彭尹宣 王興 楊娟 米佳 董雨

天麻Gastrodia elata Bl．是蘭科天麻屬植物天麻的干燥塊莖，主要含有天麻素、天麻苷元等酚類化合物;鉤藤為茜草科植物鉤藤的干燥帶鉤莖枝，主要含有鉤藤堿和異鉤藤堿等生物堿［1］。天麻鉤藤藥對源于治療高血壓病肝陽上亢證的經(jīng)典藥方“天麻鉤藤飲”［2］。研究表明，天麻多糖對天麻素吸收有促進(jìn)作用［3］。本文主要研究天麻多糖對天麻鉤藤藥對中有效成分天麻素吸收的影響。

1 材料與儀器

1．1 動物及試藥

雄性Wistar大鼠63只，體質(zhì)量為(130±20)g，購買于四川大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心。大鼠飼養(yǎng)于通風(fēng)室溫環(huán)境，提供足夠的食物與水。

野生天麻采摘于四川省巴中市，野生鉤藤采摘于四川省安縣曉壩鎮(zhèn)。經(jīng)西南交通大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院宋良科副教授鑒定，分別為蘭科植物天麻的干燥塊莖和茜草科植物鉤藤的干燥帶鉤莖枝，均符合2010版《中華人民共和國藥典》(一部)的規(guī)定。天麻素標(biāo)準(zhǔn)品，購自中國藥品生物制品檢定所(批號:110807-200205);甲醇(色譜純)，購自天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司(批號:20090420);無水乙醇(分析純，廣東汕頭市西隴化工廠，批號:20101022);乙腈(色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號:20090420)。

1．2 儀器

安捷倫Aligent 1260型高效液相色譜儀(安捷倫儀器有限公司);MTN-2800W氮吹濃縮裝置(天津奧特賽恩斯儀器有限公司);WH-3微型漩渦混合儀(上海滬西分析儀器有限公司)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2．1 動物分組

共設(shè)三組，空白組有3只大鼠，剩余60只大鼠隨機(jī)平均分為兩組，分別為天麻鉤藤水煎組和去多糖天麻鉤藤水煎組，每組于 5、10、15、45、60、120、150、180、240、300 分鐘共10 個時間點(diǎn)取血，每個取血點(diǎn)3只大鼠。

2．2 藥液制備

天麻鉤藤提取液:稱取天麻15．0 g，在450 mL蒸餾水中浸泡1小時后進(jìn)行煎煮，煮沸30分鐘后加入20．0 g鉤藤共同煎煮15分鐘，對藥液進(jìn)行抽濾，濾液濃縮成175 mL備用(每毫升含生藥0．2 g)。

去多糖天麻鉤藤液［4］:稱取鉤藤 20．0 g，300 mL蒸餾水煎煮，煮沸15分鐘后將藥液濃縮至100 mL。稱取天麻15．0 g，加入40 mL 75%的無水乙醇回流30分鐘，重復(fù)該步驟進(jìn)行回流，合并兩次煎液，加熱使其揮發(fā)至無醇味，加入少量蒸餾水離心取上清，往上清液中加入40 mL 95%的無水乙醇，攪拌直至無沉淀析出，然后進(jìn)行抽濾，將濾液水浴使其揮發(fā)至無醇味，加入蒸餾水使溶液定容到75 mL合并兩煎液備用(每毫升含生藥0．2 g)。

2．3 動物飼養(yǎng)及給藥

將大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。灌胃前12小時禁食不禁水，末次給藥后按照設(shè)定的時間股動脈取血，空白組灌胃等量生理鹽水。按照陳奇［5］《中藥藥理學(xué)方法》中實(shí)驗(yàn)動物和人用藥量換算出大鼠的給藥量為 2．1 g/(kg·d)生藥。

2．4 血液樣品預(yù)處理

用微量移液器精密吸取0．5 mL血樣轉(zhuǎn)入潔凈試管，加入2 mL甲醇渦旋60秒，于3500 rmp條件下離心10分鐘，取上清液利用氮?dú)獯蹈桑尤?．5 mL重蒸水復(fù)溶，用電子天平準(zhǔn)確稱定重量并記錄，冷藏靜置過夜，用相應(yīng)的復(fù)溶劑補(bǔ)足損失的重量，搖勻后在10000 rmp條件下離心10分鐘，取上清液于試管中待用［6］。

2．5 色譜條件

色譜柱:Agilent SB-C18 4．6 ×250 mm，5 μm;流動相:乙腈 －0．1% 磷酸水溶液(1．6∶98．4);檢測波長:220 nm;柱溫:30℃;流速:1．0 mL/min;進(jìn)樣量:20μL。

2．6 方法學(xué)評價

血樣的標(biāo)準(zhǔn)曲線:取空白血樣0．5 mL，往里面加入不同濃度的天麻素標(biāo)準(zhǔn)液，配制成如下濃度梯度的天麻素血漿標(biāo)品:60、30、12、2．4、0．48、0．24μg/mL，按照 2．4中血樣預(yù)處理方法進(jìn)行處理，然后進(jìn)樣20μL進(jìn)行高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)檢測，以樣品峰面積為橫坐標(biāo)，樣品濃度為縱坐標(biāo)，求得回歸方程為:Y=0．0047X+0．3429，R2=0．9999(X 為天麻素的峰面積，Y為天麻素濃度)，在0．24～60μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。最低檢測限為0．24μg/mL，最高檢測限為60μg/mL。

3 結(jié)果

3．1 各時間點(diǎn)血漿中天麻素含量變化

圖1 各時間點(diǎn)血樣中天麻素的含量

表1 兩組時間點(diǎn)血樣中天麻素含量變化±s)

表1 兩組時間點(diǎn)血樣中天麻素含量變化±s)

時間(min) n 天麻鉤藤組濃度(μg/L)去多糖天麻鉤藤組濃度(μg/L)5 3 726．73 ±59．82 242．44 ±50．46 10 3 703．86 ±18．4 297．34 ±27．44 15 3 544．84 ±29．21 308．92 ±1．95 60 3 479．2 ±13．85 228．15 ±11．4

3．2 藥動學(xué)參數(shù)的計算及分析

應(yīng)用PKSolver軟件采用房室模型對所得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行了分析［7］，所得的藥動學(xué)參數(shù)見表2。由表2可以看出，有多糖組和去多糖組中的天麻素在體內(nèi)的代謝過程有著明顯的差異。在去多糖的天麻鉤藤水煎組中，吸收速率常數(shù)(ka)和達(dá)峰濃度(Cmax)明顯小于天麻鉤藤水煎組，而達(dá)峰時間(Tmax)比天麻鉤藤水煎組長，說明在去除天麻多糖以后，大鼠對天麻素的吸收效率明顯降低;天麻鉤藤水煎組的半衰期明顯比去多糖天麻鉤藤組長，這表明多糖能在一定程度上維持生物體內(nèi)的藥效濃度，增強(qiáng)藥效;且天麻鉤藤水煎組的血漿藥物濃度-時間曲線下面積(AUC)明顯比去多糖天麻鉤藤水煎組大，說明天麻鉤藤水煎組中大鼠血液中天麻素的濃度與時間的比值比去多糖天麻鉤藤水煎組大。綜上說明天麻多糖對天麻鉤藤藥對中的效應(yīng)成分天麻素的吸收具有促進(jìn)作用。

表2 天麻鉤藤水煎組和去多糖天麻鉤藤水煎組的藥動學(xué)參數(shù)

4 討論

本研究得出的結(jié)論證實(shí)了天麻多糖對天麻鉤藤藥對中的天麻素吸收具有促進(jìn)作用，提示多糖對中藥的吸收可能會有一定的促進(jìn)作用，這也在一定程度上證明了傳統(tǒng)中藥多采用水煎煮法的合理性［8］。大部分現(xiàn)代討論中藥制劑在生產(chǎn)過程中將多糖作為雜質(zhì)除去，未考慮不同部位對效應(yīng)成分吸收的影響［9］。多糖對天麻素吸收的促進(jìn)作用的機(jī)制可能與天麻多糖對P450酶系及腸道、肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白有誘導(dǎo)或促進(jìn)作用有關(guān)［10］，但具體的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步的研究分析。

［1］ 國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)［M］．北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:3．

［2］ 胡光慈．中醫(yī)內(nèi)科雜病證治新義［M］．成都:四川人民出版社，1958:7-10．

［3］ 吳向東，王興，楊娟，等．天麻多糖對天麻素吸收的影響［J］．成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2012，7(4):551-553．

［4］ 張夢娟，徐懷德，牛素哲，等．天麻多糖水提取工藝優(yōu)化研究［J］．食品工業(yè)科技，2006，11:119-121．

［5］ 陳奇．中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法［M］．上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1994:207．

［6］ 金紅，李鳳，段寧．天麻提取物工藝及其功效成分含量的分析［J］．中藥材，2009，32(5):799-802．

［7］ 謝海棠，黃曉暉，孫瑞元．國內(nèi)外常用的藥代動力學(xué)軟件介紹［J］．中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2001，6(4):289-292．

［8］ 李瑩，李曉倩，王興，等．天麻與鉤藤配伍前后天麻素在SHR大鼠肝臟和腎臟的分布與歸經(jīng)探討［J］．中國藥房，2011，22(43):4036-4038．

［9］ 繆化春，沈業(yè)壽．天麻多糖的降血壓作用［J］．高血壓雜志，2006，14(7):531-533．

［10］ 李曉倩，王興，李瑩，等．天麻與鉤藤配伍前后對SHR大鼠腎臟相關(guān)基因表達(dá)的影響［J］．中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17(15):131-135．