鄧祥，黃小梅，吳狄

(1.四川文理學院 化學化工學院，四川 達州 635000;2.“特色植物開發(fā)研究”四川省高校重點實驗室，四川 達州 635000)

何首烏為蓼科纏繞藤本植物何首烏(Polygonum multiflorum Thunb)干燥后的塊根，外表紅褐色至暗褐色［1-2］。具有益精血、補肝腎、強筋骨、潤腸道、悅?cè)蓊?、烏須發(fā)、祛風之功效，能解毒、消癰、截虐、潤腸通便。用于瘡癰、瘰疬、風疹瘙癢、久虐體虛、腸燥便秘等疾?。?-5］。生首烏具有解毒、通便和潤腸等功效，制首烏具有益精血、補肝腎、強筋骨和烏須發(fā)等功效［6-8］。

何首烏中主要含有二苯乙烯類、蒽醌類、糖類和磷脂類等化學成分，其中二苯乙烯苷類化合物具有抗老年癡呆、抗衰老、提高免疫功能、降低膽固醇、防治動脈硬化及保肝等作用［9-10］。二苯乙烯苷含量往往作為何首烏質(zhì)量的評價指標，其含量不得低藥典規(guī)定的1.0%限量［11］。

本實驗采用超聲波輔助溶劑提取法，提取何首烏中二苯乙烯苷類化合物，通過紫外分光光度法，快速測定了何首烏中二苯乙烯苷類化合物含量，同時通過單因素實驗和正交實驗，旨在尋找何首烏中二苯乙烯苷類物質(zhì)的最佳提取工藝條件，為實際生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1 實驗部分

1.1 材料與儀器

何首烏;二苯乙烯苷標準試劑(中國標準物質(zhì)中心);無水乙醇、95%乙醇均為分析純;超純水。

HN-650CT 多用途恒溫超聲波提取儀;UV-2550型紫外-可見分光光度計;GT16-3A 型高速臺式離心機;HK-20B 螺紋搖擺式小型粉碎機;FA1024N 型電子分析天平。

1.2 標準曲線的繪制［12］

準確稱取經(jīng)干燥至恒重的二苯乙烯苷標準品5.0 mg，用95%乙醇溶解在25 mL 容量瓶中并定容，搖勻，得二苯乙烯苷濃度為200 μg/mL 的對照品溶液。分別取對照品溶液0.0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL 于25 mL 容量瓶中，用95%乙醇定容，在322 nm 波長處測定其吸光度。以二苯乙烯苷濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制標準曲線，得線性回歸方程:Y = 0.057 7X + 0.006 3，相關(guān)系數(shù)r=0.999 6，可見，其線性關(guān)系良好。

1.3 二苯乙烯苷的提?。?3］

稱取60 目何首烏粉末0.5 g，以乙醇作溶劑，采用超聲波提取。提取液離心，取上層清液于25 mL容量瓶中，用乙醇進行定容，測定吸光度，計算二苯乙烯苷的提取率。

式中 C——容量瓶中二苯乙烯苷的濃度，g/mL;

M——何首烏質(zhì)量，g。

2 結(jié)果與討論

2.1 單因素實驗

2.1.1 乙醇濃度 選取10 mL 溶劑，在55 ℃和功率1 000 W 條件下提取2.0 h，乙醇濃度對二苯乙烯苷類物質(zhì)提取率的影響見圖1。

圖1 乙醇濃度對提取率的影響Fig.1 The effect of ethanol concentration on the extraction rate

由圖1 可知，隨著乙醇濃度的增加，二苯乙烯苷類物質(zhì)的提取率增大，當乙醇濃度60%時，提取率達到最大值，之后，提取率隨著乙醇濃度的增加反而減小。其原因可能是乙醇濃度會影響二苯乙烯苷類物質(zhì)與溶劑之間的親和力，乙醇濃度過大，溶劑的極性差異性增加，限制了某些二苯乙烯苷類物質(zhì)的溶出，提取率反而降低。因此，選取60%的乙醇濃度。2.1.2 料液比 在55 ℃和功率為1 000 W 條件下，以濃度為60%乙醇作溶劑，提取2.0 h，料液比對二苯乙烯苷類物質(zhì)提取率的影響見圖2。

圖2 料液比對提取率的影響Fig.2 The effect of material-solvent ratio on extraction rate

由圖2 可知，二苯乙烯苷類物質(zhì)的提取率隨著料液比的增大而增加，料液比1∶20 g/mL 時，二苯乙烯苷類物質(zhì)的提取率達到最大值，之后，提取率隨著料液比的增大而減小。這是因為料液比過大，其它組分大量溶出形成相互競爭，反而不利于二苯乙烯苷類物質(zhì)的提取，提取率降低。所以，最佳料液比為1∶20 g/mL。

2.1.3 提取溫度 以濃度為60%乙醇作溶劑，在料液比1 ∶20 g/mL 和功率1 000 W 條件下，提取2.0 h，提取溫度對二苯乙烯苷類物質(zhì)提取率的影響見圖3。

圖3 提取溫度對提取率的影響Fig.3 The effect of extracting temperature on extraction rate

由圖3 可知，二苯乙烯苷類物質(zhì)的提取率隨著溫度的升高而增加，65 ℃時二苯乙烯苷類物質(zhì)的提取率達到最大值;超過65 ℃后，二苯乙烯苷類物質(zhì)的提取率反而呈現(xiàn)下降趨勢。這是因為二苯乙烯苷類物質(zhì)具有一定的熱不穩(wěn)定性，隨著溫度的升高，二苯乙烯苷類物質(zhì)部分分解，導(dǎo)致提取率降低。故選取65 ℃為最佳溫度。

2.1.4 提取時間 料液比1∶20 g/mL，在65 ℃和功率1 000 W 條件下，以濃度60%乙醇作溶劑，提取時間對二苯乙烯苷類物質(zhì)提取率的影響見圖4。

圖4 提取時間對提取率的影響Fig.4 The effect of extracting time on extracting time

由圖4 可知，隨著時間的增加，二苯乙烯苷類物質(zhì)的提取率增大，2.0 h 時提取率趨于穩(wěn)定，基本達到最大值。其原因主要在于，隨著時間的延續(xù)，超聲所產(chǎn)生的攪拌作用和空化效應(yīng)對細胞膜的破壞加劇，增加了細胞內(nèi)物質(zhì)的穿透能力，更有利于二苯乙烯苷類物質(zhì)的釋放與溶出。因此，最佳提取時間選取2.0 h。

2.1.5 提取功率 以濃度60%乙醇作溶劑，料液比1∶20 g/mL，在65 ℃提取2.0 h，提取功率對二苯乙烯苷類物質(zhì)提取率的影響見圖5。

圖5 提取功率對提取率的影響Fig.5 The effect of extracting power on extraction rate

由圖5 可知，隨著提取功率的增加，二苯乙烯苷類物質(zhì)的提取率增大，800 W 時提取率趨于穩(wěn)定，基本達到最大值;之后再增加功率，對二苯乙烯苷類物質(zhì)的提取率影響不大。因此，選取800 W 作為最佳提取功率。

2.2 正交實驗優(yōu)化

提取功率800 W，對乙醇濃度、料液比、提取溫度和提取時間進行L9(34)正交實驗，因素與水平見表1，結(jié)果見表2。

表1 因素與水平表Table 1 Factors and levels chart

表2 正交實驗結(jié)果Table 2 Orthogonal experimental results

由表2 可知，4 個因素對提取率影響大小順序為C ＞A ＞B ＞D，最佳提取工藝組合為A2B3C2D1，即乙醇濃度60%，料液比1∶25 g/mL，提取溫度65 ℃，提取時間1.5 h。

2.3 驗證實驗

在正交實驗的最佳提取工藝條件下進行3 次平行實驗，結(jié)果見表3。

表3 驗證實驗結(jié)果Table 3 The results of verification experiment

由表3 可知，何首烏中二苯乙烯苷類物質(zhì)的平均提取率為7.19%。

3 結(jié)論

以乙醇溶液作溶劑，采用超聲波輔助提取二苯乙烯苷類物質(zhì)，最佳提取工藝條件為:乙醇濃度60%，料液比1∶25 g/mL，提取溫度65 ℃，提取時間1.5 h，提取功率800 W。在此條件下，二苯乙烯苷類物質(zhì)的提取率達7.19%。

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