孟 婷 楊蓮芳 雷 琨 李富賢 石會(huì)麗

武警陜西總隊(duì)醫(yī)院(西安 710054)

接骨竭七活血貼的薄層鑒別研究

孟 婷 楊蓮芳△雷 琨△李富賢△石會(huì)麗△

武警陜西總隊(duì)醫(yī)院(西安 710054)

目的：建立接骨竭七活血貼中龍血竭、延胡索、當(dāng)歸、冰片與薄荷腦、乳香與沒(méi)藥的薄層色譜(TLC)鑒別方法。方法：采用TLC法，考察供試品前處理工藝及其TLC展開劑的種類和配比條件，對(duì)龍血竭、延胡索、當(dāng)歸、冰片與薄荷腦、乳香與沒(méi)藥等進(jìn)行定性鑒別。結(jié)果：接骨竭七活血貼與陽(yáng)性對(duì)照藥材在相應(yīng)位置顯相同斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照品則各項(xiàng)TLC鑒別均不受方中其他成分的干擾。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)單，檢出結(jié)果可靠，重現(xiàn)性好，可作為接骨竭七活血貼的質(zhì)量控制。

接骨竭七活血貼是陜西省中醫(yī)醫(yī)院自主研發(fā)的院內(nèi)制劑，療效顯著，臨床應(yīng)用，得患者肯定。由龍血竭、延胡索、三七、當(dāng)歸、冰片、薄荷腦、乳香、沒(méi)藥等十三味藥組成，具有舒筋活血，散瘀止痛功效。用于跌打損傷，閃腰岔氣，傷筋動(dòng)骨等血瘀腫痛。為了確保藥品質(zhì)量,經(jīng)反復(fù)多次的方法學(xué)考察和試驗(yàn)，建立了本制劑中的龍血竭、延胡索、當(dāng)歸、冰片與薄荷腦、乳香與沒(méi)藥等藥味的薄層鑒別方法。

1 儀器與試藥 ZF-2型三用紫外儀(上海安亭電子儀器廠)；KQ-100型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；賽多利斯BD211D電子天平(德國(guó)賽多利斯公司)；對(duì)照藥材：龍血竭 (批號(hào)121252-201303)；延胡索(批號(hào)120928-200604)；薄荷腦(批號(hào)110728-200506)；冰片(批號(hào)110743-200504)；當(dāng)歸(批號(hào)120927-200613)；乳香(120970-200403)；沒(méi)藥(天然沒(méi)藥)(120967-200903)。對(duì)照品：延胡索乙素 (批號(hào)110726-201213)；均購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品鑒定研究院。接骨竭七活血貼制劑、陰性樣品均由陜西省中醫(yī)醫(yī)院藥劑科提供。氨水、氯仿、甲醇、苯、甲苯、乙酸乙酯、正己烷等試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果 2.1 龍血竭的薄層鑒別 取供試品1片，除去蓋襯，取膏藥約5g，置三角瓶中，加無(wú)水乙醇10mL，超聲30min，傾出上清液，作為供試品溶液(G)。同上法制成陰性對(duì)照溶液(D)。另取龍血竭對(duì)照藥材0.2g，加無(wú)水乙醇2mL,參照供試品制成對(duì)照藥材溶液(D)。吸取供試品和對(duì)照品溶液各3～6μL，一字形分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲醇-氯仿(1∶99)溶液為展開劑，展開晾干，直接紫外365nm下觀察。或噴以香草醛5%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，紫外(365nm)下觀察。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

2.2 延胡索的薄層鑒別 取供試品1片，除去蓋襯，取膏藥約5g，置三角瓶中，加水25mL，用0.05mol/L硫酸調(diào)pH至2～3，超聲提取30min，過(guò)濾，濾液以氨試液調(diào)pH至9～11，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用乙醚振搖提取3次，每次l0mL，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液[1-2]。取延胡索對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。取延胡索乙素對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。薄層色譜條件照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各3～6μL，分別點(diǎn)于同一用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以甲苯一丙酮(9∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置碘缸中約3min后取出，揮盡板上吸附的碘后，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯同色的熒光斑點(diǎn)。

2.3 當(dāng)歸的薄層鑒別 取供試品1片，除去蓋襯，取膏藥約5g，加85%乙醇40mL，超聲30min，濾過(guò)，濾液濃縮蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。取當(dāng)歸對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。薄層色譜條件：照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，分別吸取供試品溶液和對(duì)照藥材溶液各3～6μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(8∶2∶0.1)溶液為展開劑[3-4]，展開，晾干，在紫外(365nm)下觀察。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯亮藍(lán)色同色的熒光斑點(diǎn)。

2.4 冰片和薄荷腦薄層鑒別 取供試品2片，除去蓋襯，取膏藥約10g，置三角燒瓶中，加無(wú)水乙醇15mL，振搖2min，傾出上清液，作為供試品溶液。再取冰片、薄荷腦對(duì)照品，分別加甲醇制成每1mL含5mg、2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～10μL，對(duì)照藥材溶液3μL，點(diǎn)成一字形，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-苯-丙酮(20∶10∶1)[5]溶液為展開劑，展開，第1次8cm,取出，晾干，第二次展開15cm,取出，晾干，噴以5%磷鉬酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的藍(lán)色斑點(diǎn)。

2.5 乳香和沒(méi)藥的薄層鑒別 取供試品1片，除去蓋襯，取膏藥約5g，置三角燒瓶中，加無(wú)水乙醇15mL，超聲30min，傾出上清液，作為供試品溶液。取陰性貼劑，同上法分別制成二者的陰性對(duì)照溶液。再分別取乳香、沒(méi)藥對(duì)照藥材0.3g，加無(wú)水乙醇5mL，同上法處理，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取供試品溶液6～10μL，對(duì)照藥材溶液5μL，點(diǎn)成一字形，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-苯-丙酮(20∶10∶ 1)溶液為展開劑[6]，展開，第一次6cm,取出，晾干，第二次10cm, 取出，晾干，噴以5%香草醛濃硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

3 討 論 樣品預(yù)處理與供試品溶液的制備：根據(jù)延胡索中所含生物堿的性質(zhì)，對(duì)供試樣品進(jìn)行了恰當(dāng)?shù)奶幚?，方法?jiǎn)單，樣品分離純化好，除去了基質(zhì)及其它藥材等干擾成分。展開劑的選擇與優(yōu)化 ：根據(jù)當(dāng)歸中含有有機(jī)酸的理化性質(zhì)，在展開劑中加入少許的酸，結(jié)果樣品色譜分離的清晰，重現(xiàn)性很好。薄荷腦、冰片的展開劑參考了文獻(xiàn)中的種類與極性，調(diào)整原為正己烷-苯-丙酮(20∶10∶2)，現(xiàn)將丙酮改為1，結(jié)果色譜分離非常好；乳香沒(méi)藥展開劑為首創(chuàng)。樣品成分復(fù)雜，展距短分離好。顯色劑優(yōu)化：薄荷腦與冰片用5%香草醛硫酸液顯色時(shí)，供試品層析色譜斑點(diǎn)特多，不易辨析；5%的磷鉬酸溶液顯色，板面清析易辨，背景淡黃色，色譜斑點(diǎn)顯普藍(lán)色。龍血竭原標(biāo)準(zhǔn)用10%濃硫酸顯色后日光觀察，改為不用顯色，直接紫外下365nm處檢視熒光，色譜斑點(diǎn)清晰易辯；或用上法顯色后，觀察熒光也可，否則，供試品顯色后在日光下與對(duì)照藥材無(wú)對(duì)應(yīng)斑點(diǎn)。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].一部,2010.

[2] 尹 華，章建華，張春霞，等.芪參健骨顆粒的薄層鑒別研究[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2011，35(1)：79-80.

[3] 利創(chuàng)華，林艷菲，丘思蘭，等.歸芍調(diào)經(jīng)口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].湖北中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013.3(15)：43-44.

[4] 宋 輝，戴明寬.克痢痧婦炎靈中冰片樟腦的薄層色譜鑒別[J].中國(guó)藥業(yè)，1998，7(10)：26-27.

[5] 李 萍，趙魯青.子宮錠中血竭冰片的薄層色譜鑒別[J].中國(guó)藥業(yè)，2008,12(17)：51-52.

[6] 王蘇會(huì)，閆 薈，王 瑞，等.消骨增貼中乳香、沒(méi)藥的薄層鑒別[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2009,5(29)：414.

(收稿2015-09-29；修回2015-10-25)

中藥鑒定 @接骨竭七活血貼

R282

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.12.053

△陜西省中醫(yī)藥研究院(西安 710003)