthes spp.）又名筆花豆（penciflower），天然分布在中南美洲、熱帶北美洲、非洲及東南亞[1]，是全球熱帶地區(qū)栽培面積最大應(yīng)用最廣泛的優(yōu)良豆科牧草，具有很大的發(fā)展?jié)摿2]。

柱花草炭疽?。⊿tylo anthracnose）是目前嚴(yán)重影響柱花草生產(chǎn)和推廣的最主要病害，該病主要由半知菌類刺盤孢屬的膠孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides引起，有時(shí)亦可由該屬的平頭刺盤孢C.truncatum和菜豆刺盤孢C. lindemuthianum引起[3]。我國(guó)1962年從馬來(lái)西亞引入柱花草[4]。20世紀(jì)70 年代以來(lái)，由于受到柱花草炭疽病的危害，柱花草產(chǎn)量受到嚴(yán)重影響[5]。

藥劑防治是除種植抗病品種以外，防治該病最主要的措施之一，曾有研究報(bào)道用苯來(lái)特等殺菌劑對(duì)其進(jìn)行防治，取得了較好的效果[6]。馮淑芬等[7-8]用9種殺菌劑對(duì)柱花草炭疽病進(jìn)行室內(nèi)、小區(qū)及大田藥劑篩選試驗(yàn)，結(jié)果表明多菌靈的防效比苯來(lái)特提高2%，可獲得滿意的防治效果，產(chǎn)量增加36%～60.8%。梁英彩等[9]用7種藥劑對(duì)柱花草炭疽病進(jìn)行室內(nèi)藥效和盆栽防治試驗(yàn)，結(jié)果表明25%多菌靈、40%滅病威、70%甲基托布津和34%林病威對(duì)柱花草炭疽病有較好的防治效果，可用于田間防治。張偉麗等[10]用3 種不同殺菌劑進(jìn)行了柱花草炭疽病的室內(nèi)及盆栽藥劑篩選試驗(yàn)，結(jié)果表明進(jìn)口百菌清、杜邦克露和澳美加對(duì)炭疽菌菌落和分生孢子都有抑制作用。

近年來(lái)隨著殺菌劑研發(fā)工作的進(jìn)展，市場(chǎng)出現(xiàn)了許多新殺菌劑。因此，本研究用9種較新的殺菌劑對(duì)膠孢炭疽病菌進(jìn)行了室內(nèi)毒性測(cè)定，分析不同藥劑對(duì)菌株菌落生長(zhǎng)的影響，旨在了解這些藥劑對(duì)病菌的生物活性，從而為生產(chǎn)上防治柱花草炭疽病時(shí)提供一定的試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來(lái)源

柱花草炭疽病菌菌株CH008采自海南省東方市，由中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護(hù)研究所在執(zhí)行國(guó)家基金資助項(xiàng)目——柱花草炭疽病病原遺傳多態(tài)性和流行學(xué)研究（30160059）期間采集，經(jīng)單孢分離、鑒定與保存獲得的強(qiáng)致病力菌株。

1.1.2 供試培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基參照鄭金龍等[11]的方法配制。

1.1.3 供試殺菌劑及濃度

采用生長(zhǎng)速率法先進(jìn)行初步的濃度篩選，在預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，確定各藥劑的最低抑制質(zhì)量濃度，以此為依據(jù)配制5個(gè)質(zhì)量濃度梯度的含毒PDA培養(yǎng)基平板。殺菌劑種類、廠家及供試濃度范圍見(jiàn)表1。

1.2 方法

參考賀春萍等[12]的方法，將各供試藥劑在無(wú)菌操作臺(tái)上用無(wú)菌水配制成含有效成分為5 000 mg/L的母液，后用無(wú)菌水稀釋配制成5個(gè)不同供試濃度梯度的藥液。用移液槍分別取2 mL藥液與98 mLPDA培養(yǎng)基（滅菌后PDA培養(yǎng)基融化的溫度在50℃左右）混勻后制成系列含藥平板，以加入等體積無(wú)菌水做空白對(duì)照，待培養(yǎng)基冷卻凝固后備用，每個(gè)處理設(shè)5次重復(fù)。

將保存于斜面的供試柱花草炭疽病病原菌菌株接種于PDA平板上，培養(yǎng)3 d后，用滅菌打孔器打取5 mm直徑的菌落邊緣菌餅，接于含藥PDA平板中央（菌塊菌絲面朝下），置于28℃的生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)72 h后，待對(duì)照組菌落直徑長(zhǎng)至培養(yǎng)皿直徑2/3時(shí)采用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，計(jì)算菌落直徑平均值和菌絲生長(zhǎng)抑制率。

將抑制率換算成機(jī)率值，藥劑濃度換算成濃度對(duì)數(shù)，以設(shè)定的藥劑濃度的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，以抑制機(jī)率值為縱坐標(biāo)，應(yīng)用Excel軟件求出各單劑毒力回歸方程、EC50、EC75、相關(guān)系數(shù)及斜率值。

生長(zhǎng)抑制率%={[（對(duì)照菌落直徑-0.5）-（處理菌落直徑-0.5）]/（對(duì)照菌落直徑-0.5）}×100

2 結(jié)果與分析

2.1 殺菌劑對(duì)柱花草炭疽病病原菌EC50值的比較分析

9種供試殺菌劑對(duì)柱花草炭疽病菌株CH008的菌絲生長(zhǎng)強(qiáng)弱與藥劑濃度均呈正相關(guān)，各藥劑的EC50值見(jiàn)表2。由表2可知：咪鮮胺、丙環(huán)唑、抑霉唑和苯醚甲環(huán)唑等4種藥劑對(duì)柱花草炭疽病菌株CH008的菌絲生長(zhǎng)具有顯著抑制作用，其EC50值均小于1 μg/mL，分別為0.032 3、0.559 9、0.735 2 和0.369 0 μg/mL；戊唑醇和吡唑醚菌酯具有較強(qiáng)的抑制作用，其EC50值在1～10 μg/mL，分別為1.381 3 和3.208 8 μg/mL；百菌清的抑制作用較弱，其EC50值為21.235 7 μg/mL；醚菌酯和三唑酮的抑制作用最差，其EC50值分別為103.000 7和285.219 8 μg/mL。由此表明，9種供試殺菌劑對(duì)柱花草炭疽病菌的毒力存在明顯差異，其中咪鮮胺的抑菌效果最好，其次為苯醚甲環(huán)唑。

2.2 殺菌劑對(duì)柱花草炭疽病病原菌EC75值的比較分析

由表2可知，9種供試藥劑可分為4類，第一類為咪鮮胺，EC75值最小，為0.086 9 μg/mL，小于1 μg/mL，其抑菌效果最好；第二類包括丙環(huán)唑、戊唑醇、抑霉唑和苯醚甲環(huán)唑，EC75值在1～10 μg/mL，分別為1.848 8、5.959 4 、1.889 4和3.298 6 μg/mL，抑菌效果較好。第三類為吡唑醚菌酯，EC75值為85.5750 μg/mL，在10～100 μg/mL，抑菌效果較差。第四類包括醚菌酯、三唑酮和百菌清，EC75值分別為43 386.038 8 、926.205 0和130.216 5 μg/mL，均大于100 μg/mL，說(shuō)明這類藥劑對(duì)柱花草炭疽病菌基本沒(méi)有抑菌效果。

2.3 柱花草炭疽病菌對(duì)殺菌劑的敏感性分析

毒力回歸曲線的斜率與病原菌對(duì)殺菌劑的敏感性成正比。從表2可看出，柱花草炭疽病菌菌株的斜率范圍在0.257 0～1.645 5，其中醚菌酯、吡唑醚菌酯、百菌清和苯醚甲環(huán)唑這4種藥劑對(duì)柱花草炭疽病菌菌株的斜率值較小，分別為0.257 0、0.473 0、0.856 4和0.709 0，而其余5種藥劑的斜率值均大于1，表明柱花草炭疽病菌對(duì)醚菌酯、吡唑醚菌酯、百菌清和苯醚甲環(huán)唑的劑量反應(yīng)變化不如其余5種殺菌劑敏感，抑霉唑的斜率值最高，表明在供試的殺菌劑中，柱花草炭疽病菌對(duì)抑霉唑最敏感，其次為咪鮮胺、丙環(huán)唑和三唑酮；9種藥劑斜率值存在的最大差異（最高斜率值/最低斜率值）范圍在1.050 7～6.402 7。

3 討論

隨著人們對(duì)環(huán)境保護(hù)意思的增強(qiáng)，實(shí)施綜合防治是一項(xiàng)既環(huán)保，又符合可持續(xù)防控理念的有效措施，而低毒高效的化學(xué)防治則是綜合防治中的一項(xiàng)重要措施。本研究室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果表明：9種供試殺菌劑對(duì)柱花草炭疽病菌均有一定的抑制作用，但其毒力存在明顯差異。其中抑菌效果最好的是咪鮮胺，其EC50值最小，為0.0869 μg/mL，成為最具潛力的使用藥劑，這與李敏等[13]研究殺菌劑對(duì)番木瓜膠孢炭疽菌的室內(nèi)毒力測(cè)定的結(jié)果相一致；丙環(huán)唑、戊唑醇、抑霉唑和苯醚甲環(huán)唑的EC50值在1～10 μg/mL，抑菌效果也較好；建議以上藥劑可以在生產(chǎn)上輪換施用，避免產(chǎn)生抗藥性。而吡唑醚菌酯的EC50值為85.5750 μg/mL，抑菌效果較差；抑菌效果最差的是醚菌酯、三唑酮和百菌清，其EC50值均大于100 μg/mL。

本研究發(fā)現(xiàn)，丙環(huán)唑、戊唑醇和三唑酮同屬三唑類殺菌劑，但它們的EC50差異較大，其中丙環(huán)唑和戊唑醇的EC50分別為0.559 9和1.381 3，對(duì)柱花草炭疽病菌有很強(qiáng)的抑菌效果，而三唑酮的EC50為285.219 8，對(duì)柱花草炭疽病菌抑菌效果極差，這可能是因?yàn)樯a(chǎn)上長(zhǎng)期使用三唑酮防治柱花草炭疽病導(dǎo)致病原菌產(chǎn)生抗藥性的原因。

室內(nèi)藥劑篩選的結(jié)果雖可以看出藥劑對(duì)菌絲具有抑制作用，但由于受很多因素的影響，如并未涉及到藥劑對(duì)該菌的萌發(fā)、附著胞的形成和作物的生長(zhǎng)等方面的影響以及藥劑本身的附著能力、殺菌劑的內(nèi)吸性能對(duì)田間藥效的影響等，因此本試驗(yàn)的研究結(jié)果還有待在大田試驗(yàn)中進(jìn)一步驗(yàn)證。

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