菅夏楠，鄭朝暉，于若寒，劉升云，劉章鎖

(鄭州大學第一附屬醫(yī)院風濕免疫科，鄭州 450000)

晚期糖基化終產(chǎn)物受體(receptor for advanced glycation end-products，RAGE)屬于免疫球蛋白超家族成員之一，參與多種先天性免疫反應。膜結(jié)合形式RAGE結(jié)構(gòu)包含3個區(qū)域：1個細胞外區(qū)域(由1個Ⅴ型免疫球蛋白樣區(qū)域和2個C型免疫球蛋白樣區(qū)域構(gòu)成)、1個短跨膜區(qū)域和1個C端細胞內(nèi)胞質(zhì)尾區(qū)[1]。其中，Ⅴ型免疫球蛋白樣區(qū)域介導配體結(jié)合，而胞質(zhì)尾區(qū)則負責細胞內(nèi)信號傳導[2]。RAGE能與多種配體結(jié)合，如晚期糖基化終產(chǎn)物、S100/鈣粒蛋白家族、高遷移率族蛋白-1等[3-5]，激活多種信號傳導通路，增強下游效應因子核轉(zhuǎn)錄因子Kappa B(nuclear factor Kappa B，NF-κB)的核轉(zhuǎn)移、提高腫瘤壞死因子α和白細胞介素6的表達；這些細胞因子能夠引發(fā)組織炎性反應，參與自身免疫疾病，如類風濕關(guān)節(jié)炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)的發(fā)病[6-8]?？扇苄訰AGE(soluble receptor for advanced glycation end-products，sRAGE)含有和RAGE相同的細胞外配體結(jié)合區(qū)域，但缺乏跨膜區(qū)域和胞質(zhì)尾區(qū)。因此，只具有配體結(jié)合功能，而不具有細胞內(nèi)信號傳導功能。sRAGE可競爭性抑制配體與膜結(jié)合形式RAGE結(jié)合，從而減弱由NF-κB活化引發(fā)的炎性反應[7， 9]，因此又被稱為“誘餌”受體。

SLE為高度異質(zhì)性自身免疫性疾病，以血清中出現(xiàn)多種自身抗體和多系統(tǒng)受累為主要臨床特征，臨床上通常使用SLE疾病活動指數(shù)(SLE diseases activity index，SLEDAI)進行疾病活動度評價。SLEDAI由一系列系統(tǒng)器官的表現(xiàn)組成，臨床診斷時需根據(jù)既往10 d內(nèi)患者是否出現(xiàn)不同系統(tǒng)臨床表現(xiàn)進行判斷并計分，以總分為最終得分。一般認為，SLEDAI≥10分為中等-高度疾病活動期，SLEDAI<10分為低疾病活動-緩解期，臨床醫(yī)師往往根據(jù)該得分制定治療方案。然而，該評分系統(tǒng)并不完美，其缺點首先體現(xiàn)為不具有器官特異性，其次為不能進行分層；僅當器官表現(xiàn)消失時，該積分才能下降，而器官癥狀的改善并不能改變積分。因此，SLEDAI對療效評估的敏感性較差，且不能全面評價疾病活動程度。

sRAGE是新近發(fā)現(xiàn)的可能與SLE疾病活動度相關(guān)的一種大分子。據(jù)報道，血清sRAGE濃度在疾病狀態(tài)時可減少近150%[10-14]。研究證明，血清sRAGE濃度下降和SLE發(fā)病機制及疾病嚴重程度相關(guān)；但也有研究提示SLE患者血清sRAGE濃度升高[15]。本研究旨在探索血清sRAGE濃度和SLE疾病活動度及相關(guān)臨床指標的相關(guān)性，判斷sRAGE是否能成為評價SLE疾病活動度的可靠指標，以期為制定個體化治療方案提供依據(jù)。

對象和方法

對象和分組

收集2013年6月至2014年6月就診于鄭州大學第一附屬醫(yī)院風濕免疫科和腎病科的SLE患者，所有患者均符合美國風濕病學會制定的SLE診斷標準[16]。根據(jù)SLEDAI評分將SLE患者分為活動SLE組(≥10分)和非活動SLE組(<10分)。健康對照組受試者來自同期本院體檢中心志愿者。

血清sRAGE濃度測定

應用酶聯(lián)免疫吸附試驗測定血清sRAGE濃度。使用EDTA或肝素為抗凝劑收取血清標本，收集后15 min內(nèi)以1000轉(zhuǎn)速離心30 min，立刻分析或儲存于-80℃?zhèn)溆?。使用人類RAGE免疫測定酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑盒(R&D Systems， Minneapolis， MN， USA)測定血清sRAGE濃度，在試劑孔中使用單克隆抗體孵育血清標本。sRAGE最低檢測濃度規(guī)定為4.12 pg/ml。于100 μl的稀釋液RD1- 60中加入試劑孔，使用移液器加入50 μl標準品、研究對象樣本，室溫孵育2 h。沖洗未結(jié)合物質(zhì)后，在試劑孔中加入結(jié)合人類RAGE(細胞外區(qū)域)酶聯(lián)多克隆抗體。沖洗任何未結(jié)合抗體-酶試劑，加入終止液、染色，顏色深淺與初始結(jié)合RAGE劑量成正比，終止染色并進行測量。

實驗室指標

血常規(guī)、肝腎功能、尿蛋白、抗核抗體、抗雙鏈DNA(double-stranded DNA，dsDNA)抗體和其他自身免疫相關(guān)參數(shù)等指標。

統(tǒng)計學分析

使用SPSS17.0進行統(tǒng)計分析，采用t檢驗分析上述數(shù)據(jù)，采用Logistic回歸分析進行臨床指標與血清sRAGE濃度相關(guān)性的判斷。所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差表示，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié)　　果

一般資料

SLE組共納入104例SLE患者，其中女91例，男13例，年齡為13～75歲。非活動SLE組56例，活動SLE組48例。健康對照組20例，男3例，女17例，年齡25～63歲。健康對照組和SLE組年齡、性別、種族均相匹配。

sRAGE濃度比較

SLE組、非活動SLE組、活動SLE組和健康對照組sRAGE濃度分別為(1 060.16±762.59)、(912.06±759.98)、(1 232.96±736.16)、(1 300.42±466.01) pg/ml。SLE組與健康對照組sRAGE濃度差異有統(tǒng)計學意義(Z=-2.891，P=0.004)，非活動SLE組、活動SLE組與健康對照組sRAGE濃度差異有統(tǒng)計學意義(χ2=17.999，P=0.000)。

LSD檢驗法組間比較發(fā)現(xiàn)，活動SLE組血清sRAGE濃度較非活動SLE組升高，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.024)；健康對照者組血清sRAGE濃度較非活動SLE組升高，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.038)；健康對照組和活動SLE組血清sRAGE濃度差異無統(tǒng)計學意義(P=0.722)。

血清sRAGE濃度在SLEDAI是否≥10(Z=-3.052，P=0.002)、抗ds-DNA抗體滴度是否≥100(Z=-2.276，P=0.023)及有無腎損害(Z=-2.036，P=0.042)間差異具有統(tǒng)計學意義；而在是否接受過抗狼瘡治療(Z=-1.451，P=0.147)和有無合并感染(Z=-1.202，P=0.229)間差異無統(tǒng)計學意義。

相關(guān)性分析

血清sRAGE濃度與SLEDAI(r=0.373，P=0.000)、抗ds-DNA抗體(r=0.268，P=0.008)、24 h尿總蛋白定量(r=0.387，P=0.001)呈正相關(guān)；與補體C3(r=-0.371，P=0.000)、補體C4(r=-0.280，P=0.004)、白細胞計數(shù)(r=-0.238，P=0.020)呈負相關(guān)；而與紅細胞沉降率(r=0.103，P=0.308)、C反應蛋白水平(r=0.018，P=0.857)、腎臟病理活動指數(shù)(r=0.229，P=0.319)、腎臟病理慢性指數(shù)(r=0.121，P=0.600)無關(guān)(圖1)。

討　　論

本研究發(fā)現(xiàn)，SLE患者血清sRAGE濃度比健康對照者低，其在活動SLE患者、非活動SLE患者及健康對照者中總體分布不全相同；組間比較發(fā)現(xiàn)，活動SLE患者和健康對照者血清sRAGE濃度均比非活動SLE患者高，但健康對照者和活動SLE患者血清sRAGE濃度無明顯差異。血清sRAGE濃度降低可見于冠狀動脈疾病[10]、類風濕關(guān)節(jié)炎[11]、阿爾茲海默癥[12]和原發(fā)性高血壓[13]等，提示血清sRAGE濃度降低可能是由于其本身的保護作用特點及炎性狀態(tài)消耗造成。Renard等[17]認為，脾臟和/或肝臟可將sRAGE-配體復合物從血液中清除。已經(jīng)證實，RAGE的重要配體——高遷移率族蛋白B1(high mobility group box-1，HMGB1)濃度在SLE患者中增加[18-19]，sRAGE能與其結(jié)合形成復合物并引起自身消耗。Zong等[20]認為，sRAGE可能不僅作為RAGE的一種“誘餌”受體發(fā)揮抑制作用，它也可能以一種更直接的方式即與細胞表面RAGE結(jié)合阻斷RAGE二聚體形成，從而阻斷信號傳導。因此，sRAGE濃度降低可能導致RAGE介導的促炎信號加強[21]，提示RAGE在SLE發(fā)病機制中具有重要作用。然而，也有研究表明，SLE患者血清sRAGE濃度比健康對照者更高；與非活動SLE患者相比，血清sRAGE濃度在活動SLE患者中顯著升高[15]。造成這種差異的原因可能是藥物影響，也可能因為其低樣本量所導致(僅含10例SLE患者)。

圖1　血清sRAGE與臨床指標相關(guān)性分析Fig 1　Relation analysis of sRAGE and clinical levels　　　sRAGE：可溶性晚期糖基化終產(chǎn)物受體

本研究發(fā)現(xiàn)，血清sRAGE濃度與SLEDAI、抗ds-DNA抗體滴度、24 h尿總蛋白定量具有正相關(guān)性，與補體C3、補體C4、白細胞計數(shù)具有負相關(guān)性，而紅細胞沉降率、C反應蛋白、腎臟病理活動指數(shù)和腎臟病理慢性指數(shù)無相關(guān)性。本研究也分析了是否接受抗狼瘡治療對血清sRAGE濃度的影響，但并未發(fā)現(xiàn)差異有統(tǒng)計學意義(P=0.147)；但沒為進一步分析不同治療方案和治療時間對血清sRAGE濃度的影響。既往研究表明，不同疾病患者血清sRAGE濃度受不同治療方案影響[22-24]。如Pullerits等[11]報道，與未接受改變病情抗風濕藥物治療的類風濕關(guān)節(jié)炎患者相比，使用甲氨蝶呤者關(guān)節(jié)腔滑液sRAGE濃度顯著增高；但兩組患者血清sRAGE濃度差異無統(tǒng)計學意義。Ma等[25]表示，抗狼瘡治療時間長短對血清sRAGE濃度能夠產(chǎn)生影響，與未接受過治療者和健康對照者相比，接受短期(<1個月)抗狼瘡治療的SLE患者血清sRAGE濃度低；而與接受長期(>1個月)治療患者相比，其血清sRAGE濃度增高；該研究人員推測，sRAGE可能在疾病不同階段發(fā)揮著不同作用。

本研究結(jié)果顯示，SLEDAI≥10的SLE患者血清sRAGE濃度較SLEDAI<10者升高，且血清sRAGE濃度和SLEDAI具有正相關(guān)性；表明血清sRAGE濃度隨著疾病活動程度的增加而升高，這符合研究時選取該指標評價疾病活動程度的要求。因此，sRAGE能夠評價即時疾病活動度，且操作簡便、靈敏性高，在某種程度上優(yōu)于SLEDAI評分系統(tǒng)，可以成為評價SLE疾病活動度的一項新指標。根據(jù)sRAGE濃度可快速評價患者即時病情，為制定個體化治療方案提供依據(jù)。然而，使用血清sRAGE濃度評價SLE疾病活動度仍存在一定的局限性。血清sRAGE濃度易受多種因素影響，如高血糖、高血壓[13]、合并感染及動脈粥樣硬化[10]等疾病時，血清sRAGE濃度并不能純粹反應狼瘡疾病活動度。因此，如何客觀判斷血清sRAGE濃度對狼瘡疾病活動度的評價價值還需深層次大樣本的研究來闡述。

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