劉激揚，王曉飛，于 玲，姚紅偉，胡 好，柴江平

甘麥寧心膠囊中梓醇含量測定的不確定度分析

劉激揚1，王曉飛1，于 玲1，姚紅偉1，胡 好1，柴江平2

目的 對高效液相色譜法測定梓醇含量的測量不確定度進(jìn)行分析，以找到影響不確定度的因素，為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供科學(xué)依據(jù)。方法 采用高效液相色譜法測定甘麥寧心膠囊中梓醇含量，評估不確定度。結(jié)果 標(biāo)準(zhǔn)不確定度為2.70%，含量為(1.17±0.063)mg/g。結(jié)論 本試驗建立的不確定度評估方法適用于HPLC法測定梓醇含量的不確定度評定。

測量不確定度；梓醇；高效液相色譜

甘麥寧心膠囊是由地黃、麥冬、桂枝、人參等多味中藥制成的膠囊，具有補脾和胃，益氣復(fù)脈之功效，臨床用于脾胃虛弱，倦怠乏力，心動悸脈結(jié)代。本研究依據(jù)《化學(xué)分析測量不確定度評定》、《聲明檢測或校準(zhǔn)結(jié)果及與規(guī)范符合性的指南》[1，2]中有關(guān)規(guī)定，對HPLC法測定梓醇含量的測量不確定度進(jìn)行了分析，以期找出影響不確定度的因素并進(jìn)行評估，為評價質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及檢驗報告提供有力依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 1200型高效液相色譜儀(Agilent)，XP205型電子天平(DHAUS AP250D)，超聲清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)，梓醇對照品(中過食品藥品檢定研究院，110808-201210)，乙腈(色譜純)，甲醇(色譜純)，甘麥寧心膠囊(批號20140426，20140428，20140430，自制)。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱: SHISEIDO C18(MG 4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相:乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85)；檢測波長：320 nm；流速:1.0 ml/min；柱溫：30 ℃。進(jìn)樣量10 μl。

1.2.2 對照品溶液制備 精密稱定梓醇對照品約5 mg，置于50 ml容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2～10 ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜濾過，即得。

1.2.3 供試品溶液制備 精密稱取甘麥寧心膠囊內(nèi)容物2.0 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 ml，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)慮液2 ml，濃縮至近干，殘渣用流動相溶解，轉(zhuǎn)移至10 ml量瓶中，并用流動相稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜濾過，即得。

1.2.4 色譜行為 在本實驗建立的色譜條件下，甘麥寧心膠囊中梓醇能與制劑中其他成分很好分離，理論塔板數(shù)為13 663。HPLC色譜圖見圖1。

1.2.5 線性關(guān)系考察 線性關(guān)系的考察 取梓醇對照品溶液，分別進(jìn)樣1、5、10、15、20、25、30 μl。將峰面積(Y)對質(zhì)量濃度(X)進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程為Y=5.0924X-0.3141(r=1)。表明梓醇在(0.02～0.60) μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖1 甘麥寧心膠囊HPLC色譜圖

1.2.6 精密度考察 取梓醇對照品溶液，每次進(jìn)樣10 μl，重復(fù)進(jìn)樣7次，測定梓醇峰面積，平均峰面積為50.3，結(jié)果梓醇的RSD為0.703%(表1)。

表1 甘麥寧心膠囊中梓醇含量測定精密度試驗結(jié)果

1.2.7 重復(fù)性考察 取同一批號供試品(批號：20140428)，按“1.2.3供試品溶液的制備”項下方法平行制備6份樣品，進(jìn)樣，按測得的梓醇含量計算：RSD為1.01%。結(jié)果表明重復(fù)性良好(表2)。

表2 甘麥寧心膠囊中梓醇含量測定重復(fù)性試驗結(jié)果 (n=6)

1.2.8 穩(wěn)定性考察 取同一批供試品溶液(批號：20140428)，每隔2 h進(jìn)樣一次，進(jìn)行穩(wěn)定性試驗考察，結(jié)果表明供試品溶液在16 h內(nèi)穩(wěn)定，按測得的梓醇峰面積計算：RSD為1.48%(表3)。

表3 甘麥寧心膠囊中梓醇含量測定穩(wěn)定性試驗結(jié)果

1.2.9 加樣回收率實驗 取已知含量的供試品6份(批號：20140428；含量：1.16 mg/g)，精密稱定，分別精密加入已知含量的的梓醇對照品溶液(1.868 mg/ml)1 ml，按“3.3供試品溶液的制備”項下方法制備供試品溶液，再精密量取該供試品溶液5 ml置10 ml容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜濾過，按“3.1色譜條件”測定梓醇的含量，計算回收率，結(jié)果見表4。

2 結(jié) 果

2.1 含量測定 取3批甘麥寧心膠囊內(nèi)容物，按“1.2.3”項下方法處理，HPLC測定，梓醇含量計算結(jié)果見表5。

表4 甘麥寧心膠囊中梓醇含量測定加樣回收試驗結(jié)果

表5 甘麥寧心膠囊中梓醇含量測定試驗結(jié)果

2.2 不確定度數(shù)據(jù)分析與計算

2.2.1 數(shù)學(xué)模型

式中：X為供試品梓醇含量，mg/g；Ax為供試品梓醇HPLC色譜峰面積；m0為對照品的取樣量，g；V0為對照品稀釋體積，ml；A0為梓醇對照品的HPLC色譜峰面積；mx為供試品取樣量，g；Vx為供試品稀釋體積，ml

2.2.2 不確定度來源分析 根據(jù)2.2.1數(shù)學(xué)模型分析不確定度來源，(1) 稱量時產(chǎn)生的質(zhì)量不確定度u(m0)、u(mx)；(2) 定容時產(chǎn)生的容量不確定度u(V0)和u(Vx)；(3) HPLC法測定峰面積帶進(jìn)的不確定度u(A0)、u(Xx)三方面，6個分量。

2.2.3 稱量時產(chǎn)生的不確定度 稱量產(chǎn)生的不確定度主要來源是電子天平校準(zhǔn)不確定度和重復(fù)稱量產(chǎn)生的不確定度。

由2.2.3.1、2.2.3.2兩項合成為稱量不確定度u合

2.2.4 定容時產(chǎn)生的容量不確定度

2.2.4.3 容量瓶重復(fù)性不確定度 用水定容，稱重，重復(fù)10次，得標(biāo)準(zhǔn)偏差直接用于標(biāo)準(zhǔn)不確定度。UR(50)(V)=0.014 ml；UR(10)(V)=0.017 ml。

2.2.5 HPLC法測定峰面積帶入不確定度

2.2.5.1 系統(tǒng)效應(yīng)帶入的不確定度[6]由中國計量院出具的儀器檢定結(jié)果，得定量測量的誤差為0.04%作為相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度，即urel1(A)=0.0004。

2.2.5.2 隨機效應(yīng)導(dǎo)致的分量 3份供試品行HPLC檢測，平行兩次，相應(yīng)的峰面積見表6。

標(biāo)準(zhǔn)不確定度u2(A)=S(A)=1.76。相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel2(A)=u2(A)/A=0.0241。

2.2.6 合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度uc(X) 將各項相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度用方和根法合成，得到梓醇含量的合成相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度

uc(X)/X=

=0.0270

得：uc(X)/X = 2.70%。由此得合成不確定度uc(X)= 1.17×2.70%=0.0316 mg/g。

2.2.7 擴展不確定度U 取包含因子k(95)=2(近似95%置信概率) ，則U=k·uc(X)，則U=2×0.0316=0.063 mg/g，因此，供試品梓醇含量為(1.17±0.063)mg/g。

3 討 論

根據(jù)測量不確定度結(jié)果，可以看出在影響此法檢測結(jié)果的各個分量中，液相色譜儀帶入的不確定度較為顯著，主要原因是峰面積較小導(dǎo)致誤差相對較大，因此，在考慮到操作合理性前提下，可以適當(dāng)增加對照品與樣品進(jìn)樣量，從而減少誤差。其次稱量帶入的不確定度也較為顯著，主要由于對照品稱量帶入，分析原因：由于對照品稱樣量較少，造成誤差增大；解決方案：在經(jīng)濟允許的情況下，標(biāo)準(zhǔn)制定時，適當(dāng)增加對照品稱樣量，從而減少誤差。

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的擬定和對藥品進(jìn)行合格判定時應(yīng)當(dāng)考慮到不確定度，只有把不確定度加入判定結(jié)果，才能夠保證含量測定結(jié)果的準(zhǔn)確性、重復(fù)性。本研究建立了HPLC法測定梓醇含量不確定度分析方法，為同類含量測定方法的建立提供參考。

[1] 國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局. JJF1135-2005 化學(xué)分析測量不確定度評定[S]. 北京: 中國計量出版社， 2005.1-8.

[2] 中國合格評定國家認(rèn)可委員會. 聲明檢測或校準(zhǔn)結(jié)果及與規(guī)范符合性的指南[M]. 北京:中國合格評定國家認(rèn)可委員會，2009：4-7.

[3] 孫 莉. HPLC 法測定炔諾酮片含量及含量均勻度的不確定度分析[J]. 中國藥房， 2009， 20(4):294-296.

[4] 車曉彥,伍丕娥,周 娟,等. 麥冬藥材TLC及HPLC 特征圖譜研究[J]. 藥物分析雜志, 2012,32(12):2263.

[5] 楊仕林,李小剛,謝 云.RP-HPLC法測定天王補心丸中梓醇的含量[J].中國藥方，2012,23(24):2289-2290.

[6] 李慎安. JJF1059-1999 《測量不確定度評定與表示》討論之六 測量儀器不確定度[J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志, 2006，16(4): 39-40.

(2015-04-24收稿 2015-08-08修回)

(責(zé)任編輯 張 楠)

Measurement of uncertainty of catalpinoside in Ganmainingxin Capsule

LIU Jiyang1, WANG Xiaofei1, YU Ling1, YAO Hongwei1, HU Hao1, and CHAI Jiangping2.

1. Institute for Drug Control of People’s Armed Police Force，Beijing 102613，China; 2. Guang Anmen Hospital，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100053，China

Objective To find out the effect factors of uncertainty by analyzing the uncertainty of measurement in determination of catalpinoside by HPLC and provide the evidence to evaluate the measurement. Methods The Catalpinoside in Ganmainingxin Capsules was determined by HPLC. The causes and effects were simplified and uncertainty was appraised. Results The uncertainty result was 2.70% and the result of content was(1.17±0.063)mg/g. Conclusions The mathematic model established is suitable for uncertainty analysis of catalpinoside by HPLC.

uncertainty of measurement; catalpinoside; HPLC

劉激揚，碩士，E-mail:wangxiaofei1317@163.com

1.102613 北京，武警藥品儀器檢驗所;2.100053 北京，中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院

王曉飛，E-mail:wangxiaofei1317@163.com

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