朱迪，譚丹，侯靖宇，向文英，王愛民，3，蘭燕宇，3，鄭林，3＊＊

(1.貴陽醫(yī)學(xué)院貴州省藥物制劑重點實驗室，貴州貴陽550004;2.貴陽醫(yī)學(xué)院民族藥與中藥開發(fā)應(yīng)用教育部工程研究中心，貴州貴陽

550004;3.貴陽醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，貴州貴陽550004)

“參芎葡萄糖注射液”為上市的中藥注射劑品種，由丹參和鹽酸川芎嗪配伍組成，具有抗血小板聚集，擴(kuò)張冠狀動脈作用，臨床用于閉塞性腦血管病及其它缺血性血管疾病的治療［1-3］。參芎葡萄糖注射液現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅對丹參素和鹽酸川芎嗪進(jìn)行定量控制，難以全面控制產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量。為進(jìn)一步完善參芎葡萄糖注射液質(zhì)量控制方法，達(dá)到《中藥、天然藥物注射劑基本技術(shù)要求》所規(guī)定的“多成份制成的注射劑，所測成份應(yīng)大于總固體量的80%”要求，本研究建立了參芎葡萄糖注射液總糖的含量測定方法，為產(chǎn)品的質(zhì)量控制與綜合評價提供科學(xué)的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

紫外可見分光光度計(日本島津公司，UV 2401)，超聲波清洗器(250 W，頻率27～34 kHz;北京醫(yī)療設(shè)備二廠)，AE240十萬分之一電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)，超純水機(jī)(四川沃特爾科技發(fā)展有限公司)，TAISITE水浴鍋，移液槍(1 000μL，Eppendorf)。D-無水葡萄糖(批號111506，中國食品藥品檢定研究院)，蒽酮(30015014，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，濃硫酸［20131201，重慶川東化工(集團(tuán))有限公司］。8個不同批次的參芎葡萄糖注射液(批號為:20131125-1，20131125-2，20130979-1，20130979-2，20131104-1，20131104-2，20131211-1，20131211-2)均由貴州景峰注射劑有限公司提供。

1.2 總糖含量測定方法

1.2.1 溶液的制備對照品溶液的制備:精密量取D-無水葡萄糖20 mg，置100 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，得對照品溶液。供試品溶液制備:取注射液1 mL，加水定容至50 mL，搖勻后，再取1 mL加水定容至50 mL，得供試品溶液A，取供試品溶液A 2 mL，加入8 mL蒽酮試劑，搖勻后，沸水浴加熱10 min，放至室溫后，冰浴冷卻5 min后，室溫放至10 min。空白溶液制備:取純化水2 mL于離心管中，加入8 mL蒽酮試劑，搖勻后，沸水浴加熱10 min，放至室溫后，冰浴冷卻5 min后，室溫放至10 min。蒽酮試劑的制備:取0.2 g蒽酮，加濃硫酸至100 mL，即配即用。

1.2.2 檢測波長以水為參比，分別于紫外可見分光光度計上對標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和供試品溶液進(jìn)行全掃描，對照品溶液最大吸收波長為620 nm，供試品溶液最大吸收波長為625 nm，二者紫外光譜和最大吸收波長基本一致，故確定參芎葡萄糖注射液中總糖含量的測定波長為620 nm。對照品和供試品紫外光譜，見圖1，空白紫外光譜，見圖2。

圖1 對照品和供試品紫外光譜圖Fig.1 UV spectrogram of standards and samples

圖2 空白紫外光譜圖Fig.2 UV spectrogram of blank

1.3 方法學(xué)考察

1.3.1 線性關(guān)系用移液槍量取取對照品溶液0.40、0.60、0.80、1.00、1.50至10 mL離心管中，再用移液槍加水至2 mL，搖勻后，加入8 mL蒽酮試劑，搖勻后，沸水浴加熱10 min，放至室溫后，冰浴冷卻5 min后，室溫放至10 min，即得對照品工作液。分別取對照品工作液，以水為參比溶液，在620 nm波長處測定吸光度，以濃度C為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程為A=35.500 C-0.041 80，r=0.999 3，結(jié)果表明葡萄糖對照品濃度在0.008～0.03 g/L范圍內(nèi)與溶液的吸光度之間呈良好的線性關(guān)系。

1.3.2 精密度試驗取同一濃度的對照品工作液(0.025 g/L)，按上述建立的紫外分光光度法連續(xù)測定6次吸光度值，結(jié)果6次測定值的RSD為0.79%，說明儀器精密度良好。

1.3.3 重復(fù)性試驗取同一批號參芎葡萄糖注射液(批號為:20131125-1)6份，按“1.2.1”項下方法制備供試品溶液，分別測定吸光度值并計算含量，結(jié)果6次測定值的RSD為2.7%，說明此方法的重復(fù)性良好。

1.3.4 穩(wěn)定性試驗精密稱取重復(fù)性試驗項下參芎葡萄糖注射液，按“1.2.1”項下方法制備供試品溶液，按上述建立的紫外分光光度法，分別于0，1，2，4，6，8，24 h測定吸光度值，結(jié)果供試品溶液中總糖含量的RSD為2.5%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

1.3.5 回收率試驗精密稱取重復(fù)性試驗項下參芎葡萄糖注射液9份，每份0.5 mL，分別精密加入葡糖糖對照品溶液適量，按“1.2.1”項下方法制備供試品溶液，按上述建立的紫外分光光度法測定吸光度值并計算總糖的含量，結(jié)果表明:9份供試品加樣回收率結(jié)果在98.17%～108.13%之間，RSD為2.9%，說明此方法具有良好的回收率，見表1。

表1 回收率試驗結(jié)果Tab.1 Test results of recovery

1.4 樣品測定

8批參芎葡萄糖注射液，按“1.2.1”項下方法制備供試品溶液，按上述建立的紫外分光光度法測定吸光度值，分別計算供試品溶液中總糖含量，結(jié)果見表2。

2 討論

目前測定總糖的方法有苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法，苯酚-硫酸法中苯酚需要進(jìn)行蒸餾后才能使用，污染較大，穩(wěn)定性差，線性關(guān)系不好且重現(xiàn)性差［4-14］。因此本研究采用蒽酮-硫酸法對參芎葡萄糖注射液進(jìn)行總糖含量測定，研究結(jié)果表明線性關(guān)系理想，重現(xiàn)性、穩(wěn)定性均良好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，且簡便可行。

表2 8批參芎葡萄糖注射液中總糖含量測定結(jié)果Tab.2 Determination results of total sugar in 8 battle of Shenxiong glucose injection

為更好的反映參芎葡萄糖注射液的內(nèi)在質(zhì)量，本研究對參芎葡萄糖注射液中主總糖進(jìn)行了測定，探討和建立科學(xué)、可靠、簡便的總糖定量測定方法。建立的紫外可見光分光光度法，經(jīng)方法學(xué)考察，該方法可以較為簡便、快速、準(zhǔn)確地測定參芎葡萄糖注射液中總糖的含量，可為參芎葡萄糖注射液的質(zhì)量評價提供檢測標(biāo)準(zhǔn)。

［1］王珊珊，劉艷紅.參芎葡萄糖注射液活血化瘀及耐缺氧將效應(yīng)研究［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)志，2014(4):358-362.

［2］陳興堅，劉建紅.參芎葡萄糖注射液的臨床應(yīng)用進(jìn)展［J］.中國實用醫(yī)藥，2010(13):247-249.

［3］李達(dá)文，龔惠，葉勇，等.參芎葡萄糖注射液對缺血再灌注損傷心肌的保護(hù)作用［J］.中國分子心臟病學(xué)雜志，2012(1):51-56.

［4］鄭林，龐秀清，蘭燕宇，等.UFLC法同時測定參芎葡萄糖注射液中6種主要成分［J］.中成藥，2012(7):1276-1279.

［5］鄭林，龐秀清，黃勇，等.參芎葡萄糖注射液的UFLC指紋圖譜研究［J］.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2013(6):611-614.

［6］張鈺，覃容貴，安東琴，等.紫外可見分光光度法測定深裂竹根七多糖的含量［J］.貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2014(3):371.

［7］王歡，盧紅梅，張義明，等.固態(tài)發(fā)酵食醋中還原糖、總糖含量測定［J］.中國釀造，2011(9):172-175.

［8］翁霞，辛光，李云霞.蒽酮比色法測定馬鈴薯淀粉總糖的條件研究［J］.食品研究與開發(fā)，2013(17):86-88.

［9］郭雷，呂明生，王淑軍等.苯酚-硫酸法測定櫻桃酒中總糖［J］.食品研究與開發(fā)，2010(6):130-132.

［10］陳煥娜，劉洋，趙曉霞，等.分光光度法測定丹參總酚含量方法的研究［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2010(8):19-22.

［11］陳農(nóng)，丁寧，彭國平，等.兩種方法測定丹參滴注液糖類含量［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報，2013(5):672-674.

［12］阮鳴.冠心寧注射液中大類成分的含量測定［J］.南京曉莊學(xué)院學(xué)報，2013(3):71-75.

［13］李萌，劉新國，吳金虎，等.前愈復(fù)方中多糖成分的提取工藝優(yōu)選［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2011(24):2018-2021.

［14］孫淑玲，劉坤，楊新濤.關(guān)于食品中總糖測定中幾個問題的探討［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2013(13):2852-2853.