反相液相色譜(RPLC)是當(dāng)前色譜分離中應(yīng)用最為廣泛的色譜模式,依靠疏水固定相與溶質(zhì)之間的疏水相互作用實(shí)現(xiàn)弱極性和中等極性化合物的高效分離。但是,RPLC 對極性化合物(如寡糖、強(qiáng)極性寡肽、藥物等)的保留很弱,甚至不保留。反相離子對色譜(RPIC)、離子交換色譜(IEC)和正相色譜(NPLC)等可以作為RPLC 的補(bǔ)充,用于極性化合物的分離。然而,它們又各自存在一定的局限性,不能滿足當(dāng)前復(fù)雜樣品的分離和表征需求。
親水作用色譜(hydrophilic interaction liquid chromatography,HILIC)作為一種分離極性化合物的液相色譜模式,其概念最早由Alpert 于1990 年提出。HILIC 的主要特征是使用類似于NPLC 的極性固定相和水/有機(jī)溶劑(通常是乙腈)作為流動相,其中水是強(qiáng)洗脫溶劑。與NPLC 類似,在HILIC 模式下化合物的保留時(shí)間隨其極性增強(qiáng)而增加。HILIC越來越受到關(guān)注和重視,一方面是因?yàn)閺?qiáng)極性化合物的分離問題引起了各個(gè)研究領(lǐng)域的重視,包括藥物分析、食品分析及蛋白質(zhì)組學(xué)等領(lǐng)域都不同程度地涉及極性化合物的分離問題;另一方面是由于HILIC 具有其自身的優(yōu)勢。首先,HILIC 模式對強(qiáng)極性和親水性化合物具有很好的保留和分離選擇性,是解決各類強(qiáng)極性和親水性化合物分離問題的可靠手段。其次,HILIC 模式使用的流動相體系相對簡單,操作方便,而且克服了NPLC 的流動相溶解性差、保留時(shí)間對流動相中水含量十分敏感以及質(zhì)譜兼容性差等問題。此外,HILIC的分離機(jī)理與RPLC 完全不同,兩者的分離選擇性有很好的正交性,適合用于構(gòu)建HILIC-RPLC 二維色譜系統(tǒng),是解決復(fù)雜樣品分離問題的有效手段之一。近十年來,HILIC分離材料、分離原理和分離方法開發(fā)等領(lǐng)域均取得了巨大進(jìn)展,在食品、藥品、天然產(chǎn)物、蛋白質(zhì)組以及代謝組學(xué)等分離分析中的應(yīng)用日益廣泛和成熟。
為了展示我國科研、檢驗(yàn)檢測人員在HILIC 基礎(chǔ)研究和應(yīng)用方面的成果,受《色譜》編輯部委托,特組織撰寫“親水作用色譜”專欄,集中報(bào)道HILIC 的基礎(chǔ)研究和應(yīng)用工作。專欄文章的作者既有高校和研究單位的科研人員,也有檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)的技術(shù)專家,還有色譜儀器公司的應(yīng)用技術(shù)人員。專欄文章中包含新型HILIC 分離材料研究、流動相條件優(yōu)化和機(jī)理考察、藥物分子在HILIC 上的保留規(guī)律和原理、HILIC 應(yīng)用于食品添加劑檢測以及藥物雜質(zhì)分析等。希望本專欄文章所呈現(xiàn)的內(nèi)容能讓讀者受益,給讀者以研究方面的啟迪和應(yīng)用方面的幫助,提高我國色譜研究和應(yīng)用水平。由于時(shí)間倉促,組織能力和范圍有限,不可能涵蓋我國全部的HILIC 研究優(yōu)勢單位和優(yōu)秀工作,有不足和考慮不周之處,敬請讀者批評指正。