姚文蓮，徐 薪

肺癌表皮生長因子受體突變與甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1表達的相關性探討

姚文蓮，徐 薪

目的 探討肺癌中表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)突變狀態(tài)與甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1(thyroid transcription factor-1，TTF-1)表達，以及與臨床病理特征之間的關系。方法 收集40例手術切除肺癌標本，采用擴增阻滯預編系統(tǒng)(ARMS)法和PCR技術檢測肺癌組織中EGFR基因的突變情況。分析肺癌的臨床病理特征、腫瘤組織學類型與EGFR突變的關系。結(jié)果 40例中，EGFR基因突變概率為57.5%(23/40)，且突變率因性別、吸煙史、腫瘤組織學類型及TTF-1表達的不同而具有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。結(jié)論 肺癌中EGFR基因的突變狀態(tài)與TTF-1表達、組織學類型、患者性別、吸煙史有關。TTF-1強表達的女性、不吸煙的腺癌患者中EGFR具有更高的突變率。

肺癌；表皮生長因子受體；甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子；病理學特征

目前，肺癌在所有腫瘤中發(fā)病率排第2位，同時也是惡性腫瘤中病死率最高的[1]。有研究報道，每年有超過160萬新增病例及130萬新添死亡病例[2]。隨著環(huán)境因素改變和生活壓力增加，其發(fā)病率持續(xù)居高不下。目前，針對肺癌的治療主要限于手術、放化療及其他的輔助治療。而早期發(fā)現(xiàn)，選擇敏感有效的個體化治療方法是延長患者生存時間和降低病死率的最有效途徑?，F(xiàn)如今，酪氨酸激酶抑制藥(TKI)治療晚期非小細胞肺癌效果可靠，而EGFR基因的突變被認為是選擇和預測EGFR TKI療效的最強生物指標。目前，研究肺癌EGFR突變和以EGFR突變來預測臨床和預后的工作較多，而旨在探討EGFR突變和TTF-1表達之間關系的研究有待進一步證實。本研究旨在探討肺癌中EGFR突變狀態(tài)與臨床病理特征及TTF-1表達之間的關系，為EGFR TKIs治療的選擇提供更為可靠的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 選取2014-01至2014-11我科確診的肺癌切除標本40例，均有EGFR基因突變檢測結(jié)果。40例中女17例，男23例；年齡37～81歲，中位年齡59歲；非吸煙者15例，吸煙者25例；腫瘤組織學為腺癌22例，非腺癌(鱗狀細胞癌、小細胞癌、大細胞癌及其他類型)18例；腫瘤組織TTF-1表達者30例，不表達者10例。EGFR基因突變23例，其中19外顯子缺失突變10例，21外顯子突變13例。

1.2 方法

1.2.1 組織學判斷 40例原始切片均取自我院病理切片庫，經(jīng)2位以上高年資的病理醫(yī)師盲法審閱并做出病理確診和組織學判斷。組織學分型依據(jù)2011年WHO分類標準。對于低分化成分的癌癥，若醫(yī)師之間有分歧，則經(jīng)過商討后作出一致判斷。

1.2.2 TTF-1的免疫組化及判讀 全部標本經(jīng)常規(guī)10%甲醛溶液固定，規(guī)范取材后脫水、石蠟包埋、4 μm切片，然后采用免疫組織化學S-P法染色。具體方法：切片脫蠟至水化，PBS液涮洗2次；對標本進行3%過氧化氫室溫孵育10 min，高壓鍋細胞修復2.5 min；PBS液涮洗6缸，加一抗后4 ℃保溫箱12 h；PBS液涮洗6缸，每缸3 min；加二抗，37 ℃保溫箱20 min；PBS液涮洗6缸，每缸3 min；DAB(A 1 ml+B 1滴)；蒸餾水終止顯色，蘇木素復染細胞核、脫水、透明、封片。所有免疫組化切片均由2位以上高年資醫(yī)師審閱，陽性標準為：(1)每個視野中腫瘤細胞的細胞核呈深棕黃染色；(2)對于染色較淡的區(qū)域，每個視野中細胞核呈較弱棕黃染色的腫瘤細胞數(shù)需占5%以上。

1.2.3 EGFR突變的檢測 采用擴增阻滯突變系統(tǒng)(amplification refractory mutation system, ARMS)法檢測EGFR熱點突變基因(19和21外顯子)的突變情況，熒光定量PCR的儀器型號為：安捷倫Mx3000P實時熒光定量PCR儀(美國)。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

40例標本中，EGFR基因的突變率為57.5%(23例)，TTF-1的表達、女性、不吸煙、腺癌患者和EGFR突變呈正相關(χ2=5.763，P<0.05，表1)。

表1 臨床病理特征及腫瘤組織學類型與EGFR突變的關系

3 討 論

目前，肺癌常規(guī)治療方法依然是手術、化療和放療。隨著醫(yī)學的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)小分子抑制藥對非小細胞肺癌的療效顯著[3]。通過近十年的研究和臨床驗證，它可以有效延長肺癌患者的5年生存率。然而，并不是所有的肺癌患者都可以得益于小分子抑制藥的療效。每一例肺癌患者在臨床特征、預后、治療反應和耐受性方面的表現(xiàn)都是獨特的(也就是說肺癌是一種異質(zhì)性疾病)，因此，需要“個體化治療”[4，5]。

酪氨酸激酶抑制藥是對肺癌療效顯著的小分子抑制藥，也是目前臨床中常用的一種抑制藥。它通過配體、受體的結(jié)合，控制調(diào)節(jié)增殖和凋亡的信號轉(zhuǎn)導通路在腫瘤發(fā)生中的重要作用[6]。酪氨酸激酶抑制藥的受體結(jié)合位點為EGFR，因此，準確的藥物反應預測因子可幫助醫(yī)師預測哪些患者最易獲益于EGFR TKIs的療效。2004年3項有影響力的研究發(fā)現(xiàn)了EGFR激酶位點的一系列體細胞突變，這些突變與EGFR TKI治療的反應相關[7-9]。有數(shù)據(jù)認為，EGFR基因突變的患者中，有60%～94%對EGFR TKI治療有效[10]。因此，至今為止，EGFR突變被認為是EGFR TKI療效的最強預測生物指標[11]。

檢測到EGFR的突變是選擇EGFR TKI治療的前提。但是，EGFR的基因突變檢測率很低，容易導致一些本能夠得益于EGFR TKI治療的患者排除在外。因此，探討聯(lián)合檢測方法提高EGFR的突變檢測率顯得尤其重要。在本研究中，入組肺癌患者EGFR基因的突變率為57.5%(23例)，而且女性、不吸煙、腺癌患者更易發(fā)生EGFR的突變。這與臨床研究中的的亞洲不吸煙、女性、腺癌患者是EGFR TKI治療的優(yōu)勢人群的發(fā)現(xiàn)一致[12]。

關于組織學亞型與EGFR突變之間存在密切聯(lián)系的結(jié)論已經(jīng)被證實，但是真正原因目前尚不清楚。相關基礎研究證實，TTF-1在胎兒肺組織和成人Ⅱ型肺泡上皮中存在，而在Ⅰ型肺泡上皮中始終不表達[13，14]。外周型肺腺癌中，TTF-1的表達多為陽性；而在鱗癌和大細胞癌中，TTF-1則很少表達。有研究發(fā)現(xiàn)，TTF-1的表達對EGFR突變有一定的預測作用[15，16]，但是具體相關性需進一步證實。鑒于TTF-1和EGFR分別與腺癌亞型的緊密關系，兩者之間必然也存在不可忽視的聯(lián)系。本研究發(fā)現(xiàn)，TTF-1的表達和EGFR的突變之間存在著明確的正相關(P<0.05)，即TTF-1陽性表達的肺癌比TTF-1陰性表達的肺癌具有更高的EGFR突變。

綜上所述，EGFR的突變在女性、不吸煙和TTF-1表達的肺腺癌中更常見。換言之，不吸煙的女性且TTF-1陽性表達的腺癌患者均應該接受EGFR TKI治療并會獲得肯定的療效。由于肺癌中EGFR基因突變的檢測敏感度有限，下一步將會繼續(xù)收集病例，用更多的臨床資料探討其相互關系，獲取更有說服力的數(shù)據(jù)，從而避免一些本能夠得益于EGFR TKI治療的患者排除在治療選擇之外。

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(2014-12-19收稿 2015-02-15修回)

(責任編輯 尤偉杰)

Association of EGFR mutation and TTF-1 and clinical characteristics in lung carcinoma

YAO Wenlian and XU Xin.

Department of Pathology，General Hospital of Chinese People’s Armed Police Forces, Beijing 100039, China

Objective To investigate the relationship epidermal growth factor receptor (epidermal growth factor receptor, EGFR) mutation status and thyroid transcription factor-1 (thyroid transcription factor-1, TTF-1) between the expression and clinical pathological characteristics in the lung cancer. Methods From 40 patients of operatively resected lung cancer specimens were collected.Using amplification refractory pre system (ARMS) and polymerase chain reaction (PCR), mutation of EGFR gene in lung cancer tissue was detected. Histological typingwas according to the 2011 WHO classification operation specimens. The analysis of relationship between EGFR mutation and TTF-1 expression and clinical pathological characteristics in the lung cancers was analyzed using the statistical software of SPSS17.0. Results In 40 patients with lung cancer, EGFR gene mutation probability was 57.5% (23/40). EGFR gene mutation related to lung cancer patient’s sex, smoking history, lung cancer’s subtype and TTF-1 expression (P<0.05). Conclusions In lung cancer, EGFR gene mutation status is related to TTF-1 expression and histological type, gender, history of smoking. Thewomenwith strong expression of TTF-1,without smoking history and adeno-carcinoma patients have the higher EGFR mutation rate.

lung cancer；epidermal growth factor receptor；thyroid transcription factor-1；clinical characteristics

姚文蓮，碩士研究生，E-mail: wenlian731@163.com

100039 北京，武警總醫(yī)院病理科

徐 薪，E-mail:xxblueflower@163.com

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