福建醫(yī)科大學(xué)附屬龍巖第一醫(yī)院（364000）林承春 林棟 黃建青

福建省龍巖市第二醫(yī)院（364000）邱小輝△

胃癌是世界范圍內(nèi)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一, 尋找胃癌發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)基因，了解胃癌的分子遺傳學(xué)機(jī)制，為胃癌的預(yù)防、診斷、治療提供理論基礎(chǔ)是目前的研究熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)研究胃癌細(xì)胞中是否存在GP73的差異表達(dá)有助于深入理解GP73的生理病理機(jī)制，并有助于評(píng)價(jià)其作為血清腫瘤標(biāo)志物的應(yīng)用前景。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 病例選擇 選自2012年1月～2013年8月哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一臨床醫(yī)學(xué)院胃癌患者術(shù)后所取組織，年齡27歲～89歲，平均年齡58歲，所有患者均未合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤。經(jīng)病理科所證實(shí)的原發(fā)性胃癌石蠟包埋組織71例, 選取相配對(duì)的胃癌旁組織30例作為正常的胃黏膜對(duì)照標(biāo)本。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 兔抗人GP73多克隆抗體：購(gòu)自北京博奧森生物科技有限公司；辣根過(guò)氧化物酶DAB顯色劑，抗體稀釋液：購(gòu)于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法及步驟 選取所需標(biāo)本-胃癌組織標(biāo)本及胃癌旁組織標(biāo)本；常規(guī)石蠟包埋。連續(xù)切片5μm，每例各備2張，分別作HE染色，GP73免疫組化染色，試劑盒內(nèi)已知陽(yáng)性片作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3 陽(yáng)性結(jié)果的判定 細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核出現(xiàn)細(xì)致棕色顆粒定義為陽(yáng)性細(xì)胞。GP73主要定位于細(xì)胞質(zhì)，參照Carcangiu等半定量評(píng)分方法，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和著色強(qiáng)度計(jì)分，細(xì)胞著色按無(wú)色、淡棕色、棕黃色和棕褐色分別評(píng)為0、1、2、3分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量按小于5%，5%～35%，36%～70%和大于70%分別記為0、1、2、3分，再根據(jù)兩項(xiàng)評(píng)分的積，≤1分為-，2～3分為+，4～5分為++，≥6分為+++。

1.4 實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料的比較應(yīng)用卡方檢驗(yàn)，兩變量相關(guān)性分析應(yīng)用Spearman相關(guān)性分析，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 GP73蛋白在胃癌與癌旁正常組織中的表達(dá) 免疫組化結(jié)果顯示：GP73蛋白表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒狀；GP73蛋白在胃癌組織和癌旁正常組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為26.8%和86.7%，胃癌組織中的表達(dá)明顯低于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 GP73蛋白的表達(dá)與胃癌臨床病例因素的關(guān)系 GP73表達(dá)水平與胃癌的TNM分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而與年齡、性別、組織學(xué)分級(jí)、腫瘤大小無(wú)關(guān)。TNM分期中Ⅲ～Ⅳ期組、浸潤(rùn)深度（T3+T4）組和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽(yáng)性表達(dá)率低于TNM分期Ⅰ～Ⅱ、浸潤(rùn)深度（T1+T2）組和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。GP73在胃癌組織學(xué)分級(jí)低分化組的陽(yáng)性表達(dá)率（20%）比高、中分化組的表達(dá)率（25%、46.7%）低。

3 討論

GP73在人正常結(jié)腸、肺、腎、前列腺等多個(gè)器官組織中均有表達(dá)，但表達(dá)水平相差很大，最高可達(dá)20倍。GP73主要表達(dá)于上皮細(xì)胞，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)免疫組織化學(xué)研究GP73在胃癌組織中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)GP73在癌旁正常組織中陽(yáng)性表達(dá)率為：86.7%，進(jìn)一步證實(shí)了GP73蛋白在胃組織中的高水平表達(dá)。

GP73mRNA在胃、結(jié)腸、氣管、前列腺等組織中表達(dá)水平較高，而在胎盤(pán)、脾臟、骨骼肌、淋巴組織、白細(xì)胞、正常肝細(xì)胞等組織中表達(dá)低或沒(méi)有表達(dá)。發(fā)現(xiàn)高爾基體的凋亡相關(guān)蛋白在高分化胃癌細(xì)胞中明顯高于低分化胃癌細(xì)胞，而與細(xì)胞增殖分化有關(guān)的蛋白在低分化胃癌細(xì)胞的高爾基體中又明顯增多。首次明確了在胃癌分化程度不同時(shí)高爾基體的蛋白變化情況，但該項(xiàng)研究并未涉及到GP73。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)GP73蛋白胃癌組織中的陽(yáng)性率為：26.8%，明顯低于癌旁正常組織，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。說(shuō)明GP73的表達(dá)變化與胃癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，提示GP73其可能參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展，在區(qū)別胃癌的惡性程度中起著重要的作用。