朱迪，譚丹，侯靖宇，向文英，王愛民，3，蘭燕宇，3，鄭林，3＊＊

(1.貴陽醫(yī)學(xué)院貴州省藥物制劑重點實驗室，貴州貴陽550004;2.貴陽醫(yī)學(xué)院民族藥與中藥開發(fā)應(yīng)用教育部工程研究中心，貴州貴陽

550004;3.貴陽醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，貴州貴陽550004)

“參芎葡萄糖注射液”為上市的中藥注射劑品種，由丹參和鹽酸川芎嗪配伍組成，具有抗血小板聚集，擴張冠狀動脈作用，臨床用于閉塞性腦血管病及其它缺血性血管疾病的治療［1-3］。參芎葡萄糖注射液現(xiàn)行質(zhì)量標準僅對丹參素和鹽酸川芎嗪進行定量控制，難以全面控制產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量。為進一步完善參芎葡萄糖注射液質(zhì)量控制方法，達到《中藥、天然藥物注射劑基本技術(shù)要求》所規(guī)定的“多成份制成的注射劑，所測成份應(yīng)大于總固體量的80%”要求，本研究建立了參芎葡萄糖注射液總糖的含量測定方法，為產(chǎn)品的質(zhì)量控制與綜合評價提供科學(xué)的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

紫外可見分光光度計(日本島津公司，UV 2401)，超聲波清洗器(250 W，頻率27～34 kHz;北京醫(yī)療設(shè)備二廠)，AE240十萬分之一電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)，超純水機(四川沃特爾科技發(fā)展有限公司)，TAISITE水浴鍋，移液槍(1 000μL，Eppendorf)。D-無水葡萄糖(批號111506，中國食品藥品檢定研究院)，蒽酮(30015014，國藥集團化學(xué)試劑有限公司)，濃硫酸［20131201，重慶川東化工(集團)有限公司］。8個不同批次的參芎葡萄糖注射液(批號為:20131125-1，20131125-2，20130979-1，20130979-2，20131104-1，20131104-2，20131211-1，20131211-2)均由貴州景峰注射劑有限公司提供。

1.2 總糖含量測定方法

1.2.1 溶液的制備對照品溶液的制備:精密量取D-無水葡萄糖20 mg，置100 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，得對照品溶液。供試品溶液制備:取注射液1 mL，加水定容至50 mL，搖勻后，再取1 mL加水定容至50 mL，得供試品溶液A，取供試品溶液A 2 mL，加入8 mL蒽酮試劑，搖勻后，沸水浴加熱10 min，放至室溫后，冰浴冷卻5 min后，室溫放至10 min?？瞻兹芤褐苽?取純化水2 mL于離心管中，加入8 mL蒽酮試劑，搖勻后，沸水浴加熱10 min，放至室溫后，冰浴冷卻5 min后，室溫放至10 min。蒽酮試劑的制備:取0.2 g蒽酮，加濃硫酸至100 mL，即配即用。

1.2.2 檢測波長以水為參比，分別于紫外可見分光光度計上對標準系列溶液和供試品溶液進行全掃描，對照品溶液最大吸收波長為620 nm，供試品溶液最大吸收波長為625 nm，二者紫外光譜和最大吸收波長基本一致，故確定參芎葡萄糖注射液中總糖含量的測定波長為620 nm。對照品和供試品紫外光譜，見圖1，空白紫外光譜，見圖2。

圖1 對照品和供試品紫外光譜圖Fig.1 UV spectrogram of standards and samples

圖2 空白紫外光譜圖Fig.2 UV spectrogram of blank

1.3 方法學(xué)考察

1.3.1 線性關(guān)系用移液槍量取取對照品溶液0.40、0.60、0.80、1.00、1.50至10 mL離心管中，再用移液槍加水至2 mL，搖勻后，加入8 mL蒽酮試劑，搖勻后，沸水浴加熱10 min，放至室溫后，冰浴冷卻5 min后，室溫放至10 min，即得對照品工作液。分別取對照品工作液，以水為參比溶液，在620 nm波長處測定吸光度，以濃度C為橫坐標，吸光度A為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程為A=35.500 C-0.041 80，r=0.999 3，結(jié)果表明葡萄糖對照品濃度在0.008～0.03 g/L范圍內(nèi)與溶液的吸光度之間呈良好的線性關(guān)系。

1.3.2 精密度試驗取同一濃度的對照品工作液(0.025 g/L)，按上述建立的紫外分光光度法連續(xù)測定6次吸光度值，結(jié)果6次測定值的RSD為0.79%，說明儀器精密度良好。

1.3.3 重復(fù)性試驗取同一批號參芎葡萄糖注射液(批號為:20131125-1)6份，按“1.2.1”項下方法制備供試品溶液，分別測定吸光度值并計算含量，結(jié)果6次測定值的RSD為2.7%，說明此方法的重復(fù)性良好。

1.3.4 穩(wěn)定性試驗精密稱取重復(fù)性試驗項下參芎葡萄糖注射液，按“1.2.1”項下方法制備供試品溶液，按上述建立的紫外分光光度法，分別于0，1，2，4，6，8，24 h測定吸光度值，結(jié)果供試品溶液中總糖含量的RSD為2.5%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

1.3.5 回收率試驗精密稱取重復(fù)性試驗項下參芎葡萄糖注射液9份，每份0.5 mL，分別精密加入葡糖糖對照品溶液適量，按“1.2.1”項下方法制備供試品溶液，按上述建立的紫外分光光度法測定吸光度值并計算總糖的含量，結(jié)果表明:9份供試品加樣回收率結(jié)果在98.17%～108.13%之間，RSD為2.9%，說明此方法具有良好的回收率，見表1。

表1 回收率試驗結(jié)果Tab.1 Test results of recovery

1.4 樣品測定

8批參芎葡萄糖注射液，按“1.2.1”項下方法制備供試品溶液，按上述建立的紫外分光光度法測定吸光度值，分別計算供試品溶液中總糖含量，結(jié)果見表2。

2 討論

目前測定總糖的方法有苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法，苯酚-硫酸法中苯酚需要進行蒸餾后才能使用，污染較大，穩(wěn)定性差，線性關(guān)系不好且重現(xiàn)性差［4-14］。因此本研究采用蒽酮-硫酸法對參芎葡萄糖注射液進行總糖含量測定，研究結(jié)果表明線性關(guān)系理想，重現(xiàn)性、穩(wěn)定性均良好，結(jié)果準確可靠，且簡便可行。

表2 8批參芎葡萄糖注射液中總糖含量測定結(jié)果Tab.2 Determination results of total sugar in 8 battle of Shenxiong glucose injection

為更好的反映參芎葡萄糖注射液的內(nèi)在質(zhì)量，本研究對參芎葡萄糖注射液中主總糖進行了測定，探討和建立科學(xué)、可靠、簡便的總糖定量測定方法。建立的紫外可見光分光光度法，經(jīng)方法學(xué)考察，該方法可以較為簡便、快速、準確地測定參芎葡萄糖注射液中總糖的含量，可為參芎葡萄糖注射液的質(zhì)量評價提供檢測標準。

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