張 婧，王 軍

(1.大連醫(yī)科大學 研究生院，遼寧 大連116044;2.大連醫(yī)科大學 病理生理學教研室，遼寧 大連116044)

絲氨酸蛋白酶抑制因子Kazal 1 型(serine protease inhibitor Kazal type 1，SPINK1)屬SPINK 家族，SPINK 家族成員在機體的諸多生理和病理過程中起到了重要的作用，參與了多種炎癥和腫瘤的發(fā)生發(fā)展且與多種人類疾病有關(guān)［1］。

SPINK1 由人的胰腺腺泡細胞分泌合成，絲氨酸蛋白酶抑制因子Kazal 3 型(serine protease inhibitor Kazal type 3，spink3)是SPINK1 的小鼠同源基因，SPINK1/Spink3 同時也被稱為胰腺分泌性胰酶抑制因子(pancreatic secretory trypsin inhibitor，PSTI)和腫瘤相關(guān)性胰酶抑制因子(tumor associated trypsin inhibitor，TATI)［2-3］。近些年來，SPINK1/Spink3 的基因突變，其與自噬、表皮生長因子、胰腺炎的發(fā)病機制、腫瘤的發(fā)生和預(yù)后的關(guān)系，以及其信號傳導通路等方面的研究出現(xiàn)了很多新的報道，提示SPINK1/Spink3 不但是胰蛋白酶的抑制因子，而且還具有生長因子和自噬的負調(diào)節(jié)因子的生物學特性［2-5］，在機體內(nèi)的諸多生理功能和病理狀態(tài)下起到了重要作用，本文就近年來對SPINK1/Spink3 最新的研究進展進行簡要闡述。

1 SPINK1 與基因突變

1.1 基因突變

SPINK1 基因(包括內(nèi)含子、外顯子和信號多肽)突變和SPINK1 啟動子變異［6］可能引起其功能喪失或增強，也有可能不產(chǎn)生任何影響。啟動子c.87 +1G ＞A 的剪接變異會引起SPINK1 功能的喪失［7］;基因內(nèi)IVS3 +2T ＞C 突變會影響外顯子3 的剪接從而起功能喪失［8］;SPINK1 多肽中三個信號肽的變異和15 個錯義突變(但不包括Q68R、S10N、N37S、L12F、N34S 和P55S)會引起SPINK1 不表達［9-12］;Q68R 突變會增加SPINK1 表達［11］，但其是引起功能增加還是功能喪失仍須進一步研究。目前，最常見的是外顯子3 的101A ＞G 的改變，此改變導致了SPINK1 基因N34S 突變［13］。

1.2 SPINK1 基因突變與胰腺炎的關(guān)系

在胰腺組織中，SPINK1 被認為是抑制胰蛋白酶原激活的“第一道防線”，其能抑制總胰蛋白酶20%的活性，當SPINK1 的抑制能力減弱時，可能會導致胰腺炎的發(fā)生［3］;也有人認為SPINK1 在維持胰腺腺泡細胞的完整性和再生能力的過程中起著重要的作用，所以SPINK1 的基因突變可能會導致其功能減退或喪失，這可能是胰腺炎發(fā)生發(fā)展過程中的一個重要的危險因素［2-3，14-15］。

Aoun 等發(fā)現(xiàn)SPINK1 -N34S 點突變并不提高急性胰腺炎首次發(fā)病的概率，但SPINK1 -N34S 點突變的患者比SPINK1 基因正常的患者發(fā)生急性胰腺炎反復發(fā)作的概率高出19 倍，所以在急性胰腺炎首次發(fā)作時就鑒別出SPINK1 -N34S 點突變可以有效的預(yù)防急性胰腺炎的反復發(fā)作和其向慢性胰腺炎的轉(zhuǎn)化［16-18］。而在印度的急性胰腺炎患者調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，SPINK1 -N34S 點突變較為常見，且與較早的發(fā)病年齡有關(guān)，這表明SPINK1 -N34S 點突變可能降低了急性胰腺炎發(fā)病時間的閾值［19］。最近，Gao等［20］發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)的中醫(yī)治療可以通過降低SPINK1 和PRSS1 的表達來達到減輕急性胰腺炎癥狀的目的。

在慢性胰腺炎患者中，約有5.4%的患者發(fā)生SPINK1 -N34S 突變，且白種人發(fā)生SPINK1 -N34S突變的比例更高。SPINK1 -N34S 突變可能導致特發(fā)性胰腺炎發(fā)病時間提前，且頻繁的胰腺炎發(fā)作最終可導致胰腺功能不全。所以，Sandhu 等［21］認為患有特發(fā)性胰腺炎且伴飲酒史的病人應(yīng)該做SPINK1基因突變的檢測。事實上，Cichoz -Lach 等［22］在比較了慢性酒精性胰腺炎、慢性非酒精性胰腺炎和正常對照組的基因后發(fā)現(xiàn)，SPINK1 -N34S 基因突變可能與慢性酒精性胰腺炎有密切的關(guān)系。

SPINK1 -P55S 在健康人群和胰腺炎患者中的突變發(fā)生率分別為0.5%～3%和0.9%～7.3%，這表明SPINK1 -P55S 突變可能與胰腺疾病有關(guān)［23］。但同時也有人認為D50E、Y54H、R67C 突變導致SPINK1 蛋白錯誤折疊使其分泌減少或不分泌，從而增加了胰腺炎發(fā)生的危險性［23］。

2 SPINK1/Spink3 與自噬

2.1 自 噬

自噬常被稱作“細胞管家”，其不僅可以清除細胞內(nèi)的堆積物質(zhì)和損傷物質(zhì)，還可以構(gòu)建一個細胞內(nèi)物質(zhì)和體內(nèi)平衡的動態(tài)循環(huán)系統(tǒng);此外自噬還參與細胞分化，組織重建，生長抑制和細胞對外環(huán)境的適應(yīng)與防御等多種生理功能的過程［24］。

2.2 SPINK1/Spink3 胰腺自噬負調(diào)節(jié)因子

Ohmuraya 等［25］發(fā)現(xiàn)胰腺腺泡細胞的Spink3 基因敲除(Spink3-/-)小鼠，其胰腺組織會發(fā)生明顯的自噬作用。Spink3-/-小鼠與正常的小鼠相比較，Spink3-/--/-小鼠出生后出現(xiàn)嚴重的發(fā)育遲緩、胰腺逐漸萎縮消失、脾臟較小。在Spink3-/-小鼠的胰腺腺泡細胞中檢測到高表達的自噬體(LC3 -Ⅱ)，且在電子顯微鏡下觀察到Spink3-/-的GFP -LC3小鼠的胰腺腺泡細胞的胞漿中出現(xiàn)了許多熒光點，在排除了凋亡和壞死的因素后，確認小鼠的胰腺腺泡細胞發(fā)了生明顯的自噬現(xiàn)象，這表明SPINK1/Spink3 對抑制自噬和對保持胰腺腺泡細胞的完整性及再生性起著重要的作用。

同樣，Chera 等［26］報道對水蛭行基因沉默的結(jié)果提示，絲氨酸蛋白酶抑制劑Kazal Ι 基因是防止水蛭過度自噬和截肢后行使細胞保護功能所必需的。

2.3 SPINK1/Spink3 作為自噬負調(diào)節(jié)因子與急性胰腺炎的關(guān)系

很久以來，急性胰腺炎被認為是胰腺腺泡細胞內(nèi)胰蛋白酶原不恰當?shù)募せ钏拢亲钚碌难芯勘砻髯允膳c急性胰腺炎之間具有一定的聯(lián)系［27］。Hashimoto 等［27］在蛙皮素誘導的急性胰腺炎模型中發(fā)現(xiàn)，隨著急性胰腺炎嚴重程度的增加，經(jīng)檢測LC3 -Ⅱ/LC3 -I 比例增大(LC3 -I 蛋白位于細胞質(zhì)并可以轉(zhuǎn)化為LC3 -Ⅱ，而LC3 -II 是自噬體膜中的磷脂酰乙醇胺共軛的一種形式，所以LC3 -II/LC3 -Ⅰ比值與自噬體的數(shù)量成正相關(guān))，且電子顯微鏡下觀察到的LC3 的綠色蛋白熒光點也隨之增多，這證實了自噬與小鼠急性胰腺炎的發(fā)病有關(guān)［27］。同時，Hashimoto 等［27］在另一個胰腺腺泡細胞Atg5 基因(Atg5 基因是自噬體形成的重要基因)敲除的小鼠模型的實驗中發(fā)現(xiàn)，注射蛙皮素后，除了輕微水腫外，既沒有發(fā)現(xiàn)胰蛋白酶原被激活，也沒有觀察到腺泡細胞嚴重變性、結(jié)締組織水腫、炎性細胞浸潤等急性胰腺炎發(fā)作的病理征象。這一結(jié)果提示，急性胰腺炎的發(fā)生可能由過度自噬誘導。因此，SPINK1/Spink3 對胰腺可能具有雙重保護作用，一是作為胰蛋白酶抑制劑，抑制胰蛋白酶的活性，二是通過自噬的負調(diào)節(jié)來抑制胰蛋白酶原的激活，從而阻止急性胰腺炎的發(fā)生［27］。

同時，也有學者認為胰腺腺泡細胞內(nèi)的自噬通量受損是導致腺泡細胞的空泡形成和胰蛋白酶原激活的主要原因。Mareninova 等［28］發(fā)現(xiàn)在嚙齒類動物的急性胰腺炎模型中，介導胰腺腺泡細胞空泡形成的自噬通量受損，組織蛋白酶L (CatL)和組織蛋白酶B(CatB)之間的加工能力平衡失調(diào)，導致溶酶體降解功能缺陷，使自噬發(fā)展過程遲緩。

2.4 SPINK1/Spink3 作為自噬負調(diào)節(jié)因子的信號傳導通路

因SPINK1/Spink3 與EGF 的結(jié)構(gòu)相似且能與EGFR 結(jié)合，研究者推測SPINK1/Spink3 作為自噬的負調(diào)節(jié)因子可能通過激活EGFR 信號傳導通路行使其作用［29］。但是在特定性胰腺腺泡細胞EGFR缺失(EGFR-/-)的小鼠中，并未發(fā)現(xiàn)胰腺發(fā)育異常，也未發(fā)現(xiàn)腺泡細胞出現(xiàn)自噬現(xiàn)象;而且在EGFR-/-小鼠蛙皮素誘導的急性胰腺炎模型中，也未發(fā)現(xiàn)胰腺腺泡細胞出現(xiàn)自噬現(xiàn)象;同時Her2 和Her3 蛋白表達與對照相比無明顯變化，提示ERBB家族的其他成員未參與EGFR-/-缺失可能產(chǎn)生自噬后的代償機制，上述結(jié)果表明SPINK1/Spink3 作為自噬負調(diào)節(jié)因子的信號傳導獨立于EGFR 信號傳導通路，且很有可能存在其他的信號傳導途徑［30］。

3 SPINK1/Spink3 與表皮生長因子

3.1 SPINK1/Spink3 與表皮生長因子在結(jié)構(gòu)和功能上的關(guān)系

現(xiàn)已證實，SPINK1/Spink3 與表皮生長因子(EGF)在結(jié)構(gòu)上約有50%的同源相似性，二者的氨基酸殘基的數(shù)目相似，分子量均約為6kDa［3，23，29］，且SPINK1/Spink3 可以促進多種細胞系的增長，有人認為其在某些細胞中可能起生長因子的作用［23，29］。

Ozaki 等［29］發(fā)現(xiàn)SPINK1 可促進NIH3T3 成纖維細胞和人胰腺癌細胞增生，并與表皮生長因子受體(EGER)結(jié)合，且SPINK1 與EGFR 結(jié)合的親和力是EGF 的一半，在添加EGFR 抑制劑AG1478 后，EGF 和SPINK1 促進AsPC-1 細胞增生的能力完全被抑制;另有報道發(fā)現(xiàn)SPINK1/Spink3 可增強潰瘍后細胞再生和上皮細胞的遷移過程，且這種遷移可被EGFR 抗體所抑制［3］。

但是SPINK1/Spink3 受體的確定一直存在爭議，有人認為PSTI 與分子量為140kD 的細胞膜多肽相關(guān)聯(lián)，而此分子量明顯區(qū)別于EGFR［3］。

3.2 SPINK1/Spink3 作為生長因子的信號傳導通路

SPINK1/Spink3 與EGF 結(jié)構(gòu)相似［3］，且可促使某些細胞系增生，這種增生作用可能是通過SPINK1/Spink3 與EGFR 結(jié)合，啟動EGFR 信號傳導通路，從而激活其下游信號傳導分子完成的［29］。Ozaki 等人發(fā)現(xiàn)SPINK1/Spink3 和EGF 可促使MAPK、PI3K/AKT、JAK/STAT 信號傳導通路下游靶分子磷酸化，促進細胞增生，其中MAPK/ERK 激酶抑制劑U0126 可完全阻斷胰腺腫瘤細胞增生，所以MAPK 信號傳導通路可能起主要作用［3，29］。同時，Ateeq 等人發(fā)現(xiàn)在前列腺癌細胞中SPINK1 能與EGFR 結(jié)合，且抑制SPINK1 會減弱EGFR 信號通路所介導的下游通路，但他們發(fā)現(xiàn)SPINK1 作為生長因子的促癌作用存在EGFR 依賴性和EGFR 非依賴性兩條途徑，提示SPINK1 在細胞膜表面或胞漿中可能存在著不同的受體［23，31］。

4 SPINK1/Spink3 作為腫瘤相關(guān)性胰酶抑制因子(TATI)與腫瘤

4.1 TATI 與多種腫瘤之間的關(guān)系

自1982年Stenman 等［32］在一名卵巢癌患者的尿液中發(fā)現(xiàn)了TATI 后，TATI 在腫瘤中的表達得以廣泛研究。目前有數(shù)據(jù)顯示，體外培養(yǎng)的前列腺癌、十二指腸癌、結(jié)腸癌和膽囊癌細胞均向培養(yǎng)基中分泌TATI［6，33-34］;血清中TATI 高表達是不良預(yù)后的標志［23］，在部分研究中發(fā)現(xiàn)TATI 的高表達與前列腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、膀胱癌、上皮卵巢癌、肺癌和雌激素受體陽性乳腺癌的不良預(yù)后有關(guān)［35-37］，特別是TATI 可用于鑒別是否發(fā)生結(jié)腸癌的肝轉(zhuǎn)移［38］;血清中的TATI 可作為癌癥診斷的標記物［23，39-40］，與其它血清腫瘤標記物相比，TATI 在診斷胰腺癌、卵巢癌、食管癌和膀胱癌時，其診斷效果更加明顯［23］。

Ateeq 等［31］已經(jīng)證明TATI 的過表達是前列腺癌的致癌原因之一，TATI 可以通過自分泌和旁分泌信號促進前列腺癌細胞的增殖和侵襲，且其在體內(nèi)可以促進前列腺癌的血管內(nèi)滲作用和異種移植腫瘤的生長;并提出可通過TATI 的RNA 干擾和封閉抗體來治療前列腺癌。Lippolis 等［35］最近發(fā)現(xiàn)在前列腺癌中，ERG(一種癌蛋白)和TATI 不能在相同的癌癥細胞中共同表達，二者只能表達其中之一，所以對于接受根治性前列腺切除術(shù)治療的患者來說，ERG 或TATI 都不是一個有用的預(yù)測指標;Lippolis認為可將ERG 和TATI 結(jié)合來消除腫瘤細胞內(nèi)的基因融合和腫瘤相關(guān)抗原，以達到治療前列腺癌的目的。

膀胱癌患者血清中的TATI 濃度可用來判斷對化療的反應(yīng)［23］;但是在接受根治性膀胱癌切除術(shù)的膀胱移行細胞癌的患者中約有超過一半的患者的血清中不表達TATI，盡管此時TATI 已經(jīng)不是一個獨立的預(yù)后指標，但其仍可做為腫瘤分期的生物標志物來輔助臨床的決策［41］。

在乳腺癌中，TATI 不但可抑制乳腺癌細胞凋亡，影響其生存、侵襲、轉(zhuǎn)移能力，而且還可通過降低caspase 3 和提高bcl2 的水平對多種抗腫瘤藥物產(chǎn)生耐藥性［36］，影響化療的效果，但TATI 的作用可以被中和抗體抑制，因此有人提出這可能會是一個潛在的治療靶點［23，42］。

Koskensalo 等［43］第一次在大腸癌中發(fā)現(xiàn)EGFR與TATI 的聯(lián)合表達是一個獨立的預(yù)后良好的指標，EGFR 與TATI 的聯(lián)合表達作為檢測大腸癌預(yù)后效果更佳，但其機制仍需進一步研究。

也有人擔心TATI 可以抑制胰蛋白酶原過早的激活來抑制胰腺炎的發(fā)生，如果人為地干擾這種機制，則可能會增加胰腺炎發(fā)生的危險性［44］。不過，TATI 做為癌癥治療的潛在治療靶點，很可能會成為未來癌癥治療的熱點。

4.2 TATI 的信號傳導通路

在腫瘤中TATI 高表達與其較差預(yù)后之間的關(guān)系，可用TATI 作為生長因子發(fā)揮作用來解釋［29，31］，所以TATI 可能通過EGFR 信號傳導通路引起腫瘤的侵襲作用［33，45］。最近，Wang 等［46］在前列腺癌中發(fā)現(xiàn)，SPINK1(TATI)可以通過EGFR 信號傳導通路(包括MAPK、MEK、ERK 途徑)來促進間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)，且可作為體內(nèi)新的預(yù)后標志物;同時Chen等［47］在大腸癌的研究中發(fā)現(xiàn)SPINK1 蛋白可能通過EGFR 信號傳導通路在腫瘤的增殖和惡性轉(zhuǎn)化方面起著重要的作用。

5 結(jié)語與展望

越來越多的研究者在研究SPINK1/Spink3 多重的生物學特性，并致力于更清楚地闡明其中的機制。但是，筆者認為目前仍存在一些問題亟待解決:SPINK1/Spink3 的突變與各種類型的胰腺炎之間是否存在必然的聯(lián)系;SPINK1/Spink3 除了作為生長因子與EGFR 相結(jié)合發(fā)揮作用外，是否存在其他機制;SPINK1/Spink3 作為自噬的的負調(diào)節(jié)因子，與其在部分類型腫瘤內(nèi)高度表達有無重要聯(lián)系，它們的分子信號傳導通路有無關(guān)聯(lián);SPINK1/Spink3 在很多類型腫瘤內(nèi)高度表達，其在腫瘤發(fā)生發(fā)展的過程中是如何作用的，且其主要機制和分子信號傳導通路是怎樣的。

隨著研究的深入，人們會更清楚地認識到SPINK1/Spink3 與胰腺炎及胰腺癌之間的聯(lián)系，為胰腺疾病的預(yù)防和治療提供一個新的思路;SPINK1/Spink3 作為某些腫瘤診斷和預(yù)后評估的標志物，會為腫瘤的病情監(jiān)測和臨床靶向治療提供一個新的方向。

［1］ 李海深，曹云，錢朝南.SPINK 家族與人類疾病［J］.基礎(chǔ)醫(yī)學與臨床，2010，30(5):550 -553.

［2］ Ohmuraya M，Ozaki N，Hirota M，et al. Serine Protease inhibitor kazal type1(SPINK1):Beyond the trypsin inhibitor［J］.Curr Enzyme Inhib，2009，5(2):110 -116.

［3］ Ohmuraya M，Yamamura K.The roles of serine protease inhibitor kazal type1(SPINK1)in pancreatic disease［J］.Exp Anim，2011，60(5):433 -444.

［4］ Masamune A. Recent advances in pancreatology［J］. Front Physiol，2014，5:300.

［5］ Sakata K，Ohmuraya M，Araki K，et al.Generation and analysis of serine protease inhibitor kazal type 3 - Cre driver mice［J］.Exp Anim，2014，63(1):45 -53.

［6］ Boulling A，Witt H，Chandak GR，et al.Assessing the pathological relevance of SPINK1 promoter variants［J］. Eur J Hum Genet，2011，19:1066 -1073.

［7］ Le Marechal C，Chen JM，Le Gall C，et al.Two novel severe mutations in the pancreatic secretory trypsin inhibitor gene(SPINK1)cause familial and/or hereditary pancreatitis［J］.Hum Mutat，2004，23(2):205.

［8］ Kume K，Masamune A，Shimosegawa T，et al.215G N A;IVS3 +2T N Cmutation in the SPINK1 gene causes exon 3 skipping and loss of the trypsin binding site［J］.Gut，2006，55:1214.

［9］ Kiraly O，Wartmann T，Sahin-Toth M.Missense mutations in pancreatic secretory trypsin inhibitor(SPINK1)cause intracellular retention and degradation［J］. Gut，2007，56(10):1433 -1438.

［10］ Boulling A，Le Marechal C，F(xiàn)erec C，et al.Functional analysis of pancreatitis -associated missense mutations in the pancreatic secretory rypsin inhibitor(SPINK1)gene［J］.Eur J Hum Genet，2007，15:936 -942.

［11］ Boulling A，Keiles S，F(xiàn)erec C，et al.Functional analysis of eight missense mutations in the SPINK1 gene［J］.Pancreas，2012，41(2):329 -330.

［12］ Kume K，Masamune A，Ariga H，et al.Do genetic variants in the SPINK1 gene affect the level of serum PSTI?［J］.J Gastroenterol，2012，47(11):1267 -1274.

［13］ Witt H，Luck W，Hennies HC，et al.Mutations in the gene encoding the serine protease inhibitor，Kazal type 1 are associated with chronic pancreatitis［J］.Nat Genet，2000，25(2):213 -216.

［14］ Ling S，F(xiàn)eng T，Jia K，et al. Inflammation to cancer:the molecular biology in the pancreas［J］.Oncol Lett，2014，7(6):1747 -1754.

［15］ Ravi Kanth V，Nageshwar Reddy D.Genetics of acute and chronic pancreatitis:An update［J］. World J Gastrointest Pathophysiol，2014，5(4):427 -437.

［16］ Aoun E，Muddana V，Papachrisyou G，et al.SPINK1 N34S is strongly associated with recurrent acute pancreatitis but is not a risk factor for the first or sentinel acute pancreatitis event［J］. Am J Gastroenterol，2010，105(2):446 -451.

［17］ Pelaez -Luna M，Robles -Diaz G，Canizales -Quinteros S，et al.PRSS1 and SPINK1 mutations in idiopathic chronic and recurrent acute pancreatitis［J］.World J Gastroenterol，2014，20(33):11788 -11792.

［18］ LaRusch J，Whitcomb DC. Genetics of pancreatitis［J］.Curr Opin Gastroenterol，2011，27(5):467 -474.

［19］ Ankur G，Praveer R，Rakesh A，et al. Frequency of SPINK1 N34S mutation in acute and recurrent acute pancreatitis［J］.J Gastroenterol Hepatol，2013，28(3):16.

［20］ Gao Q，Liang N.Integrated traditional Chinese medicine improves acute pancreatitis via the downregulation of PRSS1 and SPINK1［J］.Exp Ther Med，2015，9:947-954.

［21］ Sandhu B，Vitazka P，F(xiàn)erreira - Gonzalez A，et al. Presence of SPINK-1 variant alters the course of chronic pancreatitis［J］.J Gastroenterol Hepatol，2011，26(6):963 -969.

［22］ Cichoz-Lach H，Michalak M，Lis E，et al.The N34S mutation of the SPINK1 gene and alcoholic chronic pancreatitis［J］.Pol Arch Med Wewn，2012，122(6):277 -283.

［23］ Itkonen O，Stenman UH.TATI as a biomarker［J］.Clinica Chimica Acta，2014，20(421):260 -269.

［24］ Mizushima N，Komatsu M. Autophagy:renovation of cells and tissues［J］.Cell，2011，147(4):728 -741.

［25］ Ohmuraya M，Hirota M，Araki M，et al. Autophagic Cell Death of Pancreatic Acinar Cells in Serinen Protease Inhibitor Kazal Type 3 -Deficient Mice［J］.Gastroenterology，2005，129(2):696 -705.

［26］ Chera S，de Rosa R，Galliot B，et al.Silencing of the hydra serine protease inhibitor Kazal1 gene mimics the human SPINK1 pancreatic phenotype［J］. J Cell Sci，2006，119(5):846 -857.

［27］ Hashimoto D，Ohmuraya M，Hirota M，et al.Involvement of autophagy in trypsinogen activation within the pancreatic acinar cells［J］.J Cell Biol，2008，181(7):1065 -1072.

［28］ Mareninova OA，Hermann K，F(xiàn)rench SW，et al. Impaired autophagic flux mediates acinar cell vacuole formation and trypsinogen activation in rodent models of acute pancreatitis［J］.J Clin Invest，2013，123(4):1844.

［29］ Ozaki N，Ohmuraya M，Hirota M，et al.Serine ptotease inhibitor Kazal type 1 promotes proliferation of pancreatic cancer cells through the epidermal growth factor receptor［J］.Mol Cancer Res，2009，7(9):1572 -1581.

［30］ Ozaki N，F(xiàn)ukuchi Y，Tomiyoshi SR，et al.Autophagy regulation in pancreatic acinar cells is independent of epidermal growth factor receptor signaling［J］.Biochem Biophys Res Commun，2014，446(1):224 -230.

［31］ Ateeq B，Tomlins SA，Laxman B，et al. Therapeutic targeting of SPINK1 - positive prostate cancer［J］. Sci Transl Med，2011，3(72):72 ra17.

［32］ Paju A，Stenman UH. Biochemistry and clinical role of trypsinogens and pancreatic secretory trypsin inhibitor［J］.Crit Rev Clin Lab Sci，2006，43(2):103 -142.

［33］ Gouyer V，F(xiàn)ontaine D，Dumont P，et al. Autocrine induction of invasion and metastasis by tumor-associated trypsin inhibitor in human colon cancer cells［J］. Oncogene，2008，27(29):4024 -4033.

［34］ Ogawa M，Yamaguchi N，Mori T，et al.Secretion of pancreatic secretory trypsin inhibitor by cultured human carcinoma cells［J］.J Med，1988，19(1):13 -19.

［35］ Lippolis G，Edsjo A，Stenman UH，et al. A high -density tissue microarray from patients with clinically localized prostate cancer reveals ERG and TATI exclusivity in tumor cells［J］.Prostate Cancer，2013，16(2):145 -150.

［36］ Soon WW，Miller LD，Black MA，et al.Combined genomic and phenotype screening reveals secretory factor SPINK1 as an invasion and survival factor associated with patient prognosis in breast cancer［J］. EMBO Mol Med，2011，3(8):451 -464.

［37］ Grupp K，Diebel F，Sirma H，et al. SPINK1 expression is tightly linked to 6q15 -and 5q21 -deleted ERG -fusion negative prostate cancers but unrelated to PSA recurrence［J］.Prostate，2013，73(15):1690 - 1698.

［38］ Gaber A，Johansson M，Stenman U-H，et al.High expression of tumour-associated trypsin inhibitor correlates with liver metastasis and poor prognosis in colorectal cancer［J］.Br Dent J，2009，100(10):1540 -1548.

［39］ Marshall A，Lukk M，Kutter C，et al.Global Gene Expression profiling reveals SPINK1 as a potential hepatocellular carcinoma marker［J］.PLoS One，2013，8(3):e59459.

［40］ Terry S，Nicolaiew N，Basset V，et al. Clinical value of ERG，TFF3，and SPINK1 for molecular subtyping of prostate cancer［J］.Cancer，2015，121(9):1422 -1430.

［41］ Rink M，Park K，Volkmer BG，et al. Loss of SPINK1 expression is associated with unfavorable outcomes in urothelial carcinoma of the bladder after radical cystectomy［J］.Urol Oncol，2013，31(8):1716 -1724.

［42］ Wendy S，Lance M，Micheal A，et al. Combined genomic and phenotype screening reveals secretory factor SPINK1 as an invasion and survival factor associated with patient prognosis in breast cancer［J］. EMBO Mol Med，2011，3(8):451 -464.

［43］ Koskensalo S，Louhimo J，Hagstrom J，et al. Concomitant tumor expression of EGFR and TATI/SPINK1 associates with better prognosis in colorectal cancer［J］. PLoS One，2013，8(10):e76906.

［44］ Stenman UH. SPINK1:a new therapeutic target in cancer［J］. Clin Chem，2011，57(11):1474 -1475.

［45］ Tomlins SA，Rhodes DR，Yu J，et al. The role of SPINK1 in ETS rearrangement - negative prostate cancers［J］.Cancer Cell，2008，13(6):519 -528.

［46］ Wang C，Wang L，Su B，et al.Serine protease inhibitor kazal type 1 promotes epithelial - mesenchymal transition through EGFR signaling pathway in prostate cancer［J］.Prostate，2014，74(7):689 -701.

［47］ Chen YT，Tsao SC，Yuan SS，et al.Serine protease inhibitor kazal type 1(SPINK1)promotes proliferation of colorectal cancer through the epidermal growth factor as a prognostic marker［J］.Pathol Oncol Res，2015，3.