任 勇，劉 娟，徐 果，湯永謙，劉文衛(wèi)

(湖北文理學(xué)院附屬醫(yī)院、襄陽市中心醫(yī)院1．心血管內(nèi)科;2．骨科，湖北 襄陽 441021)

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病簡(jiǎn)稱冠心病，是一種嚴(yán)重危害人類健康的心血管疾病，主要是由冠狀動(dòng)脈發(fā)生粥樣硬化引起管腔狹窄或閉塞，導(dǎo)致心肌缺血缺氧或壞死而引起的心臟?。?]。冠心病患者冠狀動(dòng)脈病變的嚴(yán)重程度受年齡、血脂異常、吸煙、糖尿病等危險(xiǎn)因素的影響。作為一種與冠狀動(dòng)脈痙攣硬化有關(guān)的炎性標(biāo)志物，C反應(yīng)蛋白(C reactive protein，CRP)是在機(jī)體損傷或炎癥時(shí)肝臟迅速合成的急性時(shí)相蛋白。CRP水平與血脂、血壓、遺傳因素、生活方式、環(huán)境因素等有關(guān)，其中遺傳因素是導(dǎo)致CRP水平個(gè)體差異的關(guān)鍵因素［2]。為了探討冠心病易感性及其與冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重程度，本文以在我院接受治療的470例冠心病患者為研究對(duì)象進(jìn)行研究，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料 選取2009年1月至2013年12月在我院治療的冠心病患者470例，其中男性312例，女性158例，年齡37～80歲，平均(54．28±11．18)歲，同時(shí)選取在體檢中心體檢的健康者157例，其中男性97例，女性60例，年齡35～78歲，平均(53．84±10．26)歲。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)冠心病患者均經(jīng)過冠脈造影確診;(2)患者臨床資料保存完好;(3)所有研究對(duì)象及家屬知情同意，能配合研究。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)嚴(yán)重肝腎功能不全、免疫系統(tǒng)性疾病、腫瘤、既往行冠狀動(dòng)脈搭橋術(shù)等疾病;(2)近3個(gè)月接受過糖皮質(zhì)激素治療;(3)合并細(xì)菌、病毒感染，近1月內(nèi)有手術(shù)或創(chuàng)傷史。根據(jù)冠脈造影結(jié)果，將冠心病組患者再分為粥樣硬化組(冠狀動(dòng)脈狹窄程度＜50%)和冠狀動(dòng)脈病變組(有一支以上主要冠狀動(dòng)脈狹窄程度≥50%)，三組研究對(duì)象在年齡、性別構(gòu)成、體重指數(shù)等一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)，見表1。

1．2 C反應(yīng)蛋白基因多態(tài)性檢測(cè) (1)提取外周血基因組DNA 取2 mL外周靜脈血，加入3．2%檸檬酸鈉抗凝，2 000 rpm離心5 min，分離上層血漿和下層白細(xì)胞細(xì)胞，用酚－氯仿法提取白細(xì)胞基因組DNA，于－70℃下冷凍保存。(2)引物設(shè)計(jì)與合成參照GENEBANK的CRP基因全DNA序列設(shè)計(jì)引物，并委托專門的生物公司合成。(3)目的DNA片段PCR擴(kuò)增使用UVI自動(dòng)凝膠成像及分析系統(tǒng)觀察擴(kuò)增的結(jié)果，并通過DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)判斷是否為314 bp的目的片段。(4)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增產(chǎn)物的限制性酶切 基因型包括TT純合型(314 bp)、GG純合型(234和80 bp)和TC雜合型(314，234和80 bp)。用含溴己錠的3%瓊脂糖凝膠電泳，通過凝膠成像系統(tǒng)儀判斷基因型。抽取部分PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序鑒定。

表1 三組一般資料比較/例(x±s)

1．3 血漿C反應(yīng)蛋白檢測(cè) 在所有行冠狀動(dòng)脈造影術(shù)患者入院24 h內(nèi)，對(duì)每一位患者取靜脈血4 mL，置于試管中，3 000 rpm離心10 min，收集上層血清。選用免疫散射比濁法，使用美國Bec km an CX－V型全自動(dòng)生化儀檢測(cè)CRP。

1．4 冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重程度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重程度評(píng)價(jià)采用改良Gensini評(píng)分對(duì)每支血管病變程度進(jìn)行評(píng)定，冠狀動(dòng)脈左主干狹窄＜25%為2分，25% ～49%為4分，50% ～74%為6分，75% ～99%為8分，100%為10分，冠狀動(dòng)脈左前降支、左回旋支和右冠狀動(dòng)脈狹窄＜25%為1分，25% ～49%為2分，50% ～74%為3分，75% ～99%為4分，100%為5分。每例患者冠狀動(dòng)脈病變程度積分為各分支積分之和。

1．5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用采用SPSS19．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用(x±s)表示，比較使用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較使用χ2檢驗(yàn)，樣本遺傳平衡采用哈迪 －溫伯格平衡(Hardy-Weinberg equilibrium，HWE)，以 P ＜0．05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 CRP基因多態(tài)性檢測(cè) +1059G＞C(rs1800947)酶切分型，檢測(cè)到3種基因型分別為GC型、CC型和GC型，+1444C＞T(rs1130864)酶切分型，檢測(cè)到3種基因型分別為CT型、CC型和TT型，見圖1。

圖1 C反應(yīng)蛋白基因多態(tài)性檢測(cè)

2．2 CRP基因在各組中等位基因及基因型頻率分析 冠心病組和對(duì)照組C反應(yīng)蛋白基因等位基因和基因型頻率分布見表2、表3，通過統(tǒng)計(jì)分析，兩組CRP基因 +1059G＞C(rs1800947)和+1444C＞T(rs1130864)等位基因和基因型頻率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)。

表2 兩組+1059G＞C(rs1800947)等位基因和基因型頻率分布/n(%)

表3 兩組+1444C＞T(rs1130864)等位基因和基因型頻率分布/n(%)

2．3 各組CRP以及Gensini評(píng)分情況 冠狀動(dòng)脈病變組、粥樣硬化組和對(duì)照組CRP和Gensini評(píng)分差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0．05)，其中冠狀動(dòng)脈病變組CRP水平和Gensini評(píng)分最高，分別為(10．13 ±1．22)mmol·L－1和(44．39 ±11．26)分，其次為粥樣硬化組，對(duì)照組最低，見表4。

表4 各組CRP水平以及Gensini評(píng)分(x±s)

2．4 CRP與Gensini評(píng)分相關(guān)性分析 通過Pearson相關(guān)性分析，CRP水平與 Gensini評(píng)分呈正相關(guān)，r=0．770，P=0．016，見圖 2。

圖2 CRP與Gensini評(píng)分相關(guān)圖

3 討論

臨床醫(yī)學(xué)普遍把冠心病看做一種炎癥性疾病，糖尿病、血脂異常等是患者冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重程度的主要影響因素。國內(nèi)外研究報(bào)道CRP不僅可以有效地預(yù)測(cè)心血管事件，而且對(duì)炎性反應(yīng)和動(dòng)脈粥樣硬化有一定的促進(jìn)作用［3]。CRP是機(jī)體出現(xiàn)損傷、感染、炎癥時(shí)肝細(xì)胞在白細(xì)胞介素－6的刺激下迅速合成一種急性期蛋白，同時(shí)有研究者指出［4]受損的冠狀動(dòng)脈也可以產(chǎn)生CRP。CRP具有穩(wěn)定性好、不隨時(shí)間和季節(jié)周期性變化、不受飲食影響、檢測(cè)技術(shù)成熟且成本低廉等優(yōu)點(diǎn)［5]，因此任何時(shí)刻C反應(yīng)蛋白的測(cè)定值均具有臨床應(yīng)用價(jià)值。遺傳、體重指數(shù)、血壓、血脂等多種因素共同決定著CRP基礎(chǔ)水平，其中遺傳因素在導(dǎo)致個(gè)體基礎(chǔ)CRP水平方面所起的作用達(dá)到35% ～40%。因此臨床上有必要進(jìn)一步探討CRP基因多態(tài)性和冠心病患者的冠狀動(dòng)脈病變程度的關(guān)系。

動(dòng)脈粥樣硬化因動(dòng)脈外膜上聚集著黃色粥樣脂質(zhì)而得名，一般情況下其發(fā)展過程為從動(dòng)脈內(nèi)膜開始，然后復(fù)合糖類和脂質(zhì)逐漸聚集，出血、血栓形成，纖維組織增生和鈣質(zhì)沉著，并有動(dòng)脈中層的逐漸退變和鈣化［6]。CRP水平的高低直接反應(yīng)疾病炎癥反應(yīng)的程度，血清中CRP水平越高表示冠狀動(dòng)脈內(nèi)粥樣硬化斑塊的局部炎癥反應(yīng)就越強(qiáng)、范圍越大，即冠狀動(dòng)脈的病變程度越嚴(yán)重。CRP主要集中在粥樣斑狀里，粥樣脂核的大小、纖維帽薄弱斑塊的數(shù)量以及巨噬細(xì)胞的密度都對(duì)其有一定的影響［7]。CRP可以通過與脂蛋白、溶血卵磷脂等配體結(jié)合激活補(bǔ)體系統(tǒng)［8]，釋放大量可以損傷血管內(nèi)膜的反應(yīng)蛋白和反應(yīng)復(fù)合物。血管損傷主要由高糖化蛋白水平、血管剪切應(yīng)力、吸煙等因素引起，高水平的CRP對(duì)此過程一定的促進(jìn)作用;同時(shí)內(nèi)皮細(xì)胞被激活，有助于增加細(xì)胞間黏附分子(ICAM-1)、細(xì)胞間黏附分子(ICAM-1)、E選擇素、單核細(xì)胞誘導(dǎo)蛋白－1(MCP-1)的表達(dá)，導(dǎo)致內(nèi)皮功能障礙誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化［9－11]。CRP有利于單核細(xì)胞誘導(dǎo)蛋白MCP-1和內(nèi)皮黏附分子的增加［12]，進(jìn)而對(duì)單核細(xì)胞的產(chǎn)生和活化有一定的促進(jìn)作用，并通過誘導(dǎo)單核細(xì)胞合成組織因子產(chǎn)生促凝血作用。CRP可以加速纖維蛋白的合成，以及促進(jìn)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生促血小板凝集素、纖維蛋白原、組織因子，并通過激活組織纖溶酶原激活物抑制物(PAI-1)和凝血相關(guān)因子使機(jī)體纖溶和凝血機(jī)制失衡，從而促進(jìn)冠狀動(dòng)脈內(nèi)血栓形成［13－14]。本研究發(fā)現(xiàn)所有研究對(duì)象中冠狀動(dòng)脈病變組CRP水平和Gensini評(píng)分最高，其次為粥樣硬化組，對(duì)照組最低，且冠狀動(dòng)脈病變組、粥樣硬化組和對(duì)照組CRP和Gensini評(píng)分差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)，但C反應(yīng)蛋白基因多態(tài)性與冠心病易感性無關(guān)。由此可見，CRP可以直接作用于動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生過程。

綜上所述，C反應(yīng)蛋白基因多態(tài)性與冠心病的易感性無直接的關(guān)系，但血清CRP水平與冠狀動(dòng)脈的病變程度呈正相關(guān)。CRP作為一種急性時(shí)相蛋白，臨床上檢測(cè)技術(shù)成熟、快捷且價(jià)格低廉，可以作為預(yù)測(cè)冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重程度、病情以及預(yù)后的指標(biāo)在臨床上推廣應(yīng)用。

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