北京市醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心（100061）鄭婕 馮路 趙陽(yáng) 王輝

（接11月上）

②標(biāo)本制備區(qū)的功能：核酸（RNA、DNA）提取、貯存及加樣。配套用品一般應(yīng)包括：a.2℃～8℃冰箱、-20℃以下冰箱。b.高速離心機(jī)。c.混勻器。d.水浴箱或加熱模塊。e.微量加樣器。f.紫外消毒設(shè)備。g.生物安全柜。h.消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾芯）。i.專(zhuān)用工作服和工作鞋(套)。j.專(zhuān)用辦公用品。k.如需處理大分子DNA，應(yīng)當(dāng)具有超聲波儀。③擴(kuò)增區(qū)的功能：cDNA合成、DNA擴(kuò)增及檢測(cè)。配套用品一般應(yīng)包括：a.核酸擴(kuò)增儀。b.微量加樣器。c.紫外消毒設(shè)備。d.消耗品：一次性手套、一次性帽子、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾芯）。e.專(zhuān)用工作服和工作鞋。f.專(zhuān)用辦公用品。④擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)的功能：擴(kuò)增片段的進(jìn)一步分析測(cè)定。視檢驗(yàn)方法不同而定，基本配置如下：a.微量加樣器。b.紫外消毒設(shè)備。c.消耗品：一次性手套、一次性帽子、加樣器吸頭（帶濾芯）。d.專(zhuān)用工作服和工作鞋。e.專(zhuān)用辦公用品。⑤設(shè)備的維護(hù)保養(yǎng)：應(yīng)建立設(shè)備維護(hù)保養(yǎng)規(guī)程，計(jì)量設(shè)備應(yīng)定期檢定。例如核酸擴(kuò)增儀、微量加樣器、生物安全柜、離心機(jī)應(yīng)每年進(jìn)行檢定或校準(zhǔn)工作。2.3 現(xiàn)場(chǎng)及文件檢查工作流程及注意事項(xiàng) 完善的硬件條件下，合理的工作流程和工作制度才能進(jìn)一步保證PCR檢驗(yàn)工作的順利開(kāi)展。

①進(jìn)入各工作區(qū)域應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行，即試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→ 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。②各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品不得混用。③不同工作區(qū)域的工作服應(yīng)加以區(qū)分，不得混用（例如可以采用不同顏色）。工作人員離開(kāi)各工作區(qū)域時(shí)，不得將本區(qū)域工作服帶出。④實(shí)驗(yàn)室的清潔應(yīng)當(dāng)按試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)的方向進(jìn)行。不同的實(shí)驗(yàn)區(qū)域應(yīng)當(dāng)有其各自的清潔用具并防止交叉污染。實(shí)驗(yàn)垃圾屬于醫(yī)療廢物的應(yīng)按《醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例》相關(guān)規(guī)定進(jìn)行處理。⑤工作結(jié)束后，應(yīng)立即對(duì)工作區(qū)進(jìn)行清潔及消毒。⑥ 貯存試劑和用于標(biāo)本制備的消耗品等材料應(yīng)當(dāng)直接運(yùn)送至試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)，不能經(jīng)過(guò)擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)。試劑盒中的陽(yáng)性對(duì)照品及質(zhì)控品應(yīng)當(dāng)保存在標(biāo)本處理區(qū)。試劑應(yīng)使用分子生物學(xué)級(jí)別試劑，使用的純化水應(yīng)高壓滅菌。質(zhì)檢用于原輔料、半成品、成品檢驗(yàn)用的PCR反應(yīng)試劑應(yīng)有相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及操作程序。⑦為避免樣本間的交叉污染，加入待測(cè)核酸后，應(yīng)蓋好含反應(yīng)混合液的反應(yīng)管。對(duì)具有潛在傳染危險(xiǎn)性的材料，應(yīng)在生物安全柜內(nèi)開(kāi)蓋，并有明確的樣本處理和滅活程序。⑧應(yīng)避免氣溶膠所致的污染，盡量減少在擴(kuò)增區(qū)內(nèi)的走動(dòng)，擴(kuò)增反應(yīng)管不得在擴(kuò)增區(qū)打開(kāi)。⑨擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)有可能存在某些可致基因突變和有毒物質(zhì)如溴化乙錠、丙烯酰胺、甲醛或放射性核素等，應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù)。

2.4 現(xiàn)場(chǎng)及文件檢查人員培訓(xùn)情況 參與PCR檢驗(yàn)工作人員應(yīng)具備相應(yīng)的專(zhuān)業(yè)知識(shí)和技能，包括能熟練操作相關(guān)設(shè)備，明確整個(gè)工作的流程，掌握出現(xiàn)污染情況的處理方法以及實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制方法和檢測(cè)結(jié)果的解釋。

檢查員可以通過(guò)詢(xún)問(wèn)或要求企業(yè)以實(shí)際操作的方式對(duì)其進(jìn)行評(píng)價(jià)，也可以通過(guò)查閱生產(chǎn)企業(yè)的培訓(xùn)記錄的適宜性和完整性對(duì)其進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。

3 結(jié)語(yǔ)

本《指南》主要以現(xiàn)行醫(yī)療器械和衛(wèi)生行業(yè)的法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)以及相關(guān)文獻(xiàn)中對(duì)于PCR檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的規(guī)定為基礎(chǔ)，尤其是以《全國(guó)臨床檢驗(yàn)規(guī)程》（第三版）的相關(guān)要求為主，部分借鑒了《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增管理辦法》（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010〕194號(hào)）、《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作導(dǎo)則》、《臨床診斷中聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)的應(yīng)用》（WS/T 230-2002）等行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)要求。在檢查要點(diǎn)的制訂過(guò)程中我們走訪了全國(guó)多家PCR試劑生產(chǎn)企業(yè)，并且我們組織了博奧生物、華大基因、中生北控、寶瑞源、鑫諾美迪、泰格瑞、普林耐特、金菩嘉等多家建設(shè)有PCR檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的企業(yè)進(jìn)行了研討以及相應(yīng)指標(biāo)的驗(yàn)證，針對(duì)驗(yàn)證結(jié)果請(qǐng)教臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域的專(zhuān)家進(jìn)行了核實(shí)與相應(yīng)指導(dǎo)，還在北京市食品藥品監(jiān)督管理局網(wǎng)站上公開(kāi)征求了意見(jiàn)，以求能夠客觀、科學(xué)、合理的設(shè)定相關(guān)要求。

此文件的出臺(tái)旨在指導(dǎo)北京市醫(yī)療器械現(xiàn)場(chǎng)檢查人員的PCR檢驗(yàn)工作。同時(shí)，為PCR類(lèi)體外診斷試劑產(chǎn)品生產(chǎn)企業(yè)在PCR檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)建造和管理要求提供參考，促進(jìn)產(chǎn)品安全有效上市。