董明芝 袁 鷹 歐陽卉

西安正大制藥有限公司(西安 710043)

梧桐子總黃酮提取工藝研究

董明芝 袁 鷹 歐陽卉△

西安正大制藥有限公司(西安 710043)

目的：優(yōu)選梧桐子總黃酮乙醇提取最佳工藝。方法：采用正交試驗(yàn)法，以梧桐子總黃酮為指標(biāo)成分，優(yōu)選最佳醇提工藝。結(jié)果：梧桐子的最佳醇提工藝為60%乙醇提取3次，溶劑用量依次為8倍、8倍、6倍，提取時(shí)間為60 min、60 min、30 min。結(jié)論:優(yōu)選的工藝穩(wěn)定可行，可作為鼻血止顆粒二次開發(fā)生產(chǎn)工藝。

梧桐子為梧桐科植物梧桐Firmiana simplex (L.)W.F.Wight 的干燥成熟種子。具有順氣和胃，健脾消食，止血之功效?，F(xiàn)代藥理研究表明，梧桐子有降壓、止血、健脾消食等作用，該品盛產(chǎn)于山西、河北、山東等地[1]。為充分提取處方中梧桐子有效成分，本實(shí)驗(yàn)以梧桐子總黃酮為指標(biāo)成分，采用L9(34)正交試驗(yàn)法，對梧桐子醇提工藝進(jìn)行了篩選。

1 儀器與試藥

UV-260型分光光度計(jì)，DK-98-型電熱恒溫水浴鍋，TY-120型電子天平。梧桐子藥材為干燥成熟種子。甲醇、乙醇、六水合三氯化鋁等均為分析純；蘆丁對照品(由陜西省藥品檢驗(yàn)所提供)。三氯化鋁試劑，取六水合三氯化鋁1.81 g，用含5%乙酸的甲醇溶液50mL溶解，即得。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取方法的選擇 水提取法：取梧桐子20g，分別加8、6、6倍量水，煎煮3次，每次1 h，濾過。合并濾液，置水浴上濃縮至約50mL，放涼，置50mL量瓶，加水定容至刻度，搖勻，備用。乙醇提取法：取梧桐子20g，分別加8、6、6倍量70%乙醇，回流提取3次，每次1 h，濾過。合并濾液，回收乙醇后，置水浴上濃縮至約50mL，放涼，置50mL量瓶，加水定容至刻度，搖勻，備用。

2.2 總黃酮含量測定 對照品溶液的制備：取蘆丁對照品約10 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為蘆丁對照品溶液備用[2]。供試品溶液的制備：分別精密量取上述備用液5mL，置蒸發(fā)皿中，濃縮至干，殘?jiān)执渭蛹状技s40mL溶解，置50 mL量瓶中，超聲20 min，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，續(xù)濾液備用。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密量取蘆丁對照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL，置于25 mL量瓶中，分別加甲醇至6 mL，加入三氯化鋁試液1mL，搖勻，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，放置30 min，根據(jù)我國2010年頒布的《中國藥典》中分光光度法，吸收度為縱坐標(biāo)(在275 nm的波長處測定吸收度)，橫坐標(biāo)為濃度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。含量測定：從備用液中吸取2mL，分別置量瓶內(nèi)，曲線制備法，自“分別加甲醇至6mL”起，開始測定吸光度，并從曲線中讀取供試品溶液中蘆丁的量，計(jì)算各樣品中梧桐子總黃酮含量，結(jié)果水提法和醇提法梧桐子總黃酮含量分別為0.20%和0.33%。說明以梧桐子總黃酮含量為指標(biāo)醇提法優(yōu)于水提法。

2.3 乙醇提取工藝的考察 考察因素及其水平：根據(jù)預(yù)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)梧桐子醇提3次，總黃酮含量較高。因此，選擇梧桐子醇提3次。取梧桐子20g，選擇3個(gè)因素分別是乙醇濃度、提取時(shí)間和乙醇用量，因素下設(shè)3水平，編制因素水平表(表1)[3]。

表1 梧桐子的乙醇提取工藝因素水平

表2 梧桐子乙醇提取工藝正交設(shè)計(jì)表

2.4 結(jié) 果 按L9(34)正交表設(shè)計(jì)方案進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，分別將正交試驗(yàn)各組提取液濾過，合并濾液，回收乙醇，置水浴上濃縮至約50mL，放涼，置50mL量瓶，加水定容至刻度，搖勻，精密量取5mL，分別置蒸發(fā)皿中，濃縮至干，殘?jiān)执渭蛹状技s40mL溶解，置50 mL量瓶中，超聲20 min，放冷，用甲醇稀釋至刻度，混勻后再過濾，量取1mL，分別置25 mL量瓶內(nèi)，同上法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的量，計(jì)算各份樣品中梧桐子總黃酮含量。以總黃酮含量為指標(biāo)進(jìn)行方差分析，確定最佳提取工藝。結(jié)果見表2(因提取次數(shù)已確定為3次，故D項(xiàng)為缺項(xiàng)設(shè)計(jì))。由表2可知，乙醇濃度(A)、提取時(shí)間(B)和乙醇用量(C)3個(gè)因素對梧桐子總黃酮提取的影響程度不同。乙醇濃度(A)是影響梧桐子總黃酮提取的主要因素，提取時(shí)間(B)和乙醇用量(C)次之，各因素的影響程度依次為A>B>C。故確定梧桐子總黃酮最佳提取工藝為A1B1C2，即梧桐子用60%乙醇提取3次，溶劑用量依次為8，8和6倍，提取時(shí)間為60，60和30 min。

3 結(jié) 論

鼻血止顆粒是以梧桐子為原料制成的成方制劑，原工藝為水提，梧桐子總黃酮收率較低，制粒時(shí)粘性較大，影響成品收率。本實(shí)驗(yàn)采用醇提法，顯著提高了梧桐子總黃酮提取率，為鼻血止顆粒二次開發(fā)奠定基礎(chǔ)。今后，我們將利用現(xiàn)代分離技術(shù)，對梧桐子總黃酮進(jìn)一步進(jìn)行分離純化。

[1] 戴 琳.中藥藥性的理論與藥理作用分析[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘，2014,3(4)：142.

[2] 張琳琳，祁 峰，繆 陽.毫菊總黃酮類提取工藝的研究[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013，22(27)：30-32.

[3] 韋華梅，閆騰蛟，林宜沛，等.正交試驗(yàn)優(yōu)選槐角總黃酮的提取工藝及不同來源槐角中總黃酮的含量測定[J].陜西中醫(yī)，2011，32(9)：1231-1233.

(收稿2015-02-26；修回2015-03-17)

△湖南食品藥品職業(yè)學(xué)院(長沙 410208)

黃酮 @梧桐子 提取法

R282

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.06.048