楊開洪，梁知銳，曾慶棧

(陽江市中醫(yī)醫(yī)院檢驗科，廣東 陽 江529500)

糖化血紅蛋白(HbA1c)可以反映過去8~10周的平均血糖水平，因此是評價糖尿病患者血糖控制情況一項良好的指標。HLC-723G8是日本東曹株式會社(TOSOH CORPORATION)生產(chǎn)的一款簡單快捷、高性能的糖化血紅蛋白分析儀，它采用離子交換高效液相色譜法(HPLC)原理，利用其電荷差異通過陽離子交換住對血紅蛋白類物質(zhì)進行分離，對HbA1c等血紅蛋白各成分以一個樣本1分鐘的高速，按共計6個組分進行分離測定，它利用3種不同鹽濃度的緩沖液進行梯度洗脫的方法進行分離，最后根據(jù)血紅蛋白各成分比例獲得HbA1c的比例。離子交換HPLC一直以來以其良好的準確性、穩(wěn)定性在臨床上得到廣泛的應(yīng)用，并被認為是測定HbA1c的國際標準化方法[1,2]。盡管如此，在HLC-723G8的日常使用中，常會有一些因素導(dǎo)致HbA1c測定結(jié)果不可靠或者根本無法測出。本文就影響HLC-723G8測定HbA1c的常見干擾因素進行分析探討，供同行參考。

1 變異血紅蛋白

1.1 地中海貧血標本 2014年9月，本實驗室檢測到1例HbA1c結(jié)果為0.0%的患者，同時血常規(guī)結(jié)果發(fā)現(xiàn)其血紅蛋白濃度、平均紅細胞體積、平均紅細胞血紅蛋白含量均降低，基因檢測確診為地中海貧血，用親和層析法(NycoCardR)復(fù)查，標準化后HbA1c結(jié)果為5.6%[3]，因此懷疑為地中海貧血樣本對HLC-723G8測定結(jié)果影響所致。索明環(huán)等[4]采用陽離子交換HPLC檢測3例地中海貧血患者均獲得異常的HbA1c圖譜，3例結(jié)果均為異常。謝裕達等[5]在進行地中海貧血孕婦妊娠糖尿病篩查時也發(fā)現(xiàn)HbA1c值受地中海貧血影響較大。地中海貧血是一組遺傳性溶血性貧血疾病，它是由于基因缺陷導(dǎo)致血紅蛋白α鏈或者β鏈存在突變或者缺失[6]，血紅蛋白各成分表面的電荷量產(chǎn)生繼發(fā)性改變，從而使離子交換色譜分離時間提前或者延遲，此時HbA1c常不能單獨形成分離峰，因此其檢測結(jié)果為0.0%。

1.2 高血紅蛋白F(HbF)標本 研究表明當樣本HbF濃度<8.75%時，離子交換HPLC法的測定結(jié)果與理論值無差異；當樣本HbF濃度為17.50%～23.00%時，其測定結(jié)果要明顯低于HbA1c理論值；當HbF濃度達35.0%～70.0%時，離子交換HPLC法根本無法檢測出HbA1c[7]。張艷芳等[8]報道2例遺傳性持續(xù)性胎兒血紅蛋白增多癥患者測定HbA1c時，其中1例血紅蛋白電泳檢測結(jié)果HbF占100%，而其采用離子交換HPLC測定HbA1c時未檢測出結(jié)果，表明HbF對HbA1c檢測產(chǎn)生了嚴重干擾。張靜等[9]在綜述HbA1c檢測的影響因素時也表示HbF、HbS會對其檢測產(chǎn)生一定的誤差。HbF是由α鏈和γ鏈構(gòu)成的胎兒性Hb，新生兒參考區(qū)間約31%～96%。新生兒臍帶血中含有大量HbF，大約占血紅蛋白總量的70%～90%，它的等電點和HbA1c比較接近，在檢測過程中HbA1c峰大部分疊加在HbF峰中，導(dǎo)致HbA1c值顯著偏低或根本檢測不出。

1.3 血紅蛋白 D(HbD)、血紅蛋白 C(HbC)、血紅蛋白S(HbS)異常升高的標本 東曹(上海)生物科技有限公司的 《HLC-723G8產(chǎn)品介紹》中指出：⑴當HbD、HbS、HbC 以雜合形式存在(如 HbAS)時，采用HLC-723G8全自動糖化血紅蛋白分析儀變異模式進行測定不影響測定結(jié)果。⑵當HbD、HbS、HbC以純合形式或者雙雜合形式存在時(如HbSS、HbSC)，HbA1c測定則無法運行。⑶其他變異血紅蛋白的影響：血紅蛋白E(HbE)病是地中海貧血中一種特殊類型，檢測HbA1c時特別需要注意HbE會在HbA1c峰前出現(xiàn)一個小峰。

2 尿毒癥患者標本

尿毒癥患者由于腎功能嚴重受損常繼發(fā)腎性貧血，患者體內(nèi)有過多的尿素(BUN)等含氮代謝廢物及毒物在體內(nèi)蓄積，尿素在體內(nèi)可自發(fā)地分離形成氨和氰酸鹽，氰酸鹽經(jīng)質(zhì)子化作用后形成異氰酸，血紅蛋白鏈端的纈氨酸可與異氰酸發(fā)生特異性的結(jié)合反應(yīng)，形成穩(wěn)定的氨基甲酰血紅蛋白(CarHb)，其含量常以氨基甲酰纈氨酸(CV)表示。近來發(fā)現(xiàn)氮質(zhì)血癥與氨基甲酰血紅蛋白關(guān)系密切，而受到許多學(xué)者的重視[10,11]。氨基甲酰血紅蛋白與HbA1c一樣在溶液中都帶較強正電荷，所以在采用基于電荷分離原理的分析方法中(如電泳、離子交換層析法)，HbA1c測定結(jié)果易受氨基甲酰血紅蛋白的影響，導(dǎo)致HbA1c結(jié)果偏高[12,13]。

3 高乙醇標本

當血漿乙醇濃度大于25mg/dl時會對離子交換HPLC法測定HbA1c產(chǎn)生一定的干擾。乙醇可促進氧與血紅蛋白特異性結(jié)合，進而改變血紅蛋白的分子構(gòu)象，影響血紅蛋白的攜氧能力。血紅蛋白拉曼光譜的結(jié)果表明：當乙醇濃度大于25mg/dl時，隨著乙醇濃度的增加，血液中氧合血紅蛋白占總血紅蛋白的比例隨之增加，血紅蛋白釋氧能力減弱，當乙醇濃度為500mg/dl時，氧合血紅蛋白達到最多[14]。離子交換HPLC法測定HbA1c是通過計算HbA1c占總血紅蛋白的比值，隨著乙醇濃度的增加氧合血紅蛋白的含量增加，HbA1c所占的比例逐漸變少，所以不能真正反映個體HbA1c的水平，導(dǎo)致測定結(jié)果的不準確。此外，HbA1c的生成與紅細胞生存時間有關(guān)，而酗酒可引起紅細胞壽命降低并能干擾紅細胞的生成，縮短紅細胞壽命會降低HbA1c水平[15,16]，因此乙醇也可間接降低HbA1c水平。

4 嚴重脂濁標本

東曹(上海)生物科技有限公司的《HLC-723G8產(chǎn)品介紹》中指出，當血液濁度大于2500Formazin濁度單位時，離子交換HPLC法測定HbA1c值也會產(chǎn)生干擾。脂濁產(chǎn)生的原因包括原發(fā)性高脂血癥、繼發(fā)性高脂血癥、餐后以及輸注脂肪乳后等，脂濁標本是由于血液中甘油三脂等含量過高導(dǎo)致血液外觀呈脂白色渾濁。各種脂蛋白因所帶電荷的不同，在用離子HPLC法檢測時也會對其進行分離，所以當嚴重脂濁標本各種脂蛋白含量達到一定值時 (濁度大于2500Formazin)，在離子HPLC法測定HbA1c時含量不同的脂蛋白也會同時進行分離并在圖譜相應(yīng)位置疊加，影響電泳圖譜中血紅蛋白各成分的含量，從而對HbA1c測定結(jié)果產(chǎn)生不定向干擾。

HLC-723G8全自動糖化血紅蛋白分析儀具有精密度高、相關(guān)性好、攜帶污染小、測試速度快、操作簡便等優(yōu)點而被廣泛使用于臨床[17]，但由于其采用離子交換HPLC法，凡是影響該方法的因素均會對儀器產(chǎn)生一定的影響，實際使用中不能完全排除特殊標本對檢測結(jié)果的影響，只有充分了解儀器性能、總結(jié)分析影響其測定結(jié)果的各種樣本干擾因素，才能獲得可靠的分析結(jié)果。

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