邵駿驊，邵衛(wèi)平，劉永立

(浙江大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院，浙江杭州 310012)

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三葉青高效快繁技術(shù)體系的建立

邵駿驊，邵衛(wèi)平，劉永立*

(浙江大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院，浙江杭州 310012)

[目的]研究三葉青快繁技術(shù)。[方法]以藥用植物三葉青組培苗的節(jié)部為外植體，研究了植物生長調(diào)節(jié)劑對三葉青增殖和生根的影響。[結(jié)果]在含有6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L的MS培養(yǎng)基中，三葉青增殖倍數(shù)最大；而三葉青的最佳生根培養(yǎng)基為MS+IBA 0.5 mg/L。生根的三葉青經(jīng)過馴化后移栽到含有蛭石、草炭、珍珠巖(3∶6∶1)的混合基質(zhì)中，一個月后成長為健康植株。[結(jié)論]該研究建立的三葉青高效快繁體系，為解決三葉青的人工栽培所需種苗提供了技術(shù)支撐。

三葉青；組織培養(yǎng)；增殖；生根；移栽馴化

三葉青是我國特有植物，含黃酮類、三萜類化合物及蒲公英萜醇等，為用途廣泛的珍稀名貴中藥材[1]。具有清熱解毒、祛風(fēng)化痰、活血止痛、抗腫瘤、保肝、抗炎、調(diào)節(jié)免疫等藥理作用，基本無毒[2-3]。三葉青對于生長環(huán)境要求嚴(yán)苛，自然條件下生長速度緩慢[4]。因?qū)σ吧~青資源的過度利用及自然環(huán)境惡化，致使其野生資源已瀕臨滅絕，因此開展三葉青組織培養(yǎng)及人工栽培十分重要，并有人已進(jìn)行了初步研究[5-7]。筆者以藥用植物三葉青組培苗的節(jié)部為外植體，研究了植物生長調(diào)節(jié)劑對三葉青增殖和生根的影響，通過對三葉青開展組培快繁技術(shù)研究，不僅能提供大量醫(yī)藥原材料，也有保護(hù)已瀕臨滅絕的三葉青野生資源的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

以三葉青組培苗的幼嫩帶腋芽莖段為外植體，該材料原產(chǎn)于浙江省臺州地區(qū)。

1.2 方法

1.2.1 增殖培養(yǎng)試驗。切取帶腋芽莖段接種到20個不同激素濃度組合6-BA(0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mg/L )、NAA(0.02、0.10、0.20、0.50 mg/L )的MS培養(yǎng)基中。附加30 g/L 蔗糖、7 g/L 瓊脂粉，pH=5.7。組織培養(yǎng)室中光強(qiáng)為30 μmol/(m2·s)，溫度為(25±2)℃。培養(yǎng)8周后，分別統(tǒng)計每個處理的增殖倍數(shù)和株高。

1.2.2 生根培養(yǎng)試驗。切取帶腋芽莖段接種到含不同濃度IBA的MS培養(yǎng)基中，研究4個不同濃度IBA(0、0.1、0.5、1.0 mg/L )對三葉青生根的影響。培養(yǎng)4、6周后，分別統(tǒng)計每個處理的根數(shù)、根長。

1.2.3 品種和光照試驗。研究品種(原始品種、“早生”品種)、光照(不遮光、遮光50%)對三葉青組培苗生長發(fā)育的影響，切取帶腋芽莖段接種到含6-BA 0.5 mg/L +NAA 0.1 mg/L的MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)4周后，分別統(tǒng)計每個處理的出芽率、增殖倍數(shù)、株高和節(jié)數(shù)。

1.2.4 馴化移栽試驗。選取生長情況良好的三葉青試管苗，煉苗后洗去根部的培養(yǎng)基，栽植于裝有蛭石、草炭、珍珠巖(3∶6∶1)混合基質(zhì)的塑料盆中。第1周澆足水后覆蓋塑料薄膜，置于陰涼處，3 d以后逐漸揭開塑料薄膜至1周后完全去除。

2 結(jié)果與分析

2.1 增殖培養(yǎng)試驗結(jié)果

由表1～2可知，生長調(diào)節(jié)劑對植株的增殖倍數(shù)和株高均有顯著影響。在6-BA濃度<1.0 mg/L 時，增殖倍數(shù)隨著6-BA濃度的升高而升高，植株較高，但當(dāng)6-BA濃度≥1.0 mg/L 時，密集的叢生芽開始增多，少許出現(xiàn)愈傷組織，植株較矮，因此6-BA濃度以0.5 mg/L為宜。加0.5 mg/L 6-BA時，增殖倍數(shù)隨NAA濃度的增大而減小，株高隨NAA濃度的增大而增大，且0.10和0.02 mg/L NAA時增殖倍數(shù)差異不顯著，0.10、0.20、0.50 mg/L NAA時株高差異不顯著，所以NAA濃度以0.10 mg/L為宜。因此6-BA 0.5 mg/L +NAA 0.1 mg/L 為三葉青增殖培養(yǎng)中最佳激素組合。

2.2 生根培養(yǎng)試驗結(jié)果

從表3可看出，平均根數(shù)隨著IBA濃度升高而升高，當(dāng)IBA濃度達(dá)0.5 mg/L后，趨于平緩，當(dāng)IBA為0.5 mg/L時為最大值4.04；平均根長受IBA影響不大，低濃度時(<0.5 mg/L)的平均根長略大于高濃度時的平均根長。因此 0.5 mg/L為生根試驗最佳IBA濃度。此外，試驗數(shù)據(jù)顯示4個處理的生根率均為100%。由此可見IBA(吲哚丁酸)促進(jìn)三葉青生根的效果顯著。

表1 植物生長調(diào)節(jié)劑對三葉青增殖倍數(shù)的影響

注：數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示處理間差異顯著(P<0.05)。

表2 植物生長調(diào)節(jié)劑對三葉青株高的影響 cm

注：數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示處理間差異顯著(P<0.05)。

表3 IBA對三葉青生根數(shù)量和根長的影響

注：同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示處理間差異顯著(P<0.05)。

2.3 品種和光照試驗結(jié)果

由表4可見，遮光會降低“早生”品種的出芽率、增殖倍數(shù)和株高，對于原始品種影響較??；當(dāng)不做遮光處理時，“早生”品種的株高和節(jié)數(shù)均高于原始品種，其中株高比原始品種高約25%。因此，若生產(chǎn)環(huán)境光照條件良好，可以選用“早生”品種，生長速度較快，生產(chǎn)周期短，株高和節(jié)數(shù)均優(yōu)于原始品種；若生產(chǎn)環(huán)境光照條件不良，則應(yīng)當(dāng)選用原始品種，能夠適應(yīng)陰暗的環(huán)境，各項數(shù)值比較穩(wěn)定，受光照影響較小。

表4 品種和光照對三葉青生長發(fā)育的影響

注：同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示處理間差異顯著(P<0.05)。

2.4 馴化移栽試驗結(jié)果

從圖1可以明顯看出，4周的移栽苗比2周的移栽苗枝葉發(fā)達(dá)，莖干粗壯，生長勢旺盛。移栽2周時，三葉青還未完全適應(yīng)馴化地的環(huán)境，不能及時地吸收水分，葉片不飽滿；等到4周以后，移栽苗已經(jīng)完全適應(yīng)馴化地的環(huán)境，生長勢旺盛。

3 小結(jié)

為了保護(hù)野生資源，維持生物多樣性，建立珍貴藥用植物三葉青的人工繁殖與栽培體系是有效的方法。綜合考慮增殖試驗的增殖倍數(shù)和株高因素，最后判定最佳增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L，比較不同濃度IBA對于生根試驗的影響，最后判定最佳生根培養(yǎng)基為MS+IBA 0.5 mg/L，選擇蛭石、草炭、珍珠巖(3∶6∶1)為移栽苗的混合基質(zhì)。整個育苗過程周期較短，從帶腋芽的莖段開始增殖培養(yǎng)到生根移栽僅需要10周時間，操作簡單，管理方便，為三葉青的規(guī)模化生產(chǎn)提供了初步的規(guī)范化組織培養(yǎng)和栽培方案。

[1] 江華.三葉青的研究進(jìn)展[J].中國保健營養(yǎng)，2013(6)：54-55.

[2] 楊王偉，葉俊英，周瑩瑩，等.中藥資源三葉青應(yīng)用基礎(chǔ)研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2012(23)：79-81.

[3] 陳麗蕓，郭素華.三葉青的化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2012，36(12)：1368-1370.

[4] 杜蘇瑞，向太和，李朦.生物技術(shù)在藥用植物三葉青中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].杭州師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，2012，11(2)：142-145.

[5] 吳浩，彭昕，林言娜，等.三葉青愈傷組織誘導(dǎo)及分化培養(yǎng)基篩選[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2011(21)：121-122，125.

[6] 鐘毓倩.三葉青的組織培養(yǎng)與快速繁殖研究[J].浙江中醫(yī)雜志，2007，42(6)：363.

[7] 符淵淼.藥用植物三葉青的種質(zhì)鑒定和組培快繁研究[D].杭州：浙江大學(xué)，2011.

Establishment of Efficient Micropropagation System ofTetrastigmahemsleyanum

SHAO Jun-hua, SHAO Wei-ping, LIU Yong-li*

(College of Agriculture & Biotechnology, Zhejiang University, Hangzhou, Zhejiang 310012)

[Objective] To study rapid propagation technique ofTetrastigmahemsleyanum. [Method] Using medicinal plantTetrastigmahemsleyanumas experimental material, the effects of plant growth regulators onTetrastigmahemsleyanum’s multiplication and rooting were studied. [Result] The results showed that in 6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L medium,Tetrastigmahemsleyanum’s proliferation rate is the largest; Yet the best rooting medium is MS+IBA 0.5 mg/L. The plants with roots after domestication transplanted to mixed substrate containing vermiculite, peat, perlite (3∶6∶1). After a month, it grow into a healthy plant. [Conclusion] This study established an efficient micropropagation system ofTetrastigmahemsleyanum, providing the technical support to solveTetrastigmahemsleyanum’s needed for artificial cultivation of seedlings.

Tetrastigmahemsleyanum; Tissue culture; Multiplication; Rooting; Domesticated cultivation

玉環(huán)縣科技局科技攻關(guān)項目“玉環(huán)植物種苗快繁技術(shù)及其產(chǎn)業(yè)化”。

邵駿驊(1990-)，男，浙江杭州人，碩士研究生，研究方向：植物生物技術(shù)。*通訊作者，教授，博士，碩士生導(dǎo)師，從事植物生物技術(shù)研究。

2015-11-13

S 567

A

0517-6611(2015)35-208-02