亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        養(yǎng)陰活胃合劑對(duì)慢性萎縮性胃炎模型大鼠胃黏膜淋巴細(xì)胞瘤-2基因和三葉因子1表達(dá)的影響

        2015-03-26 08:31:08陳彥竹何小艷曾斌芳
        環(huán)球中醫(yī)藥 2015年12期
        關(guān)鍵詞:養(yǎng)陰合劑空白對(duì)照

        陳彥竹 何小艷 曾斌芳

        慢性萎縮性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)為胃癌前變化的最初階段,國(guó)內(nèi)臨床報(bào)道中藥可以阻斷或逆轉(zhuǎn)胃癌的癌前病變[1]。CAG病因復(fù)雜,具有病程長(zhǎng)、反復(fù)發(fā)作的特點(diǎn)。經(jīng)過(guò)多年臨床驗(yàn)證總結(jié)出養(yǎng)陰活胃合劑方,可改善CAG患者臨床癥狀,能夠改善局部病理以及逆轉(zhuǎn)胃黏膜的病理狀態(tài),使病變胃黏膜趨于正常,對(duì)治療慢性萎縮性胃炎有良好效果[2],為了探討該方對(duì)CAG的作用機(jī)制,本研究團(tuán)隊(duì)?wèi)?yīng)用該方對(duì)動(dòng)物模型進(jìn)行了研究,觀察其對(duì)CAG大鼠胃黏膜細(xì)胞相關(guān)因子B淋巴細(xì)胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和三葉因子 1(trefoil factor 1,TFF1)基因表達(dá)的影響,并探討其可能的機(jī)制。

        1 材料與方法

        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

        清潔級(jí)成年雄性Wistar大鼠96只,體質(zhì)量150~200 g,標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料,均由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供[許可證號(hào):SCXK(新)2003-0001]。

        1.2 藥物及給藥方法

        中藥養(yǎng)陰活胃合劑組成:阿魏、蘆根、白術(shù)、茯苓、雞內(nèi)金、莪術(shù)各15 g、海螵蛸30 g、旋覆花10 g、炙遠(yuǎn)志、砂仁、炙甘草各6 g。由新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)藥研究院提供水煎劑。模型復(fù)制成功后除空白對(duì)照組常規(guī)飼養(yǎng)、自由進(jìn)食水外,模型組繼續(xù)施加上述造模因素,養(yǎng)陰活胃合劑高、中、低劑量組分別喂飼水煎劑2.22 g/(kg·d)、1.48 g/(kg·d)和 0.74 g/(kg·d),陽(yáng)性藥物對(duì)照組予維酶素0.86 g/(kg·d)灌胃,共12周。

        1.3 主要試劑與儀器

        (今寧)維酶素片(湖北綠金子藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn),批號(hào):120901);無(wú)水乙醇(天津市靜??h大邱莊工業(yè)園區(qū)生產(chǎn),批號(hào):20131106);水楊酸鈉(天津市化學(xué)試劑三廠生產(chǎn),批號(hào):20070916);兔抗Bcl-2多抗IgG,免疫組化試劑盒為英國(guó)abcam公司產(chǎn)品;兔抗TFF1多抗IgG,免疫組化試劑盒為美國(guó)GeneTex公司產(chǎn)品。

        TD5AWS臺(tái)式離心機(jī)(長(zhǎng)沙湘儀離心儀器有限公司);電熱恒溫培養(yǎng)箱DNP-9162(上海躍進(jìn)醫(yī)用光學(xué)儀器廠)。

        1.4 模型制備

        將實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為6組,即空白對(duì)照組,模型組,陽(yáng)性藥物對(duì)照組,中藥高、中、低劑量組,每組16只。大鼠顆粒飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,空白對(duì)照組常規(guī)飼養(yǎng)、自由進(jìn)食水,其余5組將2 g水楊酸鈉加入100 mL的30%乙醇溶液中,給大鼠灌胃3 mL/d,灌胃前1小時(shí)禁食、禁水;再配合隔日進(jìn)食不禁水法,直到12周造模結(jié)束。每組處死2只大鼠,觀察胃黏膜腸上皮化生和萎縮情況,以證實(shí)CAG造模成功。

        1.5 取材及標(biāo)本處理

        末次給藥后禁食不禁水24小時(shí),5%戊巴比妥麻醉大鼠,剖取全胃,沿胃大彎側(cè)剖胃腔,作大體觀察,以4%多聚甲醛溶液固定,常規(guī)取材,石蠟包埋,切片,HE染色,光鏡下組織形態(tài)觀察。

        1.6 Bcl-2與TFF1免疫組化染色方法

        采用通用型二步法免疫組化法檢測(cè)。石蠟切片脫蠟至水洗;3%H2O2去除內(nèi)源性過(guò)氧化氫酶,PBS液沖洗3次,蒸餾水洗3次;枸櫞酸鈉緩沖液修復(fù)抗原,PBS沖洗3次,蒸餾水洗3次;加入山羊血清封閉非特異性抗原;一抗按照適當(dāng)比例稀釋滴入(以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照),4℃冰箱孵育過(guò)夜,次日37℃下復(fù)溫30分鐘,PBS沖洗3次;滴加通用型二抗,37℃溫箱孵育25分鐘,PBS洗滌3次;DAB顯色3~5分鐘,蘇木素復(fù)染10秒,蒸餾水沖洗返藍(lán);各級(jí)乙醇脫水;二甲苯透明,中性樹膠封固,顯微鏡下觀察。各指標(biāo)結(jié)果用標(biāo)記指數(shù)(u)表示:LI:陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)×100%。在高倍鏡下選取5個(gè)有代表性的視野,每個(gè)視野記數(shù)100個(gè)細(xì)胞,計(jì)算各指標(biāo)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率。

        1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

        應(yīng)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差±s)表示,采用單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,經(jīng)檢驗(yàn)數(shù)據(jù)服從正態(tài)分布且方差齊,組間比較采用LSD法,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 大鼠胃組織肉眼觀察比較

        空白對(duì)照組大鼠胃黏膜柔軟,表面較多黏液,皺襞面光滑,胃壁彈性良好,呈橘紅色。模型組大鼠胃黏膜薄弱粗糙,灰白色澤,表面黏液減少,可見細(xì)小顆粒和結(jié)節(jié),亦可見黏膜糜爛出血,皺襞變細(xì),胃壁彈性減低,養(yǎng)陰活胃合劑組及陽(yáng)性藥維酶素組部分胃黏膜基本恢復(fù)正常,以養(yǎng)陰活胃合劑組為明顯。

        2.2 胃組織形態(tài)觀察比較

        空白對(duì)照組大鼠胃黏膜厚度正常,黏膜上皮層呈單層柱狀,上皮細(xì)胞及腺體排列整齊,大小形狀較為一致,固有層可見少許嗜酸性粒細(xì)胞散在,無(wú)增生和化生現(xiàn)象,肌層未見明顯變化。模型組胃黏膜固有層腺體均有不同程度減少,胃黏膜固有層變薄,黏膜下層充血、水腫,黏膜固有層下部局灶性淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)較明顯,可見黏膜肌層增厚,胃幽門部位腺體結(jié)構(gòu)不完整,腸上皮化生。陽(yáng)性藥物對(duì)照組胃黏膜較薄,固有層腺體有輕度減少,淋巴細(xì)胞灶性浸潤(rùn)。中藥高劑量組胃黏膜基本正常,腺體排列較規(guī)整,可見散在淋巴細(xì)胞灶性浸潤(rùn),未見腸上皮化生。見圖1。說(shuō)明養(yǎng)陰活胃合劑與陽(yáng)性藥物對(duì)照組均能改善胃黏膜的病理形態(tài),但以養(yǎng)陰活胃合劑效果為佳。

        2.3 各組大鼠胃黏膜Bcl-2免疫組化染色統(tǒng)計(jì)的比較

        Bcl-2蛋白陽(yáng)性反應(yīng)物質(zhì)呈棕黃色顆粒,主要位于細(xì)胞漿內(nèi)??瞻讓?duì)照組大鼠胃黏膜有極少量陽(yáng)性細(xì)胞染色為細(xì)胞質(zhì)染色,細(xì)胞核有少量表達(dá);陽(yáng)性藥物對(duì)照組和中藥高、中劑量組大鼠胃黏膜部分細(xì)胞可見黃色、褐色程度不同的染色,與模型組比較染色較淺;模型組染色最重。見圖2。

        圖1 大鼠胃黏膜組織HE染色病理切片(HE×200)

        圖2 各組大鼠胃黏膜中Bcl-2蛋白的表達(dá)情況(×200)

        采用陽(yáng)性著色細(xì)胞計(jì)數(shù)法,統(tǒng)計(jì)結(jié)果:與空白對(duì)照組比較,各組Bcl-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率均明顯升高(P<0.05);與模型組比較,中藥高、中劑量組和陽(yáng)性藥物對(duì)照組Bcl-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率均明顯降低(P<0.05);與陽(yáng)性藥物對(duì)照組比較,中藥高劑量組Bcl-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);中藥高、中、低劑量組間比較,中藥低劑量組Bcl-2明顯高于中藥高、中劑量組(P<0.05)。見表1。

        2.4 各組大鼠胃黏膜TFF1免疫組化染色統(tǒng)計(jì)的比較

        TFF1主要表達(dá)于胃黏膜腺體細(xì)胞胞漿中,細(xì)胞膜及細(xì)胞核中有少量表達(dá)??瞻讓?duì)照組大鼠胃黏膜腺體細(xì)胞胞漿有大量陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá),核周聚焦明顯,呈棕黃色,染色最深見于接近腔面的細(xì)胞;陽(yáng)性藥物對(duì)照組和中藥組大鼠胃黏膜部分細(xì)胞可見黃色程度不等的染色,與模型組比較染色較重;模型組染色最輕。見圖3。

        表1 各組大鼠胃黏膜Bcl-2和TFF1陽(yáng)性表達(dá)率的比較±s,表達(dá)率/%)

        表1 各組大鼠胃黏膜Bcl-2和TFF1陽(yáng)性表達(dá)率的比較±s,表達(dá)率/%)

        注:與模型組比較,a P<0.05;與空白對(duì)照組比較,b P<0.05;與陽(yáng)性藥物對(duì)照組比較,c P<0.05;與中藥低劑量組比較,d P<0.05。

        14 18.08 ±1.62 95.66 ±1.7陽(yáng)性藥物對(duì)照組 13 37.45 ±2.69ab 89.40 ±2.45ab模型組 11 43.41 ±3.14b 84.00 ±2.79b中藥高劑量組 12 32.25 ±2.59abcd 93.33 ±4.18acd中藥中劑量組 12 34.90 ±3.28abd 90.90 ±5.76abd中藥低劑量組 13 40.54 ±7.03b 86.68 ±5.01陽(yáng)性空白對(duì)照組組別 n Bcl-2陽(yáng)性 TFF1 b

        圖3 各組大鼠胃黏膜中TFF1蛋白的表達(dá)情況(×200)

        采用陽(yáng)性著色細(xì)胞計(jì)數(shù)法,統(tǒng)計(jì)結(jié)果:與空白對(duì)照組比較,除中藥高劑量組接近于空白對(duì)照組外(P>0.05),其余各組TFF1陽(yáng)性表達(dá)率均明顯降低(P<0.05);與模型組比較,中藥高、中劑量組和陽(yáng)性藥物對(duì)照組TFF1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率均明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與陽(yáng)性藥物對(duì)照組比較,中藥高劑量組TFF1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯升高(P<0.05);中藥高、中、低劑量組間比較,中藥低劑量組TFF1陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于中藥高、中劑量組(P <0.05)。見表1。

        3 討論

        CAG多由慢性淺表性胃炎演變而成,是導(dǎo)致胃癌發(fā)生的重要原因。其病情遷延反復(fù)難愈,兼于長(zhǎng)期的病理?yè)p傷本身、內(nèi)傷外邪等諸多因素而導(dǎo)致血絡(luò)瘀阻。本實(shí)驗(yàn)中養(yǎng)陰活胃合劑能夠改善大鼠腺體萎縮情況,使病變胃黏膜趨于正常,對(duì)CAG大鼠有良好治療作用。方中蘆根養(yǎng)陰和胃降逆,配伍白術(shù)、茯苓健脾助運(yùn),加之阿魏消積散痞,莪術(shù)可活血行氣止痛,旋復(fù)花、炙遠(yuǎn)志兼顧疏肝理氣、化痰通絡(luò),合雞內(nèi)金、砂仁消食和胃,諸藥配合,標(biāo)本兼顧,共奏養(yǎng)陰活血,化痰和胃之功。

        臨床資料證實(shí)胃癌前狀態(tài)和胃癌組織中TFF1的表達(dá)明顯下調(diào),可能是胃黏膜惡變的早期事件之一[3]。TFF1作為三葉因子家族成員之一,具有保護(hù)胃腸道黏膜、促進(jìn)細(xì)胞遷移和黏膜修復(fù)的重要作用。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),中藥組TFF1陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于其他各組,提示養(yǎng)陰活胃合劑可能通過(guò)增加胃黏膜TFF1表達(dá)而起到治療慢性萎縮性胃炎的作用,從而抑制腫瘤的產(chǎn)生。Bcl-2是Tsujimoro等人在1985年最先從濾泡性非霍奇金淋巴瘤中分離出來(lái)的一個(gè)抗凋亡基因。轉(zhuǎn)基因研究表明,Bcl-2為致癌基因,主要通過(guò)抑制線粒體依賴性凋亡通路被激活的功能達(dá)到抑制細(xì)胞凋亡和延長(zhǎng)細(xì)胞壽命的作用造成腫瘤細(xì)胞堆積[4]。本研究發(fā)現(xiàn)模型組大鼠胃竇黏膜Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)明顯升高,經(jīng)養(yǎng)陰活胃合劑干預(yù)后,中藥高、中劑量組及陽(yáng)性藥物對(duì)照組Bcl-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)均呈減少趨勢(shì),表明養(yǎng)陰活胃合劑能不同程度地下調(diào)Bcl-2蛋白表達(dá),可能在一定程度上促使胃黏膜上皮細(xì)胞細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡平衡,改善甚至逆轉(zhuǎn)CAG胃黏膜的病理狀態(tài)。

        綜上所述,通過(guò)本研究提示養(yǎng)陰活胃合劑可明顯降低Bcl-2和增強(qiáng)TFF1的表達(dá),通過(guò)保護(hù)胃黏膜細(xì)胞,阻止癌前病變進(jìn)一步發(fā)展,促使病變胃黏膜恢復(fù)正常,起到改善甚至逆轉(zhuǎn)CAG病變的作用。

        [1] 王文,張仲海,夏天.消萎靈對(duì)大鼠胃黏膜癌前病變的逆轉(zhuǎn)作用[J].新中醫(yī),1999,31(7):39-40.

        [2] 戴明,丁國(guó)寧,雷云霞,等.養(yǎng)陰活胃合劑治療慢性萎縮性胃炎患者胃鏡組織學(xué)影響[J].陜西中醫(yī),2013,7(9):34.

        [3] 石淑青,蔡建庭.三葉因子Ⅰ和Ⅱ在胃癌和癌前狀態(tài)中的表達(dá)[J].中華內(nèi)科雜志,2004,43(3):195-198.

        [4] Mariano M T,Moritti I,Donelli A,et al.Bcl-2 gene expression in hemato poietic cell differentiation[J].Blood,1997,80:768-775.

        猜你喜歡
        養(yǎng)陰合劑空白對(duì)照
        白露秋分 潤(rùn)燥養(yǎng)陰
        中老年保健(2021年9期)2021-08-24 03:51:46
        立冬補(bǔ)冬 小雪養(yǎng)陰
        例析陰性對(duì)照與陽(yáng)性對(duì)照在高中生物實(shí)驗(yàn)教學(xué)中的應(yīng)用
        石硫合劑熬制與保存
        河北果樹(2020年2期)2020-05-25 06:58:58
        冬季如何補(bǔ)腎護(hù)陽(yáng)、潤(rùn)燥養(yǎng)陰
        HPLC法同時(shí)測(cè)定退銀合劑中6種成分
        中成藥(2018年5期)2018-06-06 03:11:54
        過(guò)表達(dá)H3K9me3去甲基化酶對(duì)豬克隆胚胎體外發(fā)育效率的影響(內(nèi)文第 96 ~ 101 頁(yè))圖版
        HPLC法同時(shí)測(cè)定二陳合劑中8種成分
        中成藥(2017年7期)2017-11-22 07:33:11
        Identifying vital edges in Chinese air route network via memetic algorithm
        養(yǎng)陰宣肺湯治療干眼的臨床療效評(píng)價(jià)
        久久香蕉国产线熟妇人妻| 白色白色白色在线观看视频| 中文字幕第一页人妻丝袜| 国产做国产爱免费视频| 国产精品免费久久久久影院| 男女高潮免费观看无遮挡| 国产蜜桃传媒在线观看| 国产高清av在线播放| 久久午夜伦鲁片免费无码| 久久道精品一区二区三区| 中国黄色偷拍视频二区| 亚洲av不卡无码国产| 亚洲av无码一区二区三区四区 | av国产自拍在线观看| 波多野结衣av一区二区全免费观看 | 挺进朋友人妻雪白的身体韩国电影 | 久久亚洲中文字幕无码| 精品亚洲一区二区99| av中文字幕一区人妻| 无码区a∨视频体验区30秒| 97色伦图片97综合影院久久| 亚洲av第一区综合激情久久久 | 国产在线精品一区二区在线看| 97人妻碰免费视频| 亚洲成av人片在久久性色av| 亚洲欧洲av综合色无码| 乱人伦视频中文字幕| 国产精品久久久久免费看 | 四虎成人精品在永久免费| 四房播播在线电影| 涩涩国产在线不卡无码| 亚洲一区二区三区高清在线观看| 国产成人精品一区二区三区视频| 国产精品亚洲专区无码web | 国产真实乱对白在线观看| 午夜视频一区二区三区四区| 国产成人精品午夜视频| 久草午夜视频| 国产午夜三级精品久久久| 欧美成人精品a∨在线观看 | 亚洲精品综合色区二区|