盧方軍

(黑龍江省綏濱縣畜牧獸醫(yī)局,黑龍江綏濱 156200)

牛病毒性腹瀉黏膜病的流行、診斷和防控

盧方軍

(黑龍江省綏濱縣畜牧獸醫(yī)局,黑龍江綏濱 156200)

牛病毒性腹瀉黏膜病簡(jiǎn)稱牛病毒性腹瀉或牛黏膜病,是由牛病毒性腹瀉-黏膜病病毒引起的一種世界廣為傳播的牛傳染病。本病以發(fā)熱、厭食、鼻漏、咳嗽、腹瀉、白細(xì)胞數(shù)減少以及消化道黏膜發(fā)炎、糜爛和淋巴組織顯著損害為特征,尤以腹瀉為其主要臨診表現(xiàn)。

牛病毒性腹瀉;診斷;防控

1 流行特點(diǎn)

本病可感染黃牛、水牛、牦牛、山羊、豬、鹿等動(dòng)物，家兔可實(shí)驗(yàn)感染。傳染源主要是病畜和隱性帶毒牛。病畜可發(fā)生持久性的病毒血癥，其血、脾、骨髓、腸淋巴結(jié)等組織以及呼吸道和眼等的分泌物、乳汁、糞便等排泄物均含有病毒，健康牛與病?；驇Ф九０l(fā)生直接、間接接觸，經(jīng)口、消化道、呼吸道感染以及通過胎盤垂直感染、自然交配和人工授精等途徑而傳染。各種年齡都有易感染性，但以2歲以下牛只最敏感，特別是6個(gè)月以下的小牛最易發(fā)病。豬有自然感染本病的報(bào)道，但不出現(xiàn)臨診癥狀。本病常年均可發(fā)生，冬季與早春多見，以6～18月齡的犢牛發(fā)病率較多。該病在封閉式牛群中可呈暴發(fā)式發(fā)病，犢牛急性病例可達(dá)25%，病死率為90～100%。在疫區(qū)只見散發(fā)病例，大多數(shù)呈隱性感染。

2 臨診癥狀

本病的潛伏期7～10d。本病在牛群中僅見少數(shù)輕型病例，多數(shù)呈隱性感染，有時(shí)也可能出現(xiàn)全群突然發(fā)病。6個(gè)月至2歲的牛只易發(fā)生急性病例。急性病牛主要表現(xiàn)為體溫升高到40.5～41℃，精神委頓，食欲減退或廢絕，腹瀉，流涎，咳嗽，有漿液性或黏液性鼻漏，眼結(jié)膜潮流淚，呼吸困難，口腔黏膜充血，唇黏膜、齒齦、頰及舌的兩側(cè)出現(xiàn)潰瘍。重癥病例呈現(xiàn)水樣腹瀉，糞便惡臭，帶有腸黏膜或黏性血液，嚴(yán)重脫水衰竭而死。慢性病牛臨診癥狀不明顯，主要表現(xiàn)為生長(zhǎng)遲緩、消瘦，出現(xiàn)持續(xù)或間歇性下病，病程可長(zhǎng)達(dá)數(shù)月，最后因生產(chǎn)性能降低而淘汰。

3 病理變化

尸體消瘦，重度失水，眼窩下陷。腸黏膜出血、水腫、潰瘍和壞死性病變。淋巴結(jié)腫大，切口外翻，有渾濁液體流出。特征性損害為食道黏膜糜爛，呈大小不等形狀與直線排列。瘤胃黏膜偶見出血和糜爛。剖檢可見鼻鏡、齒齦、舌、軟腭及硬腭、咽等黏膜形成小的、形狀不規(guī)則的淺爛斑。鼻腔內(nèi)有淡黃色膠胨樣滲出物，氣管內(nèi)有大量膿性分泌物，肺出血、水腫，切面有干酪樣物；皺胃炎性水腫和糜爛，腸壁水腫增厚，小腸呈急性卡他性炎癥，空腸和回腸有點(diǎn)狀或斑狀出血，黏膜呈片狀脫落；盲腸和大結(jié)腸末端有出血條紋，腸淋巴結(jié)水腫。

4 實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)

牛病毒性腹瀉黏膜病檢疫檢驗(yàn)方法有直接免疫熒光抗體檢查、微量血清中和試驗(yàn)。

4.1 材料準(zhǔn)備

病毒：本試驗(yàn)使用的病毒株為Oregon C24，按常規(guī)方法在犢牛腎、睪丸（初代或次代）或鼻甲骨細(xì)胞上繁殖，待75%細(xì)胞出現(xiàn)典型病變時(shí)收毒，凍融2次，測(cè)定毒價(jià)，分裝于小瓶?jī)?nèi)低溫保存。細(xì)胞：按牛原代腎細(xì)胞、睪丸細(xì)胞、鼻甲骨細(xì)胞或MDBK細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)液：為細(xì)胞加入10%犢牛血清；細(xì)胞維持液：為細(xì)胞加入2～3%犢牛血清；血清稀釋液：為細(xì)胞中不加血清。溶液pH為7.0～7.2，加入青霉素和鏈霉素，使終濃度為100國(guó)際單位（μg）/ml。乙二胺四乙酸鈉-胰酶消化液：按9：1的比例加入0.02%乙二胺四乙酸鈉和0.25%胰酶。24孔平底帶蓋塑料培養(yǎng)板：新的密封的培養(yǎng)板可直接使用；重復(fù)使用的培養(yǎng)板需經(jīng)重鉻酸鉀清潔液浸泡24h，再依次用自來(lái)水和雙蒸水沖洗干凈，烘干，紫外線照射1h備用。加樣器：50～200μl調(diào)節(jié)加樣器。

4.2 實(shí)驗(yàn)方法

（1）定量測(cè)定：被檢血清、陽(yáng)性對(duì)照血清及陰性對(duì)照血清在試驗(yàn)前應(yīng)分別于56℃滅活30min。在微量細(xì)胞培養(yǎng)板上加入稀釋液50微升/孔。取被檢血清分別加入一至四排第一孔（每份血清縱向作四排，微量板可橫向或縱向使用）。用多頭加樣器（調(diào)至50μl）從每排第一孔橫向連續(xù)倍比稀釋到最后一孔，棄去最后一孔中溶液50μl。

用稀釋液將病毒稀釋成每1ml含100個(gè)半數(shù)感染量的工作液。用多頭加樣器于第二至四排各孔中加病毒工作液50μl，第一排孔中加50微升稀釋液作為血清對(duì)照，加蓋于置37℃、5%二氧化碳中感作60min。將生長(zhǎng)良好的單層細(xì)胞用乙二胺四乙酸鈉-胰酶消化液消化分散后用培養(yǎng)液配制含40萬(wàn)/ml的細(xì)胞懸液。每孔加細(xì)胞懸液100μl，加蓋于置37℃、5%二氧化碳中培養(yǎng)6d。從第四天開始觀察結(jié)果，于第六天最終判定。

（2）定性測(cè)定：被檢血清只做1：5稀釋，其他操作同上。

4.3 結(jié)果判定

當(dāng)細(xì)胞對(duì)照正常，陰性血清孔對(duì)照各孔細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞病變，陽(yáng)性血清對(duì)照孔不出現(xiàn)細(xì)胞病變，病毒回歸的毒價(jià)與原測(cè)定的毒價(jià)相關(guān)必須在±0.5 log10以內(nèi)，本試驗(yàn)有效。定量試驗(yàn)：每份血清同一稀釋度的4個(gè)孔中有2個(gè)以上孔完全被保護(hù)而不出現(xiàn)細(xì)胞病變時(shí)，該稀釋度即為該血清的抗體滴度。定性試驗(yàn)：被檢血清在1：5稀釋度時(shí)有2孔以上的細(xì)胞完全被保護(hù)，該血清即為陽(yáng)性。

4.4 注意事項(xiàng)

第一，被檢血清、陽(yáng)性對(duì)照血清及陰性對(duì)照血清在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)分別于56℃滅能30min。第二，如需測(cè)定被檢血清的抗體效價(jià)，只需先將待檢血清作4倍倍比稀釋后，再按本法進(jìn)行測(cè)定。

5 防控

本病目前尚無(wú)有效療法，主要是對(duì)癥治療，控制繼發(fā)病。嚴(yán)禁從疫區(qū)購(gòu)進(jìn)牛和羊，如引進(jìn)種牛、種羊時(shí)須進(jìn)行血清學(xué)檢查，防止引進(jìn)帶毒牛、羊，加強(qiáng)檢疫。發(fā)病牛要隔離治療或急宰，防止疫情發(fā)展。疫區(qū)除做好消毒、隔離以外，可定期進(jìn)行預(yù)防注射，目前應(yīng)用弱毒疫苗和滅活苗來(lái)預(yù)防和控制本病。疫苗免疫：對(duì)威脅較大的牛群應(yīng)每隔3～5年接種1次。育成母牛和種公牛于配種前3周再接種1次，多數(shù)?？色@得終生免疫。弱毒苗能引起流產(chǎn)和胎兒畸形，妊娠母牛應(yīng)禁用。

[1] 李健明，馮海峰，時(shí)坤，等.牛病毒性腹瀉-黏膜病的流行現(xiàn)狀和

診斷技術(shù)研究進(jìn)展[J].經(jīng)濟(jì)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2014，（2）：111-115. [2] 周洛.牛病毒性腹瀉流行現(xiàn)狀及診斷防控[J].中國(guó)動(dòng)物保健，

2015，（7）：46-48.

盧方軍（1971—），男，獸醫(yī)師，本科。