韓　青，趙麗青，許美玲，楊　娟（.臨沂出入境檢驗檢疫局，山東臨沂76034；.山東出入境檢驗檢疫局，山東青島6600）

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鴨坦布蘇病毒病研究進展

韓青1，趙麗青2，許美玲1，楊娟1
（1.臨沂出入境檢驗檢疫局，山東臨沂276034；2.山東出入境檢驗檢疫局，山東青島266001）

摘 要：2010年春，鴨坦布蘇病毒病在我國東南沿海暴發(fā)，該病由鴨坦布蘇病毒引起并以鴨產(chǎn)蛋下降為特征，對養(yǎng)鴨業(yè)造成了重大經(jīng)濟損失，對鴨坦布蘇病毒病的研究也引起了動物防疫部門及研究者的日益關(guān)注。論文從病原學(xué)、反向遺傳學(xué)、病理學(xué)、診斷方法、疾病傳播及公共衛(wèi)生安全和疫苗研究等方面對鴨坦布蘇病毒病的研究進展進行了概述，有助于對鴨坦布蘇病毒的進一步研究及對鴨坦布蘇病毒病的預(yù)防和控制。

關(guān)鍵詞：鴨坦布蘇病毒；致病性；診斷；防控；疫苗研發(fā)

2010年春，我國東南沿海各省暴發(fā)了一種以鴨產(chǎn)蛋下降為主要特征的傳染病。發(fā)病鴨主要表現(xiàn)為產(chǎn)蛋下降，產(chǎn)畸形蛋甚至停產(chǎn)，采食下降，生長緩慢等癥狀，嚴重者死亡。病理剖檢顯示，病鴨卵巢出血，卵泡破裂，全身多臟器出血發(fā)炎。經(jīng)國內(nèi)多個研究組確認該病由一種新病毒引起，其屬于黃病毒科黃病毒屬成員，并命名為鴨坦布蘇病毒（Duck Tembusu virus，DTMUV）。該病傳播迅速，在浙江、江蘇、上海、福建、山東、河南、湖南、湖北、安徽、江西等?。ㄊ校┚斜静〉膱蟮?。成年鴨發(fā)病率為10%～30%，幼鴨發(fā)病率則高達90%～100%，依據(jù)治療方法的差異，其病死率在5%～30%不等［1-2］。該病在造成巨大經(jīng)濟損失的同時，也給我國養(yǎng)鴨業(yè)帶來了打擊。

黃病毒是重要的人畜共患病病原，該科病毒共包含70多個成員，隸屬于3個屬，分別是黃病毒屬、瘟病毒屬和丙型肝炎病毒屬。黃病毒為單股正鏈RNA病毒，有囊膜，病毒直徑約為40nm～60nm，大多數(shù)黃病毒依靠蚊子、蜱、蛉等吸血節(jié)肢動物進行傳播，也有些依靠蝙蝠等哺乳類進行傳播。由于遷徙鳥類對黃病毒傳播及遠距離散播的巨大作用，目前黃病毒遍布除南極洲以外的各大洲，引起人及家畜發(fā)熱、出血熱、腦炎、流產(chǎn)、休克等癥狀，嚴重者甚至死亡，并發(fā)神經(jīng)癥狀的病例其愈后不良，且有較嚴重的后遺癥。據(jù)報道每年大約有20萬人感染黃熱病毒，病死率約15%；將近2億人感染登革熱，其中50萬重癥病例，約2萬人死亡；約5萬人感染日本腦炎，病死率約25%～30%［3］。鴨坦布蘇病毒與登革病毒和日本腦炎病毒均屬于黃病毒科，并且鴨坦布蘇病毒與這兩種病毒的基因同源性比較高，而后兩種病毒是重要的人獸共患傳染病病原。作為該科病毒新成員的鴨坦布蘇病毒，不僅給養(yǎng)鴨業(yè)造成了嚴重危害，而且該病毒是否會對人類致病尚屬未知，因此應(yīng)引起人們足夠的重視。

本文從病原學(xué)、病理學(xué)、診斷方法、疾病傳播及公共衛(wèi)生安全和疫苗研究等方面對鴨坦布蘇病毒病的研究進展進行總結(jié)，希望能有助于該病毒的進一步研究及鴨坦布蘇病毒病的預(yù)防及控制。

1　病原

1.1坦布蘇病毒的起源及發(fā)現(xiàn)

坦布蘇病毒最早于1955年從吉隆坡庫蚊體內(nèi)分離得到。Platt G S等［4］從馬來西亞蚊子體內(nèi)分離到30株坦布蘇病毒。2010年4月，蘇敬良等最先報道從鴨體內(nèi)分離到一種類似病毒，通過對NS5基因進化分析發(fā)現(xiàn)，其與坦布蘇病毒同源性為88%～92%，屬于蚊媒病毒Ntaya病毒群Tembusu病毒。說明該病毒是從東南亞傳入我國，并感染新的宿主鴨進化而來，后來命名為鴨坦布蘇病毒（Duck Tembusu virus，DTMUV）［1-2］。

1.2鴨坦布蘇病毒的結(jié)構(gòu)

鴨坦布蘇病毒具有典型黃病毒結(jié)構(gòu)，有囊膜，由一個開放閱讀框（open reading frame，ORF）編碼7個非結(jié)構(gòu)蛋白和3個結(jié)構(gòu)蛋白。7個非結(jié)構(gòu)蛋白分別為NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B、NS5，對病毒入侵、復(fù)制及宿主因子調(diào)控等有著極其重要的作用。目前，對于非結(jié)構(gòu)蛋白的具體功能及其作用機制很大程度上仍屬未知。3個結(jié)構(gòu)蛋白分別是囊膜蛋白（E）、膜蛋白前體（prM）、核衣殼蛋白（C）。E蛋白是參與構(gòu)

成病毒囊膜最主要的表面結(jié)構(gòu)蛋白，每2個E蛋白單體反向平行排列為一個二聚體，3個二聚體構(gòu)成一個“閥”樣結(jié)構(gòu)，30個“閥”成人字形排列于病毒表面。prM裂解為M蛋白后，間或嵌入E蛋白間，插入病毒囊膜中［5］。C蛋白與病毒基因組結(jié)合形成病毒核衣殼，外面包裹囊膜構(gòu)成了完整的病毒粒子。

1.3鴨坦布蘇病毒基因組分析

鴨坦布蘇病毒基因組為單股正鏈RNA，不分節(jié)段，為10 990nt，僅一個ORF長為10 278nt，編碼一個含3 425氨基酸的多聚蛋白，隨后加工切割為11個病毒蛋白，病毒基因組排列5′NCR-C-PrM-E-NS1-NS2A-NS2B-NS3-NS4A-2K-NS4B-NS5-NCR3′，5′端非編碼區(qū)（non-coding region，NCR）長為94nt，3′端非編碼區(qū)長為618nt。5′端具有帽子結(jié)構(gòu)，3′端不具有poly A尾巴結(jié)構(gòu)［6-7］。對于目前報道的鴨坦布蘇病毒株基因序列分析表明，各分離株之間在時間性、地域性及宿主性上并無顯著性差異，提示目前我國流行毒株均為同一基因型，尚未發(fā)生較大變異［8］。說明鴨坦布蘇病毒的抗原變異速度并不是很快，對于開發(fā)疫苗及防控該病有利。

2　鴨坦布蘇病毒反向遺傳操作系統(tǒng)

反向遺傳操作技術(shù)是研究病毒致病力及疫苗開發(fā)的有利工具。石迎等建立了鴨坦布蘇病毒的反向遺傳操作系統(tǒng)，吳曉剛等［9-10］建立了鴨坦布蘇病毒的弱毒株的感染性克隆，為研究鴨坦布蘇病毒的致病機理奠定了一定基礎(chǔ)。利用雞胚和雞胚成纖維細胞連續(xù)傳代獲得了致弱的鴨坦布蘇病毒株，發(fā)現(xiàn)了一些氨基酸的改變或一些片段的缺失，結(jié)合親本病毒，可以作為一對模式病毒，利用節(jié)段替換結(jié)合氨基酸突變，可以鑒定出鴨坦布蘇病毒的毒力決定因素，從而部分解釋鴨坦布蘇病毒的致病機理［11-12］。另外，Liu S等［13］將鴨坦布蘇病毒在Vero或Hepa1-6細胞上進行傳代，獲得了能夠在小鼠全身復(fù)制且致病力增強的坦布蘇病毒株，并且與親本病毒相比發(fā)生了一些氨基酸的改變?？梢岳梅聪蜻z傳操作技術(shù)鑒定出鴨坦布蘇病毒對哺乳動物的致病決定因素，為坦布蘇病毒的監(jiān)測提供一定的理論依據(jù)。

3　病理學(xué)

3.1臨床病理變化

鴨坦布蘇病毒感染種蛋鴨主要臨床癥狀表現(xiàn)為采食量下降30%～90%，產(chǎn)蛋量下降50%～100%，甚至停產(chǎn)，康復(fù)后不再產(chǎn)蛋，體重急劇下降，發(fā)熱，羽毛凌亂，精神沉郁，眼部、泄殖腔等處分泌物增多，拉綠色稀糞。有些感染鴨會出現(xiàn)關(guān)節(jié)腫大、行走困難等癥狀。有個別病例甚至因體弱衰竭而死亡。病理剖檢顯示，感染鴨卵巢嚴重出血、破裂，卵黃流入腹腔，卵泡閉鎖、破裂、脫落，發(fā)育不良、畸形，嚴重的病例引發(fā)卵黃性腹膜炎。感染鴨全身多臟器腫大，脾臟腫大，呈大理石樣，心臟、肝臟等腫大、淤血。了解鴨坦布蘇病毒病的常見臨床癥狀有利于對該病進行初步診斷。

3.2病理組織學(xué)變化

感染鴨表現(xiàn)為由病毒血癥引發(fā)的全身多臟器炎性反應(yīng)。母鴨卵巢內(nèi)可見出血，淋巴細胞浸潤，卵泡閉鎖、破裂，卵巢間質(zhì)及腸道內(nèi)充滿大量異嗜顆粒。腦部呈現(xiàn)非化膿性腦炎癥狀，腦內(nèi)可見神經(jīng)膠質(zhì)細胞灶性增生、浸潤，甚至可見腦壞死灶。其他組織病理變化為腎臟變性，脾臟壞死，肺臟出血等，全身多臟器呈現(xiàn)輕度炎性反應(yīng)及不同程度的淋巴細胞浸潤［14］。

鴨坦布蘇病毒感染后大體呈現(xiàn)三個階段：病毒首先侵入免疫器官，隨后釋放入血，形成病毒血癥，隨著血液循環(huán)在幾乎所有外周器官中進行復(fù)制，最后侵入神經(jīng)系統(tǒng)［15］。由于該病毒感染后誘發(fā)病毒血癥，常呈現(xiàn)為廣泛性、彌漫性炎性反應(yīng)，且能通過血腦屏障，入侵神經(jīng)系統(tǒng)，因此對其治療較為困難且愈后不良，對于感染蛋鴨最好進行淘汰處理。

4　診斷

除了使用常規(guī)臨床診斷方法及病毒分離外，還可以采用多種實驗室快速診斷方法，從而提高對疾病的診斷效率及準確性。Yun T等［16］利用3′端非編碼區(qū)序列設(shè)計探針，建立了RT-PCR一步診斷法。顏丕熙等［17］利用E基因序列，建立了套式RT-PCR診斷方法，其檢測靈敏度較一般PCR方法高10倍。姬希文等［18］利用純化的鴨坦布蘇病毒建立了間接ELISA檢測方法。Chen H等［19］利用E蛋白單克隆抗體建立了雙抗體夾心ELISA診斷方法。以上方法均能簡單快速、準確、高效地診斷出鴨坦布蘇病毒，為該病的防控提供了有利保障。

雖然目前建立了鴨坦布蘇病毒病的診斷方法，但是對方法進行標(biāo)準化，提高穩(wěn)定性、特異性、準確性及快速簡單易操作仍是今后研發(fā)需要考慮的一個方面。另外，對鴨坦布蘇病毒病與其他多種鴨病的鑒別診斷以及研發(fā)可以同時診斷多種鴨病的生物芯片也是有待進一步研究的問題。

5　病毒傳播及公共衛(wèi)生意義

5.1坦布蘇病毒的傳播方式

坦布蘇病毒屬蚊媒病毒，當(dāng)蚊子等傳播媒介叮咬帶毒宿主后，病毒進入其體內(nèi)，于腸上皮細胞進行復(fù)制，隨后釋放進入血液，引發(fā)病毒血癥并進入其唾液

腺增殖，通過叮咬易感宿主將病毒注入宿主體內(nèi)，從而完成其傳播周期［20］。目前，鴨坦布蘇病毒的傳播方式尚屬未知，但有報道稱從庫蚊體內(nèi)分離到了鴨坦布蘇病毒［21］，表明蚊媒傳播可能是鴨坦布蘇病毒的傳播方式之一。馬來西亞鴨坦布蘇病毒（Parak病毒）在青年北京鴨中引起本病暴發(fā)并引起神經(jīng)癥狀，顯示該病毒在沒有蚊媒存在的情況下也可以傳播，表明鴨坦布蘇病毒可能還有其他的傳播途徑，確切的傳播方式和途徑仍需進一步研究［22］。對傳播途徑的了解及掌控，有助于有效地切斷該病的傳播及擴散，在疾病暴發(fā)的早期將其控制在一個較小的范圍內(nèi)，從而避免造成較大的損失。

5.2鴨坦布蘇病毒的潛在威脅

對于此類蚊媒病毒而言，鳥類為其生活周期中的儲存宿主，感染鳥后能誘發(fā)高病毒血癥，鴨坦布蘇病毒感染鴨體內(nèi)也能檢測到高水平病毒血癥，鳥類可能是該病毒的儲存宿主，但這一推斷仍有待進一步證實。目前，已經(jīng)陸續(xù)有報道稱從北京鴨、櫻桃谷鴨、番鴨、雞、鵝、麻雀、鴿子等體內(nèi)分離到鴨坦布蘇病毒。這些家禽的市場流通及野鳥的遷徙也能實現(xiàn)病毒的遠距離傳播，從而為疾病的防控帶來了一定困難與隱患。黃病毒科70多個成員中，超過半數(shù)成員對人類致病。雖然截至目前還沒有鴨坦布蘇病毒感染人的報道，但Liu Z等［23］研究發(fā)現(xiàn)，鴨坦布蘇病毒可以在Vero細胞及Hepa1-6上連續(xù)傳代。Li S等［13］發(fā)現(xiàn)鴨坦布蘇病毒感染后能導(dǎo)致Balb/c小鼠出現(xiàn)神經(jīng)癥狀。Tang Y等［24］報道鴨場工人抗鴨坦布蘇病毒血清抗體檢測呈現(xiàn)陽性。由此顯示鴨坦布蘇病毒能適應(yīng)哺乳動物并且引發(fā)相應(yīng)的臨床反應(yīng)及癥狀，加之其傳播途徑的復(fù)雜性及感染鳥類的遠距離遷徙，這說明鴨坦布蘇病毒對人類公共衛(wèi)生安全存在的潛在威脅不容忽視，應(yīng)該引起人們足夠的關(guān)注與重視。因此，對該病的防控也具有重要的公共衛(wèi)生意義。

6　疫苗研究

1937年Max Theiler利用組織傳代弱化的方法研制了疫苗YFV 17D，開啟了黃病毒的疫苗研發(fā)史。Li G等［12］將鴨坦布蘇病毒在雞胚成纖維細胞中進行連續(xù)傳代，獲得了一株弱毒疫苗FX2010-180P，該疫苗株能對家禽及小鼠提供較好免疫保護。Zou Z等［25］以鴨瘟病毒為載體插入病毒主要表面抗原E蛋白，研制了一株抗鴨瘟病毒及鴨坦布蘇病毒重組疫苗。Sun L等［26］將一株具有致病性的鴨坦布蘇病毒株Du/ CH/LSD/110128通過雞胚傳代后獲得一株致弱的疫苗候選株。Chen P等［27］報道了利用反向遺傳技術(shù)構(gòu)建了以鴨瘟病毒為載體表達鴨坦布蘇病毒截短分泌型E蛋白及PrM蛋白的重組二價弱毒疫苗候選株可以對鴨坦布蘇病毒的攻擊提供良好的保護。另外，鴨坦布蘇病毒的DNA疫苗或亞單位疫苗等也都是研究者可以進行開發(fā)的方向。

目前，對于鴨坦布蘇病毒病尚無有效藥物進行治療，疫苗研發(fā)對本病的防控具有重要意義，不僅可以降低養(yǎng)鴨者的經(jīng)濟損失，也有助于我國養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。

7　展望

鴨坦布蘇病毒病在我國依然持續(xù)存在，給養(yǎng)鴨業(yè)帶來了嚴重危害并造成了巨大的經(jīng)濟損失。目前，有關(guān)鴨坦布蘇病毒及相關(guān)疾病的研究雖然取得了一些進展，但有很多問題尚不清楚，如鴨坦布蘇病毒的致病機理。鴨坦布蘇病毒的反向遺傳操作系統(tǒng)已經(jīng)建立，在此基礎(chǔ)上，以傳代致弱毒株與親本毒株作為一對模式病毒，利用節(jié)段替換和定點突變可以鑒定出該病毒的致病關(guān)鍵位點，從而有利于進一步闡明鴨坦布蘇病毒的致病機理并有利于相關(guān)疫苗的研發(fā)。另外，已經(jīng)有證據(jù)證明該病毒除了蚊子傳播，還有其他的傳播途徑，進一步研究清楚相關(guān)傳播途徑也有利于對該病的防控。針對該病毒的疫苗雖然已經(jīng)有研究報道，但是這些疫苗的臨床應(yīng)用還為時尚早，因此開發(fā)出安全有效的疫苗對鴨坦布蘇病毒病的防控仍然具有重大意義。

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Progress of Duck Tembusu Viral Disease

HAN Qing1，ZHAO Li-qing2，XU Mei-ling1，YANG Juan1
（1.Linyi Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Linyi，Shandong，276034，China；2.Shandong Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Qingdao，Shandong，266001，China）

Abstract：In the spring of 2010，duck Tembusu viral disease broke out in Southeast of China，which was cause by duck Tembusu virus and was characterized by decline of egg production in ducks.This disease caused significant economic losses in duck industry，so great attention is paid by people.In this study，we overviewed the recent research progress in terms of etiology，reverse genetics，pathology，diagnostic methods，the spread of disease and public health and vaccine development of duck Tembusu viral disease. And we hope it is helpful for further study on duck Tembusu virus and the prevention and control of duck Tembusu viral disease.

Key words：Duck Tembusu virus；pathogenicity；diagnosis；control and prevention；vaccine development

通訊作者

作者簡介：韓 青（1972-），女，山東臨沂人，工程師，主要從事微生物研究。＊

收稿日期：2014-10-28

中圖分類號：S852.659.6

文獻標(biāo)識碼：A

文章編號：1007-5038（2015）05-0104-04